STR基因座D1S518、D4S2639、D15S817汉族人群遗传多态性调查

目的分析武汉地区汉族人群D1S518、D4S2639、D15S8173个短串联重复序列(STR)基因座遗传多态性,探讨其在法医学检验中的应用价值。方法应用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带等技术,对各样品进行3个STR基因座分型,调查武汉地区汉族人群3个STR基因座遗传多态性基因频率分布。结果D1S518基因座观察到8个等位基因,24个基因型;D4S2639基因座观察到9个等位基因,32个基因型;D15S817基因座观察到7个等位基因,18个基因型,3个STR基因座的杂合度分别为0.7547、0.8165、0.7602;多态性信息含量分别为0.7290、0.7568、0.7222。结论D1S518、D4S2639、D15S8173个STR基因座基因频率分布与Hardy-Weinberg平衡吻合良好,在武汉地区汉族人群中呈现较高的遗传多态性,属于高信息度遗传标记。

D1S549基因座分型标准物的克隆制备方法及其群体遗传学研究

目的 采用分子克隆技术建立制备大量优质标准 STR基因座等位基因分型标准物的方法，解决长期困扰 STR分型上存在的准确性和标准化问题。方法 先用 PCR扩增出 D1S549基因座的 8个等位基因片段，将其插入 pUC重组质粒中，经 DNA测序分析证实插入片段的结构及大小，用国际标准将插入的等位基因片段进行命名，最后经转染、扩大培养，扩增及再鉴定后制备出标准的 D1S549等位基因分型标准物。结果应用此分型标准物，调查了成都地区汉族 ,甘肃回族及新疆维族群体 D1S549基因座的基因型分布频率。结论 表明该法制备的 STR基因座等位基因分型标准物适用于法医学鉴定实践， D1S549基因座是一个适合我国群体分析和法医学遗传分析的遗传标记。

应用MVR-PCR和银染法分析河北汉族人群D1S8基因座DNA结构多态性

研究D1S8基因座重复序列内部的变异，并进行数字编码。应用MVR－PCR和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法对240名河北汉人无关个体进行检测。结果每个个体得到约30个数字编码，未发现任何两无关个体所有编码相同，30个编码完全相同的概率为3．55×10－11。3种重复单位a-型、t-型、o-型出现的频率分别为54.77％、42．54％、2．69％。为小卫星变异重复序列的研究及其在法医实践中的应用提供了一种新方法。

D_(17)S_(30),D_1S_(80)和ApoB基因座多态性分布调查

应用ＰＣＲ技术和小型聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色检测法，对云南白族人群和云南汉族人群Ｄ１７Ｓ３０，Ｄ１Ｓ８０和ＡｐｏＢ基因座遗传多态性进行了调查．发现白族人群Ｄ１７Ｓ３０基因座有１１个等位基因，其频率范围为０００２７～０１８１８；Ｄ１Ｓ８０基因座有１９个等位基因，频率范围在０００４３～０２４１４．汉族人群Ｄ１７Ｓ３０基因座有１２个等位基因，其频率范围为０００４８～０１９２０；Ｄ１Ｓ８０基因座有１８个等位基因，频率范围为０００３０～０２６３３；ＡｐｏＢ基因座有１２个等位基因，频率范围为０００３９～０４６４８．

国内首次发现及确认D1S1656基因座等位基因7鉴定1例

1案例1.1简要案情因申报北京户口,母亲王某与孩子需进行亲子鉴定。采集二人指尖血备检。1.2 DNA提取用DNA IQ^(TM)试剂盒(美国Promega公司)在工作站(美国Beckman公司NX)上提取上述两人血样DNA。1.3常规检验采用PowerPlex^(■)21 System(美国Promega公司)进行PCR复合扩增,PCR反应体系和循环参数按说明书要求。使用3130XL型遗传分析仪(美国AB公司)电泳分离扩增产物。GeneMapper ID v3.2软件进行基因座分型。

广西汉人D1S80基因座扩增片段长度多态性

在人类基因组中,存在许多具有高度多态性的可变数目重复序列(VNTR.Variable number of tandemrepeat),这类遗传标记已广泛应用于法医学、群体遗传学及器官移植等方面。本文作者调查了广西汉族人群D1S80基因座频率分布资料,报道如下。

FAM羧基荧光素修饰引物检测VNTR基因座遗传多态性

FAM羧基荧光素(Carboxyfluorescein),是荧光素衍生物的一种,5FAM较6FAM更经常使用.Carboxyfluorescein5succimidyl ester,即5FAM(NHS)广泛存在于荧光标记试剂盒.FAM与氨基反应快速,产物也更稳定.FAM适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/518nm(pH=9.0),具有荧光素衍生物的普遍特性,在水中稳定.5FAM主要应用于片段长度分析中引物修饰和DNA自动测序中标记其中的d/ddCTP(ABI公司),也经常用于PCR产物定量,核酸探针等.……

党参白粉病新病原鉴定及其分生孢子的萌发特性

以甘肃省陇西县采集的党参白粉病病叶为试材,采用形态学特征观察及rDNA-ITS序列、28S D1/D2基因测序,对其病原菌进行种类鉴定,并采用悬滴法进行孢子萌发试验。以期明确该地区党参白粉病的病原菌种类及其分生孢子的萌发特性并为病害防治提供参考依据。结果表明:该病原菌菌丝粗2~8μm,附着胞乳头形;闭囊壳近球形,附属丝5~17根,多生于子囊果一侧,长23~131μm,为子囊果直径的0.19~1.51倍;内含一个子囊,子囊眼直径4~15μm,子囊孢子8个。该菌分生孢子萌发最佳温度为25℃,最适宜pH为6,参与试验的4种碳源对孢子萌发无影响,持续光照40 h对分生孢子的萌发有较大的抑制作用。形态特征与小蓬草单囊白粉菌(Podosphaera erigerntis-canadensis)一致。经MEGA 6.0软件分析,其rDNA-ITS序列、28S D1/D2基因均与P.erigerntis-canadensis聚在一起,与登录号为KJ660809和AB462764的序列同源性分别为99.62%和99.82%,经检索党参病害,由P.erigerntis-canadensis引起的党参白粉病国内尚鲜见报道。

猪流行性腹泻病毒黏液SIgA抗体ELISA检测方法的建立

旨在建立一种检测黏液中猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性SIgA的ELISA方法,从而评价PEDV黏膜免疫水平。首先将PEDV的S1D基因(534~789 aa)克隆至质粒载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,其表达产物以包涵体形式存在。Western-blot验证蛋白大小为32 ku,且具有抗原活性。再以8 mol/L尿素变性蛋白,经纯化、梯度复性后作为包被抗原蛋白,通过优化条件初步建立检测鼻腔和口腔黏液中PEDV特异性SIg A抗体的间接ELISA,并确定其最佳抗原包被浓度为2μg/m L;鼻腔黏液最佳稀释度为1∶1,最佳封闭液为50 g/L脱脂乳;口腔黏液最佳稀释度为1∶2,最佳封闭液为30 g/L BSA;酶标抗体最佳稀释度均为1∶2 000。最后应用该方法分别检测了84份已免疫猪的口腔、鼻腔黏液,其结果与以纯化的PEDV包被的间接ELISA相比,符合率达到95.2%。本研究中建立的检测黏液中PEDV特异性SIgA的方法简便快速,具有较好的敏感性、特异性,这为评价PEDV黏膜免疫水平提供了依据和检测标准。