水曲柳S6K基因的生物信息学及胁迫和激素下的表达分析

以所获取的水曲柳FmS6K基因(FmS6K1和FmS6K2)为对象,解析其核苷酸序列及其所编码蛋白质的基本信息,探索非生物胁迫和植物激素条件下基因的表达特征。结果表明,FmS6K1和FmS6K2基因长度分别为1 583和1 796 bp,分别编码480和483个氨基酸,二者均含有完整的开放阅读框。FmS6K1为两性蛋白,FmS6K2是亲水蛋白,二者均不含有信号肽。低温(4℃)和盐(NaCl)胁迫均影响FmS6K1和FmS6K2基因的表达,水曲柳根、茎、叶中的FmS6K1和FmS6K2基因对盐更加敏感,FmS6K2基因比FmS6K1基因对低温和盐胁迫的响应更为敏感;外源ABA、GA和IAA均能够影响FmS6K1和FmS6K2基因的表达,FmS6K1在水曲柳根、茎、叶中对外源的IAA响应更大;水曲柳根茎叶中FmS6K2基因均对外源ABA处理有显著上调应答,对外源GA的响应主要在根中,但对IAA的应答主要在茎和叶片中。上述结果表明FmS6K基因在调控植物生长发育和适应逆境胁迫方面扮演重要角色。

miR-195靶向抑制S6K1基因对前列腺癌侵袭和转移的影响

目的研究miR-195靶向抑制S6K1基因调控前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移活性。方法选择2种前列腺癌细胞株DU145和LNCaP,实验分为3组,即空白对照组、过表达组和低表达组,构建DU145和LNCaP过表达和沉默表达miR-195的细胞株,分别培养24 h,采用反转录PCR(RT-PCR)法鉴定转染效果,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测凋亡率,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和转移能力;RT-PCR法检测S6K1 mRNA相对表达水平,荧光素酶报告系统确认miR-195直接调控的靶基因。结果过表达组细胞增殖率显著低于对照组,低表达组最高;凋亡率高于对照组,低表达组最低;侵袭细胞数目和划痕距离小于对照组,低表达组最大;S6K1 mRNA相对表达水平低于对照组,低表达组最高。S6K1基因为miR-195的靶基因。结论 miR-195靶向抑制S6K1基因调控前列腺癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移活性。

基于S6K1基因部分序列的鲤科鱼类系统发育关系及内含子1Indel位点分析

鲤科鱼类在东亚分布广泛且数量丰富,在物种演化上具有重要的系统发育地位.本研究基于S6K1基因5′端功能调控序列,通过PCR扩增、克隆和测序,共获得30种鱼类S6K1前端部分DNA序列(外显子1,外显子2及内含子1),对序列变异进行分析,并采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)、最大似然法(ML)和贝叶斯法(Bayesian)重建鲤科鱼类系统发育关系.亚口鱼科的胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)作为外类群,通过4种方法所得系统发育分支图大致相同,均以较高的节点支持率支持雅罗鱼系和鲃系的划分,雅罗鱼系包括雅罗鱼亚科东亚类群(East Asian group in Leuciscinae)、鲢亚科(Hypophthalmichthyinae)、鲴亚科(Xenocyprinae)、鲌亚科(Cultrinae)、亚科(Gobioninae)、鳑鲏亚科(Acheilognathinae)和亚科(Danioninae)部分种类;系统分支图也以较高的节点支持率支持鲤科鱼类东亚类群形成单系群.鲃系包括裂腹鱼亚科(Schizothoracinae)、鲃亚科(Barbinae)、鲤亚科(Cyprininae)和野鲮亚科(Labeoninae);另外,亚科中的斑马鱼(Danio rerio),麦氏(Danio myersi)和三线波鱼(Rasbora trilineata)形成一个单系群,位于系统树基部.以内含子1中大片段的插入或缺失(Indel)对物种分化及亲缘关系进行分析,以帮助理解鲤科鱼类系统发育关系或争议物种之间的亲缘关系.结果显示,内含子1中大片段的插入或缺失与物种分化具有一定的相关性,对于理解系统发育关系具有补充作用;内含子1中有许多区域较为保守,可能与功能调控有关,但本研究中并未发现S6K1序列变异与鱼类物种特征尺寸之间具有对应关系.

PCOS卵巢颗粒细胞中核糖体蛋白S6蛋白激酶表达的研究

目的:检测磷酸化核糖体S6蛋白激酶在PCOS卵巢颗粒细胞中的表达,探讨S6K1激酶表达与PCOS颗粒细胞增殖的关系。方法:分离行体外受精一胚胎移植的患者的卵泡颗粒细胞,接种于M199培养基进行原代培养,RT-PCR方法分析所培养的卵泡颗粒细胞S6K1基因表达及免疫荧光细胞化学染色法进行S6K1蛋白定位和western blot方法分析S6K1蛋白表达。结果:分离培养的人卵泡颗粒细胞经过RT-PCR扩增获得长度为212bp的特异性片段。免疫荧光细胞化学染色显示S6K1阳性染色定位于细胞胞浆,呈红色荧光。与正常组相比,经过Real-time PCR检测分析两组S6K1基因表达具有统计学差异(P<0.05),经过western blot检测分析两组S6K1蛋白表达具有统计学差异(P<0.05)。结论:与对照组相比PCOS患者颗粒细胞S6K1表达显著性降低,可能与PCOS颗粒细胞增殖缓慢有关。