中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB株S4基因序列分析

应用非免疫番鸭胚增殖中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株,用LS TRIAZOL提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株S4基因节段cDNA。将S4cDNA克隆到PMD18-T载体上,并进行了鉴定和核苷酸序列测定。序列分析结果,克隆的S4cDNA共1 124 bp,包括非编码区和完整的阅读框架。分子进化系统分析表明该毒株与禽呼肠孤病毒(鸡呼肠孤病毒)的亲缘关系较远,DRV-YB与DRV-89330同缘率为93.3%。

草鱼呼肠孤病毒HZ08株S4基因序列分析

草鱼呼肠孤病毒HZ08株是本实验室从患出血病草鱼体内分离到的一个新毒株,已完成部分基因序列的分析,其氨基酸序列的同源性和873株相比,仅为20%～30%之间。因序列差异较大,无法通过设计特异性引物来扩增和分析其基因序列,采用单引物扩增技术,对HZ08株S4基因进行序列分析表明:S4全长为2263 bp,最大的ORF编码717个氨基酸,推导出其表达的蛋白约为79 kDa。正如其他基因节段,基因末端也含有保守碱基序列5'(GUAAUUU…UUCAUC),3'。S4基因推导的氨基酸序列与同宿主的其他呼肠孤病毒的非结构蛋白NS1同源性最大,其次是和哺乳动物正呼肠孤病毒的非结构蛋白mu-NS以及禽呼肠孤病毒非结构蛋白NS1同源性较大,表明S4可能表达细胞骨架相关蛋白。基于S4推导出的氨基酸序列构建的系统进化树HZ08株单独作为一个分支,与同宿主的其他呼肠孤病毒亲缘关系比较近,而与其他呼肠孤病毒则相对较远。这提示HZ08株可能是多个毒株的遗传信息经长期的遗传进化而得,综合其它已知序列信息,推测HZ08株可能为呼肠孤病毒的一个新成员。

禽呼肠孤病毒C-98、T-98分离株S4基因的克隆与序列分析

参考GenBank中禽呼肠孤病毒176株(ARV 176)S4基因序列设计两对引物,分别提取禽呼肠孤病毒T-98和C-98分离株病毒总RNA,应用RT-PCR技术扩增病毒的S4基因,将纯化的目的 DNA与pEASY-T1载体连接、转化后测序。应用计算机软件将所测定序列与参考毒株序列进行比较,结果显示,S4基因核苷酸序列长为1 192bp,均含1个完整的开放性阅读框(24～1 127)。ARV T-98和ARV C-98分离株S4基因的核苷酸同源性很高,为99.9%;与参考毒株ARV 1733、ARV S1133、ARV 750505、ARV 601SI、ARV 919、ARV T6、ARV OS161和DRV YJL S4基因的核苷酸同源性均较高,在99.4%～99.9%之间;与ARV 601G、ARV 1017-1、ARV 916、ARV 918和DRV S14S4基因的核苷酸同源性在80.1%～83.6%之间;与NBV、BRV和MRV 3的S4基因核苷酸同源性在2.4%～53.1%之间。进化树分析显示:11株禽呼肠孤病毒分离株和ARV T-98、C-98分离株的S4基因可分成3个不同的系谱。

自交亲和与自交不亲和日本梨中S_4基因的研究进展(英文)

综述了近20年日本梨中与自交亲和和自交不亲和有关的S4基因的研究进展.这些结果包括:'二十世纪'(基因型为S2S4)为自交不亲和品种,其突变品种'奥嗄二十世纪'(基因型为S2S4SM,SM=stylar part mutant;花柱部分突变)为自交亲和型.'奥嗄二十世纪'自交亲和的原因有三点:(1)S4SM 基因被删除或者是低水平表达.(2)S4SM基因仅在柱头表达.(3)S4SM基因表达较迟.这主要是由于'二十世纪'S基因座上的S4等位基因发生了高度突变成为S4SM基因或者S4等位基因被删除,导致其基因产物花柱中的S4-RNase受到高度抑制或缺乏的缘故.S4基因由997bp组成,其中85～768bp为684bp的阅读框,925～931bp和943～950bp为多聚腺苷酸信号.S4基因的表达产物为S4蛋白,S4蛋白由228个氨基酸残基组成,其中N端的27个氨基酸残基为信号肽,成熟的S4蛋白由201个氨基酸残基组成.S4蛋白的生理功能是抑制花粉的萌发和花粉管的伸长.

STR基因座D1S518、D4S2639、D15S817汉族人群遗传多态性调查

目的分析武汉地区汉族人群D1S518、D4S2639、D15S8173个短串联重复序列(STR)基因座遗传多态性,探讨其在法医学检验中的应用价值。方法应用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带等技术,对各样品进行3个STR基因座分型,调查武汉地区汉族人群3个STR基因座遗传多态性基因频率分布。结果D1S518基因座观察到8个等位基因,24个基因型;D4S2639基因座观察到9个等位基因,32个基因型;D15S817基因座观察到7个等位基因,18个基因型,3个STR基因座的杂合度分别为0.7547、0.8165、0.7602;多态性信息含量分别为0.7290、0.7568、0.7222。结论D1S518、D4S2639、D15S8173个STR基因座基因频率分布与Hardy-Weinberg平衡吻合良好,在武汉地区汉族人群中呈现较高的遗传多态性,属于高信息度遗传标记。

肿瘤转移相关基因S100A4的研究进展

肿瘤的发生发展受多种基因的调控。S100A4基因是近几年发现的一种具有促肿瘤作用的基因,该基因编码一种钙离子结合调节蛋白,通过与钙离子结合在肿瘤发生发展中发挥重要作用。本文就S100A4基因的结构、促肿瘤的作用及机制作一综述。

沉默S100A4基因对乳腺癌上皮间质转换的影响

目的观察沉默人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中钙结合蛋白S100A4基因对上皮间质转换(EMT)的影响。方法采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和荧光实时定量(RT-PCR)检测S100A4在人乳腺癌组织中的表达情况。用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的siRNA转染至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot方法检测EMT相关分子(E-cadherin, N-cadherin、Snail和Slug)的表达在沉默组和对照组中的表达水平。结果成功建立S100A4基因沉默的人乳腺癌MCF-7和MAD-231细胞模型;二者细胞中N-cadherin、Snail和Slug表达水平降低,而Ecadherin表达水平上调。结论 S100A4通过调节EMT过程,促进乳腺癌的侵袭和迁移,其可能成为乳腺癌治疗新的靶标分子。

PTEN基因ⅣS4多态性与脂代谢紊乱的关系

目的:探讨PTEN基因ⅣS4(rs3830675)多态性与川南地区汉人脂代谢紊乱的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析结合DNA测序方法,对431例样本进行PTEN基因ⅣS4多态性分析,其中脂代谢紊乱患者208例(脂代谢紊乱组),对照样本223例(对照组)。结果:PTEN基因ⅣS4基因型(-/-、-/+、+/+)在对照组和脂代谢紊乱组中分布具有统计学差异(P=0.039)。ⅣS4基因型+/+相对于基因型-/-和-/+以及等位基因+相对于等位基因-发病风险增加,OR值分别为1.768(95%CI:1.135～2.753,P=0.011)和1.480(95%CI:1.135～1.929,P=0.004)。另外,与基因型-/-和-/+比较,基因型+/+的平均总胆固醇(TC)水平显著增加(t=-2.349,P=0.020),平均低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平也显著增高(t=-2.767,P=0.006),其他检测指标无统计学差异。结论:PTEN基因ⅣS4+/+基因型和等位基因+是川南地区脂代谢紊乱的危险因素,其主要的关系可能与TC和LDL-C相关。

长白山梅花鹿鹿茸干细胞S100A4基因克隆及原核表达

为了研究S100A4蛋白在鹿茸发生过程中的生物学功能,构建长白山梅花鹿鹿茸S100A4基因原核表达载体,并进行BL21原核表达;自鹿茸骨膜中提取总RNA,逆转录成c DNA,以特异性引物扩增S100A4,扩增产物克隆到p MD18-T载体并测序鉴定,将目的片段和原核表达质粒p ET-15b分别用Bam H I和HindⅢ双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21用TPIG进行诱导表达;结果通过序列的对比分析,S100A4基因是一个相对保守的基因,与多个物种的匹配度达到90%,与牛S100A4基因同源性最高,达到98.4%;成功构建了p ET15b-S100A4表达质粒,转化BL21诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测显示表达的蛋白分子量为11 k D,与预期一致。表明梅花鹿鹿茸干细胞S100A4基因的可以在原核中克隆、分析和表达,为真核表达和进一步的蛋白功能分析奠定了基础。

低氧模拟剂氯化钴对胃癌细胞BGC823中S100A4基因表达的影响

S100A4基因是肿瘤侵袭转移相关的重要基因,该基因高表达与胃癌浸润、淋巴结转移及胃癌细胞体外侵袭力密切相关。为探讨S100A4基因高表达的机制,文章应用低氧模拟剂氯化钴处理胃癌细胞BGC823,RT-PCR、免疫组化、免疫荧光及Westernblotting方法分别检测BGC823细胞中S100A4mRNA及蛋白表达情况。结果显示,氯化钴处理胃癌BGC823细胞后,S100A4mRNA及蛋白表达明显增加。提示低氧模拟剂氯化钴可促进胃癌细胞BGC823中S100A4基因表达。

S100A4基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨S100A4基因在膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)中的表达及意义。方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测38例膀胱移行细胞癌组织及其相应癌旁组织中S100A4基因的表达情况,结合临床及组织病理学特点探讨S100A4基因与膀胱癌发生及发展的关系。结果:S100A4基因在膀胱移行细胞癌及正常膀胱移行上皮组织中的阳性表达率分别为60.5%(23/38)和0%(0/38)。膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率明显高于正常膀胱移行上皮组织(P<0.005)。其中膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率随肿瘤分级、分期的增高及淋巴结转移而相应增高(P<0.05)。结论:S100A4基因表达与移行膀胱癌分化有关,癌组织S100A4基因有可能成为膀胱癌的一个新的肿瘤标记物;S100A4基因差异表达与移行膀胱癌侵袭和转移明显相关,移行膀胱癌组织中S100A4基因可望作为移行膀胱癌的病情发展及指导临床治疗的标记物之一。

超声微泡沉默S100A4基因对胃癌干细胞干性和上皮间质转化的调控

背景:S100A4是钙离子结合蛋白S100家族的一员,可以与相应的靶蛋白结合,进而对肿瘤细胞、多能干细胞的增殖与转移产生重要的影响,近年研究表明超声靶向破坏微泡技术能增强基因转染效率。目的:探讨超声靶向破坏微泡技术沉默S100A4基因对胃癌干细胞干性、上皮间质转化的影响。方法:取对数生长期的人胃癌细胞株SGC-7901,采用无血清悬浮培养法分离肿瘤干细胞球,流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标记EpCAM+CD44+表达。构建靶向S100A4基因的shRNA表达质粒,超声微泡介导转染至EpCAM+CD44+胃癌干细胞。转染后48 h,Western blot检测S100A4的表达;采用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell小室检测胃癌干细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力;采用Western blot与qRT-PCR检测上皮-间质转化相关标记物的表达。结果与结论:流式细胞仪检测结果显示,在胃癌干细胞富集培养后表达EpCAM+CD44+细胞的比例明显高于富集培养前(P <0.05)。超声微泡转染S100A4-shRNA质粒48 h后S100A4的蛋白表达量明显低于未转染组(P <0.01)。转染后48 h,胃癌干细胞的增殖速度、克隆形成能力、迁移、侵袭能力明显下降,上皮标志物E-cadherin表达升高,间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin表达降低。结果表明,超声靶向破坏微泡技术沉默S100A4基因可通过调控E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达抑制胃癌干细胞的增殖及克隆形成、迁移、侵袭能力。

S100A4基因载体的构建及其在人胃癌细胞系中的表达

目的 克隆S100A4 cDNA,构建pcDNA3.1-S100A4重组表达载体,转染胃癌细胞系MKN1,观察S100A4在胃癌细胞中的表达情况。方法 Trizol法提取人胃上皮细胞GES-1的总RNA,逆转录反应获得含S100A4基因的cDNA。聚合酶链反应GenBank获得S100A4基因序列,并设计引物,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出分子量为327 bp的产物。构建pMD18-T simple-S100A4重组质粒,转化JM109菌。菌液测序成功后,提取质粒,进行BamHⅠ/HindⅢ双酶切,酶切产物回收纯化,连接表达载体pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-S100A4真核表达载体。利用脂质体介导转染方法将纯化的表达载体转染到胃癌细胞系MKN1中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后MKN1细胞中S100A4 mRNA表达水平。结果 PCR产物连接克隆载体的测序结果与GenBank公布的无突变序列一致,HindⅢ/BamHⅠ双酶切可以成功构建真核表达载体pcDNA3.1-S100A4;在胃癌细胞系MKN1中转染pcDNA3.1-S100A4表达载体,以转染pcDNA3.1空载体和正常未转染的MKN1细胞作为对照。结果表明,转染pcDNA3.1-S100A4表达载体48 h后,S100A4 mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 构建完成pcDNA3.1-S100A4真核表达载体,S100A4基因在胃癌细胞MKN1中成功表达。

甜樱桃S4′S4′纯合基因型资源鉴定体系的建立与应用

为了快速鉴定S4′S4′纯合基因型甜樱桃个体,利用已发表的S4′基因特异引物,以甜樱桃品种Lapins基因组DNA为模板建立了S4′基因AS-PCR体系,扩增得到了S4′基因,经测序得到S4′基因序列,证实了S4′基因的可靠性,并利用此扩增体系和已发表的S1基因鉴定体系,从Lapins自交后代中鉴定出2株S4′S4′纯合基因型个体,大大缩短了甜樱桃自交亲和纯合体种质资源的筛选时间,为今后甜樱桃自交亲和新品种选育提供了较为理想的种质资源。

D4S1647、D6S2414基因座在中国汉族、蒙古族、藏族的遗传多态性

目的 调查 D4 S16 4 7、D6 S2 4 14基因座在中国汉族、蒙古族、藏族群体中的遗传分布规律。方法 采集 30 8份血及唾液标本应用 PCR技术 ,扩增产物用非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离 ,银染显色分析。结果 两位点各群体基因型频率分布均符合 Hardy- Weinberg平衡 ,每一位点等位基因频率分布在各群体间均无显著差异 ;通过对 10个汉族家系的遗传模式分析 ,证实了两位点等位基因传递遵循孟德尔遗传规律。结论 D4 S16 4 7、D6 S2 4 14基因座在中国汉族、蒙古族。

S100A4基因与恶性肿瘤研究进展

目前的研究已经证实,肿瘤的发生与演进是多因素协同参与、多基因共同作用、多阶段逐步发展的过程,这一过程涉及多种癌基因以及抑癌基因的异常改变。其中S100A4是一个被筛选出来的特异性蛋白,其与恶性肿瘤生物学行为、特别是侵袭与转移密切相关,并且与患者预后关系密切,是目前肿瘤研究的热点基因。S100A4是S100钙结合蛋白家族成员之一,本文主要对S100A4在肿瘤组织中作用的研究现状及与恶性肿瘤侵袭转移的关系做一综述。