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SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达
1
作者
王忠泽
荫俊
+3 位作者
侯晓军
宋伟
张松乐
王剑
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2002年第3期235-238,共4页
采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp...
采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知VP7序列相同 .表达后经细胞超声破碎 ,Westernblot检测表达产物 ,在相对分子质量 38× 1 0 3 处有表达条带 ,表达蛋白主要存在于上清中 .因此 ,获得了VP7基因 ,并在COS 7细胞中获得了表达 ,表达蛋白质免疫Balb c小鼠 。
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关键词
sa11株
轮状病毒
VP7基因
基因克隆
基因表达
下载PDF
职称材料
重组腺病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白及其糖基化
被引量:
4
2
作者
孙茂盛
昝云红
+3 位作者
马雁冰
张光明
杜秋江
戴长柏
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第1期52-56,共5页
目的 用重组人腺病毒表达经修饰的轮状病毒 VP4基因。方法 RT- PCR扩增全长 VP4基因 ,在基因 5′末端引入信号肽序列 ,将带信号肽顺序的 VP4基因插入到含人巨细胞病毒启动子质粒中 ,然后克隆带巨细胞病毒启动子和信号肽的 VP4基因到...
目的 用重组人腺病毒表达经修饰的轮状病毒 VP4基因。方法 RT- PCR扩增全长 VP4基因 ,在基因 5′末端引入信号肽序列 ,将带信号肽顺序的 VP4基因插入到含人巨细胞病毒启动子质粒中 ,然后克隆带巨细胞病毒启动子和信号肽的 VP4基因到人腺病毒 5型转移载体上。用同源重组方法共转染 2 93细胞 ,点杂交 ,酶谱分析筛选重组病毒。结果 VP4全基因 2 36 2 bp未发现突变。间接免疫荧光试验表明 ,重组腺病毒所表达的外源蛋白具有特异性和较强抗原性 ,蛋白印迹及免疫沉淀试验证明 ,表达的蛋白相对分子质量大于野生型 VP4蛋白 ,符合糖化后应有的相对分子质量 ,且这种糖基化蛋白可被特异性酶所消化。结论 提高重组蛋白的稳定性、抗原性 ,进行目的基因改造也许是一条有效的途径。
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关键词
轮状病毒
重组腺病毒
糖基化作用
sa
11
毒
株
下载PDF
职称材料
由双重杆状病毒表达载体产生的轮状病毒2/6VLP对小鼠的免疫原性和保护效力
3
作者
王剑虹
《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》
2005年第2期93-94,共2页
关键词
杆状病毒表达载体
轮状病毒
保护效力
免疫原性
小鼠
VLP
sa11株
SE
et
VP6蛋白
病毒样颗粒
13基因
P2蛋白
蛋白构成
医学院
VP2
同源性
编码
下载PDF
职称材料
轮状病毒全长VP4抗原在大肠杆菌中的表达
被引量:
4
4
作者
刘馨
孙茂盛
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期198-198,共1页
关键词
轮状病毒
大肠杆菌
VP4
抗原
全长
中和抗体滴度
sa11株
病毒蛋白
蛋白含量
免疫小鼠
外壳蛋白
纯化产物
原文传递
题名
SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达
1
作者
王忠泽
荫俊
侯晓军
宋伟
张松乐
王剑
机构
北京微生物流行病研究所
张家口医学院
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2002年第3期235-238,共4页
基金
国家新药基金资助项目 ( 96 90 1 0 5 16 5 )
文摘
采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知VP7序列相同 .表达后经细胞超声破碎 ,Westernblot检测表达产物 ,在相对分子质量 38× 1 0 3 处有表达条带 ,表达蛋白主要存在于上清中 .因此 ,获得了VP7基因 ,并在COS 7细胞中获得了表达 ,表达蛋白质免疫Balb c小鼠 。
关键词
sa11株
轮状病毒
VP7基因
基因克隆
基因表达
Keywords
rotavirus
gene clone
gene expression
分类号
R373.25 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
重组腺病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白及其糖基化
被引量:
4
2
作者
孙茂盛
昝云红
马雁冰
张光明
杜秋江
戴长柏
机构
中国医学科学院
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第1期52-56,共5页
文摘
目的 用重组人腺病毒表达经修饰的轮状病毒 VP4基因。方法 RT- PCR扩增全长 VP4基因 ,在基因 5′末端引入信号肽序列 ,将带信号肽顺序的 VP4基因插入到含人巨细胞病毒启动子质粒中 ,然后克隆带巨细胞病毒启动子和信号肽的 VP4基因到人腺病毒 5型转移载体上。用同源重组方法共转染 2 93细胞 ,点杂交 ,酶谱分析筛选重组病毒。结果 VP4全基因 2 36 2 bp未发现突变。间接免疫荧光试验表明 ,重组腺病毒所表达的外源蛋白具有特异性和较强抗原性 ,蛋白印迹及免疫沉淀试验证明 ,表达的蛋白相对分子质量大于野生型 VP4蛋白 ,符合糖化后应有的相对分子质量 ,且这种糖基化蛋白可被特异性酶所消化。结论 提高重组蛋白的稳定性、抗原性 ,进行目的基因改造也许是一条有效的途径。
关键词
轮状病毒
重组腺病毒
糖基化作用
sa
11
毒
株
Keywords
rotavirus
recombinant adenovirus
glycosylation
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
由双重杆状病毒表达载体产生的轮状病毒2/6VLP对小鼠的免疫原性和保护效力
3
作者
王剑虹
出处
《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》
2005年第2期93-94,共2页
关键词
杆状病毒表达载体
轮状病毒
保护效力
免疫原性
小鼠
VLP
sa11株
SE
et
VP6蛋白
病毒样颗粒
13基因
P2蛋白
蛋白构成
医学院
VP2
同源性
编码
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
轮状病毒全长VP4抗原在大肠杆菌中的表达
被引量:
4
4
作者
刘馨
孙茂盛
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期198-198,共1页
关键词
轮状病毒
大肠杆菌
VP4
抗原
全长
中和抗体滴度
sa11株
病毒蛋白
蛋白含量
免疫小鼠
外壳蛋白
纯化产物
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达
王忠泽
荫俊
侯晓军
宋伟
张松乐
王剑
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2002
0
下载PDF
职称材料
2
重组腺病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白及其糖基化
孙茂盛
昝云红
马雁冰
张光明
杜秋江
戴长柏
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000
4
下载PDF
职称材料
3
由双重杆状病毒表达载体产生的轮状病毒2/6VLP对小鼠的免疫原性和保护效力
王剑虹
《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》
2005
0
下载PDF
职称材料
4
轮状病毒全长VP4抗原在大肠杆菌中的表达
刘馨
孙茂盛
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
4
原文传递
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