浸润性乳腺癌磷酸化核糖体S6蛋白激酶1的定位表达与临床病理特征和预后的关系

目的探讨磷酸化核糖体S6蛋白激酶1（p-S6K1）在浸润性乳腺癌中的定位表达与临床病理特征和预后的关系。方法对185例浸润性乳腺癌中不同亚细胞部位p-S6K1的表达及其与临床病理特征和预后的关系进行分析。结果细胞质p-S6K1在癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为48．1％和20．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞质P-S6K1的表达与淋巴结转移有关（P〈0．05），细胞核p-S6K1的表达与临床分期有关（P〈0．05）。细胞质p-S6K1阳性表达者其无疾病生存率小于细胞质p-S6K1阴性者，差异有统计学意义（P〈0．05）。临床分期、淋巴结转移和细胞质p-S6K1的表达是浸润性乳腺癌的独立预后因素（P〈0．05）。结论不同亚细胞部位p-S6K1的表达可用来标志浸润性乳腺癌不同的病理生物学特征。细胞质p-S6K1的表达是浸润性乳腺癌的一个独立的预后因素。

结直肠癌组织中S6K1及4EBP1蛋白的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨结直肠癌组织中S6蛋白激酶1(protein S6 kinase 1,S6K1)和真核翻译起始因子-4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1,4EBP1)的表达情况及其与结直肠癌患者临床病理参数之间的关系。方法:收集济南军区总医院肿瘤科2007年1月至2009年12月收治的有完整临床病理资料、经手术切除的100例结直肠癌组织与40例正常癌旁结直肠黏膜组织、30例淋巴结转移灶组织、15例远处转移灶组织,用免疫组化方法检测上述组织中S6K1和4EBP1蛋白的表达,并分析其与患者临床病理参数之间的关系。结果:S6K1和4EBP1蛋白在正常结直肠黏膜组织中的阳性表达率分别为17.50%(7/40)和22.50%(9/40),而在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为74.00%(74/100)和79.00%(79/100),S6K1和4EBP1蛋白在癌和正常结直肠黏膜组织中的阳性表达率间差异均有统计学意义(P<0.01);在结直肠癌组织中,S6K1蛋白的阳性表达与结直肠癌患者的临床分期(r=0.31,P<0.01)及组织分化程度(r=0.25,P<0.05)显著相关。4EBP1蛋白的阳性表达与结直肠癌患者的临床分期(r=0.27,P<0.01)及组织分化程度(r=0.22,P<0.05)显著相关。S6K1和4EBP1蛋白高表达患者无疾病进展时间(progression free survival,PFS)更短(P<0.05),但S6K1和4EBP1蛋白表达水平对患者的总生存期(overall survival,OS)无影响(P>0.05)。S6K1和4EBP1蛋白两者的阳性表达呈正相关(r=0.25,P<0.05)。结论:S6K1及4EBP1蛋白在结直肠癌形成过程中有互相促进作用,与结直肠癌的发生发展及预后相关,可作为较为理想的分子靶点和预后评估指标。

基于mTOR/S6K1通路探究CXCR3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响

目的 探究趋化因子受体(CXCR)3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响及其作用机制。方法 将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5分为对照组,模型组,si-NC组和si-CXCR3组,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞活力,流式细胞法检测各组细胞凋亡水平,Western印迹检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3表达水平,ELISA法检测各组细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8,肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qPCR及Western印迹检测各组细胞自噬相关蛋白(beclin)1、人自噬相关蛋白(ATG)5及ATG7表达水平,同时检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/蛋白核糖体S6蛋白激酶(mTOR/S6K1)信号通路关键蛋白的蛋白表达水平及其磷酸化修饰水平。结果 与对照组相比,模型组和si-NC组细胞增殖受到显著抑制,并且随着时间增加抑制能力增强,与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞增殖显著提高(P<0.05);与对照组相比,模型组和si-NC组细胞凋亡均显著增加(P<0.05);与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞凋亡显著降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组和si-NC组细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α释放显著增加(P<0.05);与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α显著降低,但仍高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,模型组和si-NC组细胞自噬相关蛋白Beclin1、ATG5及ATG7表达水平显著降低,而与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组显著升高(P<0.05);与对照组相比,模型组和si-NC组细胞mTOR、S6K1蛋白表达水平显著升高,其磷酸化修饰也相应增加,而与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞mTOR,S6K1蛋白表达水平显著降低,磷酸化修饰也相应降低(P<0.05)。结论 沉默CXCR3可以提高小鼠肾足组细胞活性,降低细胞凋亡,减少炎症因子释放,对肾足细胞具有保护作用,其机制可能通过增强自噬,调控mTOR/S6K1信号通路活性及磷酸化修饰相关。

食管癌组织中p-4EBP1、p-S6K1表达及意义

目的探讨p-4EBP1和p-S6K1在食管癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测45份食管癌组织及20份正常食管组织中p-4EBP1及p-S6K1表达。结果食管癌组织中p-4EBP1和p-S6K1表达阳性率分别为71.1%和66.7%,正常食管组织中阳性率分别为25.0%和35.0%,P均<0.05;二者在食管癌组织中的表达呈正相关P<0.05(r=0.381)。结论 p-4EBP1和p-S6K1在食管癌发生、发展中起促进作用;二者可作为食管癌诊断、靶向治疗及预后判断的重要生物学标记物。

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、p-4EBP1及p-S6K1蛋白的表达水平与胃癌常见临床病理因素的关系。方法选择2014年3月—2016年6月在包头市肿瘤医院行手术切除的60例胃癌患者为观察组,对照组为癌旁组织(肿瘤边缘5 cm处)胃组织40例。采用免疫组化的方法检测60例胃癌组织及40例癌旁胃组织中p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况。结果 p-mTOR在观察组和对照组的阳性率分别为36.7%和10.0%,p-4EBP1在观察组和对照组的阳性率分别为80.0%和60.0%,p-S6K1在观察组和对照组的阳性率分别为26.7%和10.0%。p-mTOR、p-4EBP1和pS6K1在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生的重要机制之一。

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

研究p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达及临床意义。选择2015年3月至2017年8月在包头市肿瘤医院进行手术切除的60例乳腺癌组织为观察组,对照组为癌旁组织40例。采用免疫组化方法检测60例乳腺癌组织及40例癌旁组织中p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况。p-mTOR在观察组和对照组阳性率分别为71.7%和42.5%;p-4EBP1在观察组和对照组阳性率分别为26.7%和10.0%;p-S6K1在观察组和对照组阳性率分别为45.0%和12.5%;p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。试验结果表明,p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中过度表达可能是乳腺癌发生发展的重要机制之一。

GPC3在不同侵袭能力肝细胞癌细胞株中的表达及其与4E-BP1和PS6K的相关性研究

目的检测两种不同侵袭能力的肝细胞癌(HCC)细胞系的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、真核细胞启动因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6蛋白激酶(PS6K)的mRNA和蛋白表达,并探讨3种基因与肝癌细胞转移侵袭能力的相关性。方法分别采用荧光定量聚合酶链反应和Western blotting方法检测低转移侵袭力MHCC-97L、对照细胞系HL-7702、高转移侵袭力MHCC-97H细胞系的GPC3、4E-BP1、PS6K的mRNA和蛋白表达水平,采用R语言分析3种蛋白与HCC细胞侵袭能力的相关性。结果cbioportal分析结果显示,GPC3、4E-BP1、PS6K表达异常的HCC患者生存时间明显短于表达正常的HCC患者(P<0.05),整体生存率和生存周期均降低。与HL-7702细胞系相比,MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01),4E-BP1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01),MHCC-97L细胞GPC3 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01),4E-BP1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.01)。MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K mRNA水平显著高于MHCC-97L细胞(8.12±0.21比2.34±0.42,8.19±0.54比5.23±0.25)(P<0.01),4E-BP1 mRNA水平低于MHCC-97L细胞(1.28±0.45比9.13±0.12)(P<0.01)。MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K蛋白水平显著高于MHCC-97L细胞(0.82±0.01比0.34±0.04,0.82±0.07比0.31±0.02)(P<0.01),4E-BP1蛋白水平低于MHCC-97L细胞(0.18±0.07比1.13±0.03)(P<0.01)。经R语言编程进行相关性矩阵分析显示,在MHCC-97L中,GPC3与4E-BP1呈负相关(r=-0.850),GPC3与PS6K呈正相关(r=0.868),PS6K与4E-BP1呈负相关(r=-0.898);在MHCC-97H中,GPC3与4E-BP1呈负相关(r=-0.877),GPC3与PS6K呈正相关(r=0.888),PS6K与4E-BP1呈负相关(r=-0.898)。结论GPC3和PS6K的mRNA和蛋白水平随着HCC转移侵袭能力的增强而升高,PS6K与GPC3表达呈正相关。4E-BP1的表达则随着HCC转移侵袭能力的增强而降低,与GPC3的表达呈负相关,且这3种蛋白的表达均与HCC转移侵袭能力的增强密切相关。

mTOR及S6K1在再生障碍性贫血患者骨髓细胞表达

目的:免疫组织化学方法测定促脂肪形成因子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR及其下游调控蛋白核糖体S6蛋白激酶S6K1在再生障碍性贫血患者骨髓细胞表达,探索再障骨髓脂肪细胞增多的机制。方法:选择再生障碍性贫血患者20例作为再障组,白细胞减低而骨髓增生正常的患者20例作为对照组,调取石蜡标本,免疫组化检测并比较mTOR及S6K1、骨髓祖细胞抗原CD34在两组的表达水平,分析再障组mTOR及S6K1表达水平与血常规、CD34的相关性。结果:再障组骨髓病理示脂肪细胞等非造血细胞明显增加,造血组织减少;再障组血常规示全血细胞减少,较对照组明显减低;免疫组化结果显示mTOR及S6K1在再障组表达水平高于对照组。CD34在再障组表达水平低于对照组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示再障组血常规、CD34与mTOR表达水平呈负相关(P<0.05);血常规、CD34与S6K1表达水平呈负相关(P<0.05);S6K1在表达水平上与mTOR表达水平呈现正相关关系。结论:mTOR及S6K1表达水平增高可能与再障疾病发生存在一定关联,可能参与了再障骨髓脂肪细胞增多,骨髓脂肪化进而抑制了骨髓造血。

雷帕霉素靶蛋白及其下游分子4E结合蛋白1和核糖体S6蛋白激酶表达在浸润性乳腺癌中的关系

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路中mTOR及其下游分子4E结合蛋白1（4EBP1）及核糖体S6蛋白激酶1（S6KI）在乳腺癌组织中的表达和临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测116例浸润性乳腺癌及其癌旁组织中磷酸化的roTOR与4EBP1及S6K1的表达，分析i者表达的相关性，及其与患者年龄、肿瘤大小、腋淋巴结转移状况、组织学分级、临床分期以及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、原癌基因表皮生长因子受体2（Her-2）等临床病理参数之间的关系。结果（1）p-roTOR、p-4EBPl和p-S6K1在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为68．1％、65．5％、59．5％，显著高于其在癌旁组织中的表达，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）p-mTOR与p-4EBP1及P—S6K1的表达明显相关（r=0．458，P〈0．05；r=0．383，P〈0．05）。（3）在腋淋巴结转移患者中p-mTOR、p-4EBP1、p-S6KI的阳性表达明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义（P〈0．05），而三者的表达与其他各临床病理参数无明显相关。结论mTOR信号通路中mTOR及其下游分子4EBPI及S6K1的激活与乳腺癌的发生相关，并对促进腋窝淋巴结转移有一定作用。同时作为信号通路中的上游分子，roTOR对其下游的4EBP1及S6K1具有调控作用。

沙棘果油对超抗原诱导的特应性皮炎小鼠激素抵抗的干预作用及机制

目的 研究沙棘果油对超抗原诱导的特应性皮炎(AD)小鼠激素抵抗的干预作用,并探讨其作用机制。方法 将50只小鼠按照随机数字表法分为5组,即正常对照组(A组)、模型组(B组)、地塞米松干预组(阳性对照,C组)、沙棘果油干预组(D组)、地塞米松+沙棘果油干预组(E组),每组10只。除A组外,其余各组均采用2,4-二硝基氯苯+葡萄球菌肠毒素B法制备AD小鼠模型。自实验第7天起,分别使用地塞米松(1.5 mg/kg)和/或沙棘果油(10 mL/kg)对C、D、E组小鼠进行灌胃,每天1次,连续28 d。末次给药后,采用苏木素-伊红染色法观察小鼠耳部皮肤组织的病理形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素4(IL-4)水平,采用免疫荧光单标法检测小鼠耳部皮肤组织中糖皮质激素受体α(GRα)、GRβ阳性细胞数,采用Western blot法检测小鼠耳部皮肤组织中GRα、GRβ蛋白及蛋白激酶B(AKT)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)信号通路相关蛋白的表达情况。结果 与B组比较,C、D、E组小鼠左耳部皮肤炎症表现明显减轻;D、E组小鼠血清中IgE、IL-4水平显著降低(P<0.05),GRα阳性细胞数显著增加(P<0.05),核蛋白中GRα蛋白表达水平升高(P<0.05),总蛋白中Gαi1、Gαi3、p-S6K1、pAKT蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);E组小鼠GRβ阳性细胞数显著减少(P<0.05),总蛋白中GRβ表达水平显著降低(P<0.05)。与C组比较,E组小鼠左耳部皮肤炎症表现趋于消退,血清中IgE、IL-4水平均显著降低(P<0.05);D、E组小鼠GRα阳性细胞数显著增加(P<0.05),GRβ阳性细胞数显著减少(P<0.05),核蛋白中GRα蛋白表达水平升高(P<0.05),总蛋白中GRβ、Gαi1、p-S6K1、p-AKT的蛋白表达水平及E组小鼠Gαi3的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 沙棘果油对超抗原诱导的AD小鼠激素抵抗具有干预作用,该作用可能是通过抑制Gαi1/3诱导的AKT/S6K1信号通路而发挥的。