烤烟新品种S79—1选育及其栽培调制研究通过鉴定

安徽省农科院凤阳烟草研究所,1979年在所内花叶病严重发生的长脖黄烟田里,选出优良特异单株,通过系统选育,至1988年育成烤烟优良品系S79—1,并研究出相应的栽培调制配套技术。受安徽省科委委托,1989年6月27日由安徽省农科院主持,在合肥召开了烤烟新品种 S79—1选育及其栽培调制研究成果鉴定会。

流行性腮腺炎疫苗株S79全基因序列测定与分析

目的 腮腺炎疫苗株S79工作种子噬斑纯化及全基因组测序,针对国内已经分离出的毒株,从分子生物学角度探讨疫苗保护力相关问题.方法 噬斑纯化S79疫苗株,利用RT-PCR分段扩增S79株两种亚株的全基因并测序,比较S79株与其来源株Jeryl Lynn（JL）核酸序列差异;从GenBank中获得WHO各基因型参考株和中国腮腺炎流行株疏水蛋白（SH）序列,分析病毒株和疫苗株遗传距离,并构建基因亲缘性关系树.结果 S79疫苗株由两种亚株构成,比例为2∶5（major∶minor）,获得全基因序列并递交GenBank;与相应的JL株相比,核苷酸序列同源性分别为99.7%和100%.亚株序列中存在散在区段异源重组.S79疫苗株为A基因型,中国的流行株为F基因型,遗传距离为11.2%～20.0%.结论 S79疫苗株由两种亚株构成,两亚株的全基因序列与JL株基本一致,但亚株的比例与国际上应用的其他JL疫苗株存在较大差异.疫苗株与中国流行株不属于同一基因型,遗传距离较远.S79疫苗免疫保护效果的差异可能主要与疫苗株和流行株不属于同一基因型有关.

国产MMR疫苗和S79疫苗预防流行性腮腺炎的安全性和免疫原性Meta分析

目的评价国产麻疹-腮腺炎-风疹联合疫苗(MMR)疫苗和S79疫苗的安全性和免疫原性。方法计算机检索中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库等获取相关临床文献。按照Cochrane系统评价的方法评价纳入研究的质量,并使用RevMan 4.2.8软件进行统计分析。结果检索到符合Meta分析的临床对照研究文献4篇,样本量1 586例,采用固定效应模型分析,结果显示全身发热事件发生率分析有统计学意义,国产MMR疫苗高于进口MMR疫苗,全身皮疹不良反应的发生率无统计学意义。国产和进口MMR及国产S79疫苗流行性腮腺炎病毒HI抗体阳转率和保护性抗体阳转率差异均无统计学意义。结论安全性方面,国产MMR疫苗全身发热事件的发生率高于进口MMR疫苗,全身出疹发生率与进口MMR疫苗相同;在免疫原性方面,国产MMR疫苗及S79疫苗与进口MMR疫苗相同。由于本系统评价纳入的文献质量较低、数量较少,且有些文献病例数较少,因此有待纳入更多设计合理、执行严格的多中心大样本的临床对照研究文献进行分析。

流行性腮腺炎病毒减毒株S_(79)在几株肿瘤细胞和正常细胞中增殖的比较研究

目的 比较HeLa、SPC A1、ACHN、HT10 80 4株肿瘤细胞和wish、HELHES、HEK 4株正常人二倍体细胞对MuVS79病毒的敏感性和病毒对细胞的不同影响。方法 细胞感染病毒后用CPE实验和血球吸附实验研究病毒的复制情况 ,用空斑实验测定细胞裂解液的PFU ;用MTT实验 ,活细胞计数 ,流式细胞仪实验 ,TUNEL染色等研究MuVS79对细胞的影响。结果 MuVS79在 4株肿瘤细胞中的增殖能力明显 >4株正常人二倍体细胞 ,敏感顺序为ACHN >HeLa >HT10 80 >SPC A1>HEK>wish >HEL ,HES。染毒后 ,肿瘤细胞的生长速度明显减慢 ,用MTT实验测得HeLa、SPC A1、ACHN、HT10 80、HEK、wishHEL和HES的细胞生长抑制率分别为 38.2 % 33.0 % 4 1.2 % 35 .6 % 7.2 % 5 .6 % 1.2 %和 1.4 %。感染MuVS79后可引起肿瘤细胞G1期细胞阻滞 ,与未染毒对照细胞比较凋亡发生率明显增高 ;而 4株正常人二倍体细胞凋亡发生率未见明显变化。结论 MuVS79具有选择地在肿瘤细胞中增殖和引起肿瘤细胞凋亡的能力。

利用花培与辐照诱变培育粳型两系不育系江79S

为创制新的两系不育系,并将其应用于强优势杂交水稻品种培育,综合利用花培和诱变技术培育了粳稻两系不育系江79S。取培矮64S/粳稻H179的F_(1)幼穗,利用花药培养技术培育获得一个粳型光温敏不育系S79;后采用高能碳离子束处理S79干种子,在其后代中选育了一个熟期突变体GS79(江79S),其在长日照和短日照条件下始穗表现不同,分别较S79早7 d左右和迟5 d左右。观察江79S的育性转换特性,发现其在嘉兴种植时,每年9月8日左右开始出现可育花粉并开始结实;在陵水种植时,植株正常结实且结实率达80%以上。人工气候箱光温敏特性鉴定结果表明,江79S在长日照条件下育性转换温度低于23.5℃。稻米品质和抗性鉴定结果为江79S米质达农业部(现农业农村部)部颁三级优质米标准,苗叶期抗稻瘟病。对江79S进行全基因组测序,分析发现其携带源自农垦58S的光敏不育基因pms1和pms3,且含携带抗稻瘟病基因pi21、Pia、Pid3和Pita,与其高抗苗瘟的特性相一致。以江79S配制的亚种间杂交水稻品种江两优7901通过了国家主要农作物品种审定。本研究结果为综合运用花培和辐照诱变技术培育新两系不育系材料提供了研究方法。

S_(79)株流行性腮腺炎病毒不同代次的序列研究

目的观察流行性腮腺炎(腮腺炎)病毒(MuV)S79株各代病毒的蛋白基因在传代过程中是否发生变化,对比S79株主代病毒(S79-1-3)、蚀斑纯化病毒(S79-1-P7-3③)及ME(Enders株)病毒的基因差异。方法S79株主代病毒及蚀斑纯化病毒在原代鸡胚细胞(CEC)上连续传递12代,观察每代病毒培养特性及高变区SH基因序列,又选择其中的CEC5、6、10、15代,以及在鸡胚尿囊腔中传代的ME株病毒,测定各个主要基因序列(N、NS1/P、M、F及HN基因),对核苷酸序列和它相应的氨基酸序列以及基因差异进行计算机分析。结果S79株主代病毒及其蚀斑纯化病毒在CEC上连续传递12代,其培养特性、致细胞病变(CPE)及病毒滴度基本稳定。S79株主代病毒及其蚀斑纯化病毒与ME株病毒同属A基因型。S79株疫苗各个代次之间高变区SH基因未见突变。S79株的5、6、10、15代病毒在各个主要基因区域有散在基因的有意义突变比例极低。S79-1-3中不同亚株之间的比例可能会随传代而发生变化,比较认为经过蚀斑纯化的S79-1-P7-3③株在传代中较S79-1-3株更为稳定。结论S79株病毒与文献报道的JL2株十分相似,经连续传代总体的核苷酸差异<0.5%。S79-1-3主代病毒在药典规定代次范围内甚为稳定。经纯化的各代S79病毒则更为稳定,从分子水平上提示其在CEC15代内都可作为工作代毒种使用。

腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

目的建立腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法,并进行验证。方法针对腮腺炎减毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守区域设计特异性引物和Taq Man荧光探针;以05008批腮腺炎减毒活疫苗S79株成品作为参考品,将参考品或供试品稀释后,接种于长成单层的Vero细胞中,采用低渗合并冻融法将细胞破碎,吸取上清,进行荧光定量RT-PCR。优化病毒感染时间,并对该方法的特异性、精密性及准确性进行验证。结果病毒感染的最佳时间为18 h;建立的荧光定量RT-PCR法只对腮腺炎减毒活疫苗具有特异性扩增,对灭活的腮腺炎减毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、风疹病毒和Vero细胞均无扩增曲线出现;该方法检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品6组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<5%,不同操作人员于不同日期检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品的标准曲线回归方程R2均大于0.97,RSD均<5%;该方法与细胞病变法测得的11批腮腺炎减毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 Lg CCID50/ml,两组数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的荧光定量PCR法检测腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度特异性较强,精密性和准确性良好,且快速方便,可应用于企业生产过程中的内部质控。

荧光定量RT-PCR滴度检测法在腮腺炎减毒活疫苗制造中的应用

目的:为促进荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)滴度检测法在腮腺炎减毒活疫苗制造中的实际应用提供参考。方法:建立滴度-ct值标准曲线回归方程;分别用微量细胞病变法和荧光定量RT-PCR滴度检测法对10批腮腺炎减毒活疫苗单次收获液及成品进行滴度检测,比较检测结果。结果:两种方法检测结果经配对t检验分析,P分别为0.743、0.868,差值均值分别在(-0.174,0.094)、(-0.113,0.153)之间,差异无统计学意义,可以认为等同。结论:荧光定量RT-PCR滴度检测法可用于腮腺炎减毒活疫苗制造过程中的单次收获液及成品滴度检测,有望进一步升级为《中国药典》方法。