重组腺病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白及其糖基化

目的 用重组人腺病毒表达经修饰的轮状病毒 VP4基因。方法 RT- PCR扩增全长 VP4基因 ,在基因 5′末端引入信号肽序列 ,将带信号肽顺序的 VP4基因插入到含人巨细胞病毒启动子质粒中 ,然后克隆带巨细胞病毒启动子和信号肽的 VP4基因到人腺病毒 5型转移载体上。用同源重组方法共转染 2 93细胞 ,点杂交 ,酶谱分析筛选重组病毒。结果 VP4全基因 2 36 2 bp未发现突变。间接免疫荧光试验表明 ,重组腺病毒所表达的外源蛋白具有特异性和较强抗原性 ,蛋白印迹及免疫沉淀试验证明 ,表达的蛋白相对分子质量大于野生型 VP4蛋白 ,符合糖化后应有的相对分子质量 ,且这种糖基化蛋白可被特异性酶所消化。结论 提高重组蛋白的稳定性、抗原性 ,进行目的基因改造也许是一条有效的途径。