S2株布氏杆菌减毒活疫苗免疫效果观察

2010年初,某规模养殖场奶牛群发生布氏杆菌病流行和蔓延,能繁母牛出现流产、死胎的症状。根据检疫结果对布病阳性牛隔离淘汰处理,对布病阴性牛(假定健康牛)进行免疫接种。奶牛群口服接种S2株活疫苗后15d,即可检出疫苗诱导的布氏杆菌抗体,30d抗体水平达到高峰(36%),45～90d抗体阳性率呈现缓慢下降的趋势。免疫接种能有效控制布病感染牛群流产、死胎率,减少由此导致的经济损失。本试验还对鲜乳样本中布氏杆菌核酸开展了PCR检测,对疫苗接种奶牛是否存在乳汁排菌风险进行了讨论。

S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

通过对36只不同日龄、不同性别的健康山羊（含妊娠母羊6只）随机平均分组，分别口服S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗后，在7d、14d、21d、42d、90d对血液中布氏杆菌抗体进行检测，对S2、M5诱导的抗体消长动态进行分析及疫苗安全性评价，最终研究确定出S2可适用于不同日龄、不同性别山羊广泛使用，也适用于妊娠期间山羊的免疫，能有效预防布病的发生，减少由此导致的经济损失；M5可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。

布氏杆菌S2疫苗株特有基因trbJ的LAMP检测方法建立

为了建立一种快速、准确地检测布氏杆菌S2疫苗株的环介导等温扩增(LAMP)方法,将S2基因组与牛种、羊种野毒株基因组比较,筛选出S2疫苗特有基因trbJ作为检测靶标序列,设计LAMP特异性引物,在对该反应组分、反应条件进行单因素优化的同时,还对该引物特异性、灵敏度、重复性进行测试。结果显示,该方法在65℃等温条件下扩增,反应结束后加入SYBR Green I荧光染料,即可通过肉眼直接观察结果。该方法灵敏性、特异性、重复性良好,能准确鉴别出S2疫苗,与对照菌株无交叉反应。与普通PCR技术相比,LAMP检测灵敏度高100倍,最低可检测出6.89 pg/μL的DNA模板,并且不同批次试剂间的重复性良好。本试验成功建立了一种快速、准确、可视化地检测S2疫苗的LAMP方法。

S2株布鲁氏菌活疫苗免疫效果实验及防控建议

本文通过对S2株布鲁氏菌活疫苗免疫效果实验及防控建议进行了阐述,发现采用正常剂量和加强剂量免疫羊血清抗体的阳转率明显低于加倍剂量免疫羊的血清抗体的阳转率。为此在免疫的过程中要严格按照S2株布鲁氏菌活疫苗说明书进行操作,确保免疫结果达到国家要求标准,在布病防控中,各部门加强合作,坚持以人为本,加强个人防护,对患病人员积极治疗,最大限度的减轻农牧民的经济负担。

猪种布氏菌C_(73)强毒株与S_2菌苗株感染种猪的血清学鉴别诊断研究

广西是猪种布氏菌病流行的疫区。我们坚持以“检疫、免疫、淘汰病猪、推广人工授精”为主的综合措施防制猪布氏病，有效控制该病疫情。但在疫区应用猪型布氏菌二号弱毒菌苗免疫种猪，影响了猪布病的血清学诊断和对布病疫情的监测。为此，我们对猪种布氏菌强毒菌株Ｃ７３攻...

布鲁氏杆菌S2株DUF2326基因克隆与生物信息学分析

为了分析布鲁氏杆菌猪种S2疫苗株DUF2326基因编码蛋白的结构、功能以及抗原表位,试验对DUF2326基因进行克隆、生物信息学分析及抗原表位预测。结果表明:DUF2326基因全长1653 bp,编码550个氨基酸,分子质量为61.775 ku,理论等电点为5.34,呈酸性,不稳定指数为35.17,该蛋白无跨膜区,不存在信号肽,α-螺旋为二级结构的主要成分(59.64%)。DUF2326蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,含有较多潜在的B细胞抗原表位。说明DUF2326蛋白具有良好的抗原性,具备成为鉴别布鲁氏杆菌病疫苗免疫和自然感染抗原的潜力。

疫苗免疫控制奶牛布氏杆菌病的效果分析

某规模养殖场奶牛群发生布氏杆菌病流行和蔓延,能繁母牛出现流产、死胎症状。根据检疫结果对布氏杆菌病阳性牛隔离淘汰处理,对布氏杆菌病阴性牛（假定健康牛）进行免疫接种。奶牛群口服接种S2株活疫苗后15 d,即可检出疫苗诱导的布氏杆菌抗体,30 d抗体水平达到高峰（36%）,45~90 d抗体阳性率呈现缓慢下降的趋势。结果表明,S2株活疫苗免疫接种能有效控制布氏杆菌病感染牛群发生的流产、死胎症状,减少由此导致的经济损失。试验还对鲜乳样本中布氏杆菌核酸开展了PCR检测,对疫苗接种奶牛是否存在乳汁排菌风险进行了讨论。

奶牛及犊牛接种布氏杆菌S2和A19株活疫苗的效果初探

为了解布氏杆菌病S2和A19株活疫苗免疫牛群后不同的免疫效果,针对本地区奶牛养殖小区奶牛群监测,结果显示:S2株活疫苗口服接种后30 d,免疫抗体阳转率为31%;皮下注射A19株疫苗20 d,阳转率接近100%。奶牛接种A19株疫苗布病阳转率高于口服S2株活疫苗,并且免疫接种能够有效控制布病感染牛群流产、死胎率,因此,接种活疫苗能够减少布氏杆菌病导致的经济损失。

布氏杆菌S2疫苗株GL_0002181基因的原核表达

为了鉴别羊种布氏杆菌自然感染和S2疫苗(猪种)免疫羊,选用布氏杆菌S2疫苗株进行了全基因组测序,预测出的编码基因与已公布的布氏杆菌基因组数据库比对分析,找出S2特有基因GL_0002181,对GL_0002181基因进行原核表达及免疫原性验证,同时用BP26蛋白作为对照组。Western blot结果显示:以S2疫苗免疫绵羊血清作为检测抗体,重组菌BL21(pETGL_0002181)、BL21(pETBP26)与BL21(DE3)空菌比较,分别在31 ku、32 ku处出现了特异性条带,说明重组蛋白能够与S2免疫血清中的抗体发生特异性反应,具有较好的免疫原性;而重组表达菌BL21(pETGL_0002181)菌体蛋白与自然感染血清不反应,重组蛋白BP26与自然感染血清反应,说明GL_0002181基因在S2疫苗株中存在,在羊种自然流行株中不存在。结果表明:GL_0002181抗原可用于布氏杆菌S2疫苗免疫与羊种布氏杆菌自然感染鉴别诊断,为布氏杆菌病有效诊断提供理论依据。

应用诱变剂选育布氏菌苗菌株的研究

目前国内外畜用的几种布氏活菌苗,在一定条件下,对人不够安全,家畜孕后以注射途径免疫接种,可引起菌苗性流产,在预防布病工作中受到了限制,因此培育残余毒力低,安全有效的布氏菌苗菌株是个热题。根据化学诱变剂硫酸二乙酯(DES)能使细胞中的DNA羧基烷化,引超微生物DNA复制时的错误,出现微生物遗传性状改变的原理,作者采用DES对猪种布氏菌S_2菌株进行了诱变减毒,结果如下。

布氏杆菌S2弱毒疫苗株的S2JY3基因生物信息学分析及原核表达

为分析布氏杆菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作为诊断抗原的可能性,应用PCR技术扩增S2JY3基因,用限制性内切酶对目的片段与pET30a(+)原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,用IPTG诱导表达,蛋白纯化,并进行Western blot检测;利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果表明,S2JY3基因全长1257 bp,编码418个氨基酸,蛋白质理论大小值为43 kDa,理论等电点为9.73,蛋白质不稳定系数为36.31,是稳定蛋白,总平均亲水性为-0.577,为亲水性蛋白;跨膜结构和信号肽分析表明S2JY3蛋白无跨膜区,无信号肽区域。本研究成功构建了重组表达蛋白rS2JY3,Western blot结果表明rS2JY3与布氏杆菌S2疫苗免疫羊血清发生特异性结合反应,不与自然感染羊血清反应,具有良好的抗原性和特异性。该研究为羊布氏杆菌S2疫苗免疫和自然感染快速检测和鉴定等提供理论依据。

布氏杆菌S2疫苗免疫绵羊血清抗体消长规律研究

为了解绵羊对布氏杆菌病S2疫苗免疫后的抗体消长规律,通过口服和注射2种方法对绵羊进行了布氏杆菌病S2疫苗免疫试验,利用虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)以及c ELISA检测方法进行了血清抗体检测。结果表明:正常剂量口服免疫S2疫苗20 d后,RBT、SAT、c ELISA抗体阳性率均达到最高,分别是80%、70%、60%,并且在免疫100 d后羊血清抗体阳性率分别为RBT 20%、SAT 10%、c ELISA 10%,免疫250 d后3种方法检测结果均转为阴性。2倍剂量口服免疫S2疫苗20 d后,RBT、SAT、c ELISA均达到最高为60%,并在免疫100 d后均转为阴性。以正常剂量注射免疫S2疫苗免疫7 d后RBT和SAT抗体阳性率达到最高为80%,c ELISA抗体阳性率达到60%,30 d后达到80%,而疫苗免疫370 d后,RBT和SAT检测抗体阳性率下降到60%,c ELISA检测抗体阳性率依然80%;而2倍剂量注射免疫S2疫苗370 d后,RBT和c ELISA检测抗体阳性率仍保持着100%,SAT检测抗体阳性率达80%。结果表明,从免疫羊抗体产生及体内消长规律来看,布氏杆菌S2疫苗注射免疫明显优于口服免疫效果,且两种免疫途径的试验羊均且未发现明显接种副反应。

S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对山羊免疫效果的比较试验

为了研究S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对本地杂交山羊诱导的抗体消长动态规律、安全性及免疫效果,试验对36只不同日龄、不同性别的健康山羊(含妊娠母羊9只)随机平均分组,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)方法分别对口服S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗的试验山羊,在免疫后第7,14,21,42,90天时对血液中布鲁氏菌抗体进行检测。结果表明:两种疫苗一次免疫对本地杂交山羊的最长保护期为90 d,其中S2株布鲁氏菌减毒活疫苗可适用于不同日龄、不同性别本地杂交山羊使用,也适用于妊娠期间山羊的免疫;M5株布鲁氏菌减毒活疫苗可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。说明较M5株布鲁氏菌减毒活疫苗,S2株布鲁氏菌减毒活疫苗具有使用方便且安全有效的优势。

布鲁杆菌S2株通过JNK-p53信号通路诱导小鼠BV-2小胶质细胞凋亡

目的研究布鲁杆菌S2株诱导BV-2小胶质细胞凋亡的机制,以发现神经型布鲁杆菌病药物治疗的新靶点。方法用布鲁杆菌S2株分别侵染BV-2小胶质细胞0、3、6、12、24 h,Western blot和RT-qPCR技术检测p-JNK、p53蛋白和mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞免疫荧光技术检测p-JNK蛋白核转运。结果布鲁杆菌S2株能促进BV-2小胶质细胞p-JNK、p53蛋白及mRNA表达,并增加p-JNK蛋白核转运。布鲁杆菌S2株能诱导BV-2小胶质细胞凋亡。结论布鲁杆菌S2株通过激活BV-2小胶质细胞JNK,促进p53表达,诱导细胞凋亡。

负载布鲁杆菌WboA^(-/-)S_2株对小鼠骨髓源性肥大细胞的活化作用研究

研究猪种布鲁杆菌WboA-/-S2株对骨髓源性肥大细胞(BMMC)的激活作用。用粗糙型布鲁杆菌WboA-/-S2株感染BMMC,并以光滑型S2株作为对照,采用RT-PCR法观察BMMC载菌后不同时间点TLR4和TLR8表达的变化;用ELISA法检测感染后BMMC上清中TNF-α、IL-6、IL-1和IL-12的含量。结果显示负载WboA-/-S2株和S2株12h时BMMC TLR4的表达量均明显高于正常对照组,其中负载WboA-/-S2株的BMMC TLR4表达又明显高于S2株负载组,24h时二者表达均明显减弱;在负载12hWboA-/-S2株组BMMC TLR8表达明显高于正常对照组,而S2株组的BMMC TLR8与正常对照组相比条带无明显变化,24h时二者表达均减弱。负载WboA-/-S2株后3h、6h、12h、24hBMMC所分泌的TNF-α和IL-6都明显高于S2株负载组(P<0.05),而在负载两菌的BMMC上清中均未检测到IL-1和IL-12。结果表明WboA-/-S2株较S2株更易被BMMC识别,激活BMMC的能力也明显强于S2株,并可快速诱导BMMC分泌大量细胞因子。

鸡腺胃型传染性支气管炎的研究

1996年9月,研究团队率先在山东青岛地区发现一种鸡的传染性支气管炎(以下简称"传支")病毒变异株,该病毒多感染20~90日龄鸡,以肿眼,流泪,鸡体消瘦,腺胃肿大、粘膜出血、溃疡,死亡率高为发病特征,并伴有呼吸道症状。发病率可达100%,死亡率3%~95%不等,一般为30%~50%,最高可达90%,不同品种的鸡都会有发病,造成重大的经济损失,严重影响了养鸡业的发展,后来在全国各地呈现蔓延趋势。1997年3月王玉东等率先报道青岛发生腺胃型传支,并分离鉴定了腺胃型传支病毒变异株(IBV),将该病毒命名为青岛腺胃传支病毒株(QXIBV),委托南京农业大学老师注册了QXIBV的S1、S2基因和N基因。从青岛鸡分离出的病毒株(QXIBV)是一种不同于呼吸型、肾型、生殖型的IBV,是嗜腺胃型变异株,故将其命名为腺胃型传染性支气管炎,但其与肾型传支同源性强。利用该病毒株研制成功的油乳剂灭活疫苗安全性好,保护率高,免疫保护率可达95%以上,减少了鸡的发病和死亡,确保养禽业的健康发展。

基于表面增强拉曼技术快速检测5种食源性致病菌

为快速检测布鲁氏菌S2株、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7和福氏志贺氏菌,利用表面增强拉曼(SERS)光谱技术,以原位包覆纳米银为基底,获得5种细菌的SERS谱。结果表明:在400~2 000 cm^(-1)光谱内,布鲁氏菌S2株有10处明显的拉曼谱峰,鼠伤寒沙门氏菌有9处明显的拉曼谱峰,金黄色葡萄球菌有5处明显的拉曼谱峰,大肠杆菌O157:H7有9处明显的拉曼谱峰,福氏志贺氏菌有7处明显的拉曼谱峰。5种食源性致病菌的拉曼谱峰位置以及强度区别明显。利用SERS技术可以实现在10 min内识别5种食源性致病菌,达到增强细菌拉曼信号、快速检测食源性致病菌的目的。