SARS-CoV S666蛋白与眼部ACE2受体的结合作用

目的研究SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)S666蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)的结合作用。方法构建SARS-CoV S666蛋白融合基因pS666-EGFP,并在哺乳动物细胞(293T细胞)中表达;酶联免疫吸附实验及流式细胞仪检测法进行SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞及心、肺组织的体外结合研究。结果构建了融合基因pS666-EG-FP,琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western Blot分析证明SARS-CoV pS666-EGFP融合基因构建正确,基因表达产物与理论推算值相符,相对分子量约为100.7×103。酶联免疫吸附实验结果经析因方差分析显示:S666-EGFP蛋白与角膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、结膜上皮细胞及结膜、角膜组织的结合能力比EGFP蛋白强(有统计学差异,P<0·001)。流式细胞仪检测结果显示:结膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、角膜上皮细胞与S666-EGFP蛋白结合,但与EGFP蛋白均无结合。上述细胞及组织的结合能力较vero E6细胞及心、肺组织的结合能力稍弱。结合反应能够被ACE2抗体所阻滞,证实其为特异性结合。结论SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞能够结合,对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。