鸦胆子苦醇调节SPHK1/S1P/S1PR3信号通路对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨鸦胆子苦醇调节鞘氨醇激酶1(SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)/鞘氨醇-1-磷酸酯受体3(S1PR3)信号通路对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响。方法将体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV-3随机分为对照组、鸦胆子苦醇组、SPHK1过表达组、鸦胆子苦醇+空载组、鸦胆子苦醇+SPHK1过表达组,检测各组细胞活力、克隆形成率、迁移数、侵袭数、凋亡率以及增殖相关蛋白[骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(C-myc)]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、上皮间质转化(EMT)相关蛋白[上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)]及SPHK1、S1P、S1PR3蛋白表达量。采用SKOV-3细胞构建裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇中剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、SPHK1过表达组、鸦胆子苦醇高剂量+空载组、鸦胆子苦醇高剂量+SPHK1过表达组,检测各组移植瘤生长情况;随机分为对照组、鸦胆子苦醇组、SPHK1过表达组、鸦胆子苦醇+空载组、鸦胆子苦醇+SPHK1过表达组,检测各组移植瘤组织中增殖、凋亡、EMT及SPHK1/S1P/S1PR3信号通路相关蛋白表达量。结果体外实验显示,与对照组相比,鸦胆子苦醇组细胞活力、克隆形成率、迁移数、侵袭数和C-myc、Bcl-2、Ncadherin、SPHK1、S1P、S1PR3蛋白表达量均显著降低(P<0.05),凋亡率和Bax、E-cadherin蛋白表达量均显著升高(P<0.05);过表达SPHK1可减弱鸦胆子苦醇对SKOV-3细胞上述指标的影响。体内实验显示,与对照组相比,鸦胆子苦醇低、中、高剂量组裸鼠干预21 d后的移植瘤体积均显著降低并呈剂量依赖性(P<0.05);高剂量鸦胆子苦醇还可显著降低移植瘤组织中C-myc、Bcl-2、Ncadherin、SPHK1、S1P、S1PR3蛋白表达量(P<0.05),显著升高Bax、E-cadherin蛋白表达量(P<0.05);过表达SPHK1可减弱鸦胆子苦醇对移植瘤组织上述指标的影响。结论鸦胆子苦醇可通过下调SPHK1/S1P/S1PR3信号通路蛋白表达,进而抑制卵巢癌细胞体外增殖、克隆、EMT、迁移及侵袭并诱导其凋亡,还可抑制卵巢癌细胞在裸鼠体内的生长,最终抑制其恶性生物学行为,对卵巢癌起到显著的抗癌功效。

槐耳多糖调节SPHK1/S1P/S1PR3信号通路对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究槐耳多糖(HP)调节SPHK1/S1P/S1PR3信号通路对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:MTT检测槐耳多糖(0、25、50、100、200、400μg/mL)处理的宫颈癌细胞活力,筛选最佳药物浓度。实验分为对照组(Control组)、槐耳多糖低、中、高浓度组(HP-L、HP-M、HP-H组)和槐耳多糖高浓度+SphK1激活剂K6PC-5组(HP-H+K6PC-5组),观察细胞增殖、迁移和侵袭情况;western blot检测SPHK1、S1P、S1PR3、Snail、N-cadherin、E-cadherin蛋白水平。结果:处理24、48、72h后,与0μg/mL比较,50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的HP处理的细胞活力显著降低(P<0.05)。HP-L组、HP-M组和HP-H组细胞Edu阳性率、侵袭细胞数、划痕愈合率及Snail、N-cadherin、SPHK1、S1P、S1PR3水平显著低于Control组(P<0.05),E-cadherin水平显著升高(P<0.05)。HP-H+K6PC-5组细胞Edu阳性率、侵袭细胞数、划痕愈合率及Snail、N-cadherin、SPHK1、S1P、S1PR3水平显著高于HP-H组(P<0.05),E-cadherin水平显著降低(P<0.05)。结论:HP可能通过抑制SPHK1/S1P/S1PR3信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-142-3p通过调控S1PR3影响膀胱癌干细胞的干性

背景:研究发现miR-142-3p低表达于多种肿瘤组织和细胞系中,并且有研究发现TUG1/miR-142/ZEB2轴可抑制膀胱癌增殖并诱导其凋亡。目的:观察miR-142-3p在膀胱癌干细胞中的表达水平,探讨其对S1PR3的靶向调控作用及对膀胱癌干细胞干性的影响。方法:从新鲜人膀胱癌组织中分离培养原代膀胱癌细胞,采用流式细胞仪筛选出CD44^+细胞与CD44^-细胞,Western-blot检测2种细胞中Nanog、Oct4蛋白的表达,qRT-PCR检测2种细胞中miR-142-3p基因的表达。将miR-142-3p mimic(实验组)、miR对照质粒(对照组)分别转染至CD44^+细胞,48 h后,采用MTS实验检测细胞增殖能力,软琼脂克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组细胞转移能力,Western-blot检测细胞中pPi3k和pAkt蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中S1PR3基因表达。将稳定转染的2种细胞分别注射至裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)右侧腋下,4周后检测肿瘤体积。将S1PR3-突变型+miR-142-3p mimic、S1PR3-突变型+miR对照质粒、S1PR3-野生型+miR-142-3p mimic、S1PR3-野生型+miR对照质粒分别转染至CD44^+细胞,48h后检测各组荧光素酶活性。结果与结论:①CD44^+细胞中miR-142-3p基因表达显著低于CD44-细胞(P <0.05);CD44^+细胞中Nanog、Oct4蛋白表达显著高于CD44^-细胞,证实CD44^+细胞为膀胱癌干细胞;②实验组膀胱癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力及转移能力明显低于对照组(P <0.05);③实验组膀胱癌干细胞中pPi3k和pAkt蛋白表达弱于对照组,S1PR3基因表达低于对照组(P <0.05);④实验组裸鼠体内肿瘤体积小于对照组(P <0.05);⑤与相比,S1PR3-突变型+miR-142-3p mimic组荧光素酶活性显著低于S1PR3-突变型+miR对照质粒组(P <0.05),S1PR3-野生型+miR对照质粒组和S1PR3-野生型+miR-142-3p mimic组荧光素酶活性无差异(P> 0.05);⑥结果表明,miR-142-3p在膀胱癌干细胞中低表达,其可能通过负调控S1PR3下调PI3K/AKT信号通路来抑制膀胱癌干细胞的干性。

敲除S1PR3可缓解小鼠的急性肺损伤:基于抑制MAPK信号通路

目的探讨敲除S1PR3是否通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)途径改善脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤。方法用LPS诱导小鼠急性肺损伤模型。雄性C57BL/6J和S1PR3敲除小鼠,随机分为4组:C57 NS组(C57,生理盐水处理)、C57LPS组(C57,LPS诱导)、S1PR3^(-/-)NS组(S1PR3敲除鼠,生理盐水处理)、S1PR3^(-/-)LPS组(S1PR3敲除鼠,LPS诱导),8只/组。RT-qPCR检测S1PR3,IL-β和IL-18表达,HE染色检测肺部组织损伤,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测caspase-1,GSDMD,p-JNK,p-ERK p-p38蛋白表达水平。同时,Ⅱ型肺泡上皮细胞(MLE-12细胞)铺板后分为4组:PBS组、LPS组、CYM5541组(仅加入S1PR3激动剂)、CYM5541+LPS组(加入S1PR3激动剂+LPS),检测各组细胞焦亡水平及MAPK信号通路分子的表达水平。结果急性肺损伤小鼠肺组织S1PR3表达上调(P<0.001);血清IL-1β和IL-18因急性肺损伤而明显升高(P<0.05)。急性肺损伤小鼠因敲除S1PR3肺出血、炎症渗出明显改善,肺湿干比重下降,细胞凋亡比例和焦亡相关蛋白如clvcaspase-1,GSDMD表达均降低(P<0.05)。MLE-12细胞因加入S1PR3激动剂,细胞焦亡相关蛋白表达均升高(P<0.05)。此外,MAPKs家族(JNK,ERK p38)的激活因S1PR3敲除后受到抑制,因加入S1PR3激动剂而表达明显升高(P<0.05)。结论敲除S1PR3可通过抑制MAPK信号通路改善急性肺损伤。

靶向S1PR3基因shRNA慢病毒表达载体构建及功能鉴定

目的构建靶向小鼠S1PR3基因的sh RNA慢病毒表达载体,并验证其对内皮祖细胞迁移能力的影响。方法依照sh RNA设计原则,合成对应的sh RNA序列,将其克隆到PHBLV载体中,使用三载体系统进行病毒包装,收集制备成功的病毒,并用荧光显微镜法测定病毒滴度,使用病毒感染EPC后,测定各组细胞中S1PR3蛋白表达情况,选择合适的病毒感染EPC后,测定其对EPC迁移能力的影响。结果成功将sh RNA序列克隆到慢病毒表达载体PHBLV-U6-RFP,表达质粒与辅助质粒共转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达红色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠EPC,可以不同程度干扰细胞中S1PR3蛋白表达,S1PR3蛋白表达受到抑制后,EPC的迁移能力明显减弱。结论我们成功构建了可以有效干扰S1PR3表达的慢病毒载体,并初步观察了其对EPC细胞的迁移能力的影响,为后续进一步调控S1PR3相关的细胞功能的研究奠定了基础。

推拿㨰法对兔骨骼肌急性钝挫伤组织TNF-α及SphK1、S1PR3表达的影响

目的观察推拿㨰法干预对骨骼肌急性钝挫伤兔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及鞘氨醇激酶-1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)表达的影响,探讨㨰法治疗骨骼肌钝挫伤的作用机制。方法将15只新西兰兔随机分为空白组、模型组和㨰法组,每组5只。模型组和㨰法组采用自制重力锤打击装置制备兔股四头肌急性钝挫伤模型。造模成功后第7日开始干预,㨰法组用自制㨰法按摩器在股四头肌损伤处进行㨰法按摩,3 min/次,每日上下午各1次,连续3 d,空白组和模型组捆绑相同时间。HE、Masson染色观察股四头肌损伤部位病理变化,ELISA检测股四头肌组织TNF-α含量,Western blot检测股四头肌组织SphK1、S1PR3蛋白表达。结果模型组肌纤维变形断裂,肌细胞坏死严重,肌膜模糊、不完整,且有肌纤维溶解后形成的空泡结构,炎性细胞浸润较明显,可见少量核居中的新生肌纤维,有大量胶原纤维;与空白组比较,模型组股四头肌组织TNF-α含量明显增加(P<0.01),SphK1、S1PR3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,㨰法组炎性细胞浸润明显减轻,可见大量细胞核居中且大小不等的新生肌纤维及多核肌管,胶原纤维明显减少;股四头肌组织TNF-α含量明显减少(P<0.05),SphK1、S1PR3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论㨰法干预能通过下调骨骼肌急性钝挫伤兔受损组织TNF-α含量及SphK1、S1PR3表达,降低组织炎症反应,减缓纤维化,进而促进骨骼肌损伤修复。

S1PR3特异性激动肽GPS-725.017对小鼠急性肺损伤的作用研究

目的设计新型S1PR3特异性激动剂GPS-725.017,并研究其通过促进巨噬细胞对细菌的清除能力,保护急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用。方法以来源于S1PR3受体胞内区段的短肽为母核结构,在其N末端修饰正亮氨酸(norleucine,Nle)和肉豆蔻酸(myristic acid,myr),命名为GPS-725.017。实验小鼠分为假手术组、溶剂组和GPS-725.017治疗组,每组5或10只,各组气管内注射5×10^(6) CFU(colony forming unit)大肠杆菌诱导急性肺损伤,GPS-725.017治疗组按10 mg/kg剂量给予GPS-725.017治疗。观察各组小鼠48 h生存率;造模5 h后,检测外周血及肺脏细菌负荷及炎性因子,Western blot法测定肺泡巨噬细胞内Vps34蛋白含量;造模12 h后,取肺组织进行H&E染色,并病理学评分。结果与溶剂组相比,GPS-725.017治疗组小鼠生存率显著提高(P<0.01),血液、肺泡灌洗液细菌CFU低于溶剂组(P<0.001),血液、肺泡灌洗液中的TNF-α、IL-1β水平显著低于溶剂组(P<0.001),肺泡巨噬细胞内Vps34蛋白表达水平明显高于溶剂组(P<0.01),治疗组肺脏病理学损伤较溶剂组明显减轻(P<0.001)。结论S1PR3特异性激动剂GPS-725.017可以特异性激动肺泡巨噬细胞膜上S1PR3受体,上调胞内Vps34蛋白表达水平,从而促进肺泡巨噬细胞清除细菌,明显减轻ALI小鼠的肺部损伤程度,显著提高ALI小鼠的生存率。

m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对大鼠S1PR3基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响

[目的]明确m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对含S1PR3基因3′-非编码区(3′-UTR)双荧光素酶报告基因的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增S1PR3基因3′-UTR中含有m^(6)A修饰位点的目的片段。利用重叠延伸PCR方法将三个靶序列GGACT、GGACT、AGACT中的第三位A突变为C,并将野生型S1PR3-3′-UTR片段和突变型S1PR3-mut-3′-UTR片段分别正向插入到pmiR-RB-ReportTMvector载体中。将pcDNA3.1-ALKBH5或空载体pcDNA3.1与野生型和突变型双荧光素酶报告载体分别共转染PC12细胞,并检测荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含S1PR3基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-mut-3′-UTR。荧光素酶活性分析表明与空载体pcDNA3.1组相比,ALKBH5可显著降低野生型及突变型C1和C2报告载体荧光素酶的活性(P<0.05),而对突变型C3没有影响(P>0.05)。[结论]初步证明S1PR3基因3′-UTR区是去甲基化酶ALKBH5的作用靶点,ALKBH5通过识别S1PR3基因3′-UTR区C3处的m^(6)A修饰位点而降低pmiR-S1PR3-3′-UTR荧光素酶的活性。

Myristoyl—glycine修饰的S1PR3特异性激动肽跨膜激活效应研究

目的拟通过合成1-磷酸鞘氨醇受体3（sphingosine 1-phosphate Receptor 3, S1PP,3）特异性激动肽并经肉豆蔻酰甘氨酸（myristoyl—glycine）修饰，研究其激活丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases, MAPKs）通路的效应。方法设计合成源自七次跨膜受体S1PR3胞内第2个环的短肽，并经Myristoyl—glycine修饰，命名为GPS-725．017。Westernblot检测GPS-725．017对单核巨噬细胞（THP一1）MAPKs通路关键分子细胞外调节蛋白激酶 （ extracellularregulated protein kinase, ERK）及应激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase, JNK）磷酸化水平的影响。组内或组问不同浓度和不同时间点蛋白灰度值比较采用多因素方差分析。结果与溶剂对照组相比，30Ixmol／L或50μmol／L的GPS-725．017处理THP-1细胞10min，P-ERK水平显著升高[30μmol／L组：（3．10±0．27）vs．（7．98±0．45），P〈0．01；50μmol／L组：（4．78±0．44）vs．（25．98±2．32），P〈0．01]；50μmo]／L的GPS-725．017处理THP-1细胞5min、10min、20min和30min，与溶剂组相比，各时间点p-ERK或p-JNK水平均显著上升（均为P〈0．01）。结论源于S1PR3胞内第2个环并经Myristoyl—glycine修饰的短肽GPS-725．017，可跨膜显著活化MAPKs通路，本研究为临床靶向调控S1PR3，治疗炎症及脓毒症提供理论依据。

鞘氨醇-1-磷酸对肺成纤维细胞活性的作用及其机制

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)对肺成纤维细胞活性的影响及其可能机制。方法 以0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h,筛选最佳干预浓度;随后以确定的S1P干预浓度刺激细胞0,24,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖。将肺成纤维细胞分为对照组、S1P组、JTE013+S1P组、CAY10444+S1P组、control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组。S1P组以1μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h;JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞先分别用10μmol/L选择性S1P受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2, S1PR2)拮抗剂JTE013或10μmol/L选择性S1PR3拮抗剂CAY10444预处理1 h后再给予1μmol/L S1P干预24 h;control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组细胞先分别转染control siRNA或YAP siRNA,再给予1μmol/L S1P干预24 h。CCK-8法检测细胞增殖;免疫印迹法检测t-Yes相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)、p-YAP、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)水平。结果 S1P干预后,肺成纤维细胞增殖随浓度和时间依赖性增加(P<0.05),筛选最佳干预浓度为1μmol/L。与对照组相比,S1P组细胞p-YAP水平减少(P<0.001),α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平增多(P<0.05)。与S1P组相比,JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞p-YAP水平均增多(P<0.05),α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平均减少(P<0.05),细胞增殖均受到抑制(P<0.05);细胞增殖均受到抑制(P<0.05);且JTE013的作用效果较CAY10444显著(P<0.05);YAP siRNA+S1P组细胞α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平,以及细胞增殖均降低(P<0.05)。结论 S1P通过与S1PR2/3结合激活YAP,诱导肺成纤维细胞活化。

加兰他敏调控S1PR3改善老年急性脑出血大鼠CCL2-CCR2轴介导的血脑屏障损伤

目的探讨加兰他敏对老年急性脑出血大鼠趋化因子C-C亚家族配体(CCL)2-趋化因子C-C亚家族受体(CCR)2轴介导的血脑屏障损伤的影响。方法将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、加兰他敏组各12只。加兰他敏组腹腔注射10 mg/kg加兰他敏,每日一次持续1 w,其余组给予等量生理盐水。比较各组脑组织神经系统评分及脑含水量。对各组脑组织进行伊文思蓝(EB)染色。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清和脑组织中鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)3配体(S1P)含量,定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组脑组织中S1PR3 mRNA表达。免疫荧光检测各组脑组织中S1PR3分别与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元标志物神经核抗原(NeuN)、小胶质细胞标志物小胶质细胞活化抗原(Iba)-1和血管内皮细胞标志物血管内皮细胞黏附分子-1(CD31)的共定位情况。Western印迹检测各组脑组织中CCL2、磷酸化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)、细胞黏附分子(ICAM)-1和紧密连接蛋白(ZO)-1表达。结果与假手术组比较,模型组脑含水量、脑组织EB渗出率、血清及脑组织中S1P含量、GFAP/S1RP3、NeuN/S1RP3、Iba-1/S1RP3阳性表达、CD31/S1RP3重合区域、CCL-2、p-p38 MAPK、ICM-1蛋白表达明显升高,Garcia评分、ZO-1蛋白表达明显减少(P<0.01,P<0.001)。与模型组相比,加兰他敏组Garcia评分、ZO-1蛋白表达明显增多,脑含水量、脑组织EB渗出率、血清及脑组织中S1P含量、GFAP/S1RP3、NeuN/S1RP3、Iba-1/S1RP3双阳性表达、CD31/S1RP3重合区域、CCL2、p-p38 MAPK、ICAM-1蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论加兰他敏通过调控S1PR3改善老年急性脑出血大鼠CCL2-CCR2轴介导的血脑屏障损伤。

肺转移前微环境体外模型的建立与双参颗粒干预机制

目的:构建肺转移前微环境体外模型,观察S1pr1-stat3信号通路在模型成熟过程中的作用,同时验证双参颗粒对该模型的干预作用,探讨其可能的机制。方法:体外构建小鼠Lewis肺癌细胞和原代骨髓细胞共培养模型,并用S1pr1激活剂SEW2871干预髓系细胞分化的过程,观察相关蛋白MMP9、Lox、Version及Fibronectin的表达情况,并检测模型中骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)细胞的分化情况及双参颗粒对模型的干预效果。结果:S1pr1可以明显促进肺转移前微环境体外模型的成熟构建,S1pr1-stat3是该模型成熟的关键信号通路,双参颗粒不仅显著降低模型中该信号通路相关蛋白的表达,同时对微环境成熟的关键蛋白的表达也具有抑制作用,还可显著降低该信号通路相关的骨髓细胞向MDSCs细胞的分化(P<0.05),同时对转移前微环境中部分肿瘤源性细胞因子如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转化生长因子(TGF-β)有显著抑制作用(P<0.05)。结论:双参颗粒通过抑制S1pr1-stat3信号通路及部分肿瘤源性细胞因子的表达,抑制肺转移前微环境模型的成熟。

基于lncRNA H19的m6A甲基化调控S1PR2/TLR4/NLRP3通路探讨电针血清对缺血性脑卒中后血脑屏障的作用机制

目的从lncRNA H19的m6A甲基化调控S1PR2/TLR4/NLRP3通路的角度,探讨电针血清对缺血性脑卒中后血脑屏障的作用机制。方法电针血清的制备:建立改良的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别在缺血后5 min、再灌注24 h和48 h进行3次电针干预,针刺人中、百会穴,并接电针仪治疗30 min。3次电针干预后取大鼠血清备用。细胞实验:将脑微血管内皮细胞和周细胞共培养的血脑屏障模型分为对照组、模型组、电针组、电针联合METTL3过表达组与电针联合lncRNA H19过表达组。除对照组外,其余各组氧糖剥夺2 h后再复氧、复糖24 h,并于复氧、复糖的同时给予电针血清、METTL3过表达慢病毒及lncRNA H19过表达慢病毒处理。本实验采用跨内皮细胞电阻和Na-F通透性检测血脑屏障模型的功能;比色法检测总RNA m6A修饰定量;Western blot检测METTL3、ZO-1、S1PR2、TLR4和NLRP3蛋白水平的表达;qPCR检测METTL3、ZO-1、S1PR2、TLR4、NLRP3和lncRNA H19 mRNA的表达。结果与模型组相比,电针组的跨内皮细胞电阻值增高(P<0.01);Na-F值降低(P<0.01);总RNA m6A修饰水平降低(P<0.01);METTL3、S1PR2、TLR4、NLRP3和lncRNA H19表达水平下调(P<0.01),ZO-1蛋白与mRNA表达上调(P<0.01)。与电针组相比,电针联合METTL3和lncRNA H19过表达组的跨内皮细胞电阻值降低(P<0.05);Na-F值增高(P<0.01);总RNA m6A修饰水平增高(P<0.01),METTL3、S1PR2、TLR4、NLRP3和lncRNA H19表达上调(P<0.05),ZO-1蛋白与mRNA表达下调(P<0.01)。结论电针血清对氧糖剥夺再灌注后血脑屏障模型具有保护作用,其机制可能是电针通过lncRNA H19的m6A甲基化下调S1PR2/TLR4/NLRP3通路,从而减轻缺血性脑卒中后血脑屏障损伤。

鞘胺醇1-磷酸2/3受体对心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察鞘胺醇1-磷酸2/3受体(S1PR2/3)在大鼠心肌缺血再灌注的在体实验中对心脏的影响。方法健康SD雄性大鼠,随机分为7组:正常对照组、假手术组、IR组、IR+DMSO组、IR+Cym5541(S1P3受体激动剂)组、IR+Cay10444(S1P3受体阻断剂)组、IR+Cay10444/Jte-013(S1P2/3受体阻断剂)组。制作大鼠缺血再灌注模型,并记录心功能、心肌梗死面积、死亡率。结果给予S1PR3抑制剂组和S1PR2/3抑制剂组与IR组相比在心肌缺血再灌过程中,心率下降(P<0.05),左室舒张末期压力(LVEDP)上升(P<0.05),心肌梗死面积增大(55.7%:28.8%,51.6%:28.8%),给予S1PR3激动剂组心肌梗死面积显著减小(18.6%:28.8%)。给予S1P2/3抑制剂组死亡率明显高于IR组(53%:22%,P<0.05)。结论 S1P2和S1P3受体对缺血再灌注心肌起保护作用,抑制S1P2/3受体参与了IR后心源性猝死(SCD)。

基于S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路探究健脾化痰方对高脂血症脾虚痰浊小猪血管内皮的保护机制

目的:基于S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路探究健脾化痰方对高脂血症(HLP)脾虚痰浊小猪血管内皮的保护机制。方法:普通级广西巴马小型猪15只按随机数字表法随机分为正常组、模型组和健脾化痰组,每组5只。正常组予基础饲料喂饲,模型组和健脾化痰组均予高脂饲料喂饲,造模周期为24周,其中健脾化痰组小型猪在0~24周均应用健脾化痰中药干预。24周后全自动生化分析仪检测各组小猪血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;ELISA法检测各组小猪血清NO、ET-1水平;Western blot法检测各组小猪冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组TG、TC、LDL-C、ET-1水平升高(P<0.01),HDL-C、NO水平降低(P<0.05,P<0.01),冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,健脾化痰组小猪TG、LDL-C、ET-1水平降低(P<0.05,P<0.01),NO水平升高(P<0.01);健脾化痰组小猪冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平上调(P<0.05,P<0.01)。结论:健脾化痰中药具有良好的保护血管内皮功能的作用,其机制可能是通过激活S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路实现的。