S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照(P<0.05),并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇(S1P)的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。

KLF2调控S1P1~S1P5对类中性粒细胞迁移的作用机制

目的研究KLF2是否通过调控S1P1~S1P5影响类中性粒细胞迁移。方法构建携带有si RNA的慢病毒载体,特异性沉默KLF2基因,利用细胞迁移实验检测类中性粒细胞迁移情况,利用蛋白印迹法、实时PCR分别检测KLF2、S1P1~S1P5蛋白和m RNA表达情况。结果(1)KLF2病毒干扰组较空白组、空载病毒组,迁移率明显减少(P<0.05),S1P从0μmol/L至0.1μmol/L,随着浓度的增加,各组类中性粒细胞迁移率都明显增加(P<0.05),S1P从0.1μmol/L至0.4μmol/L,随着浓度的增加,各组类中性粒细胞迁移率基本相同(P>0.05);(2)KLF2病毒干扰组与空白组、空载病毒组比较,S1P1蛋白及m RNA相对表达量减少(P<0.05);(3)KLF2病毒干扰组与空白组、空载病毒组比较,S1P2、S1P3、S1P4、S1P5 m RNA表达量无差异(P>0.05)。结论S1P对类中性粒细胞迁移的最佳浓度为0.1μmol/L;KLF2通过正调控S1P1表达,促进类中性粒细胞迁移;在类中性粒细胞中KLF2不调控S1P2~S1P5表达。

治疗多发性硬化症新药——盐酸奥扎莫德(ozanimod hydrochloride)

多发性硬化症(MS)是一种受免疫系统攻击、发生中枢神经系统白质脱髓鞘病变、使信号通道在大脑和身体之间传导受阻的自身免疫性疾病。常累及大脑、脊髓白质、皮质下结构、脑干、小脑和视神经等。随着病情进展,该病最终可导致患者肌肉协调性丧失,视力减弱、功能丧失。奥扎莫德(ozanimod)最初由加州美国斯克利普斯研究所(The Scripps Research Institute,TSRI)研发,2009年4月,TSRI与美国Receptos生物制药公司签订独家许可协议,后者获得新型1-磷酸神经鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)及S1P1和S1P5双重受体调节药专利权。协议规定,若Receptos公司不能合理使用和尽力开发奥扎莫德并使之商业化,TSRI有权终止许可协议。2015年8月,Receptos公司被美国Celgene细胞基因公司收购。Celgene公司将奥扎莫德开发用于治疗复发型多发性硬化症、溃疡性结肠炎和克罗恩病(Crohn's)等自身免疫性疾病。2018年2月,Celgene公司曾向美国食品药品管理局(FDA)提交奥扎莫德胶囊治疗MS新药上市申请(NDA),因未充分说明临床前和临床试验药理研究存在活性代谢物CC112273的性质,被FDA拒绝接受NDA。2019年11月,Celgene公司被美国百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb,BMS)收购。Celgene公司补充奥扎莫德动物实验长期毒性等一系列资料及2项Ⅲ期临床试验完整数据,于2019年3月13日再度提交NDA,FDA于2020年3月25日批准盐酸奥扎莫德胶囊上市,用于治疗成人复发型MS,包括临床孤立综合征(CIS)、复发缓解型多发性硬化症(RRMS)及继发进展型多发性硬化症(SPMS)。该药商品名为Zeposia^®。该文对盐酸奥扎莫德胶囊非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

基于网络药理学与肠道菌群的柏子仁脂肪油改善Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的作用研究

研究柏子仁脂肪油(Platycladi Semen oil,SP)对Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的保护作用及其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)提供理论依据。雄性昆明(KM)小鼠随机分为对照组、模型组(脑部注射200μmol·L-1Aβ_(25-35)溶液,0.15μL·g^(-1))、阳性药多奈哌齐组(10 mg·kg^(-1))及柏子仁脂肪油低、高剂量(0.5、1 mL·kg^(-1))组。探究各组小鼠的学习记忆功能、神经元损伤、Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡、氧化应激相关指标、免疫细胞及鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)通路相关蛋白或mRNA水平。接着利用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析SP中的成分,并通过网络药理学、肠道菌群(gut mircrobiota,GM)16S rDNA测序及分子对接技术探讨SP干预AD的作用机制。结果显示SP可改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的学习记忆功能,减少海马神经元损伤,降低脑内Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡和氧化应激相关指标的水平,并维持小鼠机体免疫细胞和GM的稳态。网络药理学和GM测序分析显示,SP对AD的治疗作用与鞘脂通路相关。同时,(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸是SP中含量最高的2种成分,与SPHK1和S1PR5有较好的结合活性。因此,推测SP通过调节肠道菌群,抑制SPHK1/S1P/S1PR5通路来发挥抗凋亡和抗氧化作用,从而改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的脑损伤;并且(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸可能是SP发挥抗AD作用的物质基础。