姜黄素协同β-榄香烯诱导涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83凋亡的研究

[目的]研究姜黄素协同β-榄香烯诱导体外培养涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83凋亡的情况。[方法]应用MTT测定法、流式细胞术和透射电镜观察等方法观察姜黄素协同β-榄香烯(浓度比1∶1)诱导SACC-83细胞凋亡及其与G2/m期阻滞关系。[结果](1)应用MTT测定法,姜黄素协同β-榄香烯(浓度比1∶1)作用SACC-83细胞24 h后,其抑制率有明显协同效应。(2)流式细胞术分析,10μg/mL姜黄素与10μg/mLβ-榄香烯联合作用SACC-83细胞24 h后诱导SACC-83细胞发生凋亡,并将细胞周期阻滞于G2/m期。(3)透射电镜观察,协同用药作用SACC-83细胞24 h后,出现明显细胞凋亡特征。[结论]姜黄素和β-榄香烯(浓度比1∶1)对SACC-83细胞的抑制有协同作用,并诱导其产生凋亡,使其细胞周期阻滞于G2/m期。

黏着斑激酶和细胞外信号调节激酶在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达及其意义

目的:检测黏着斑激酶(FAK)及细胞外信号调节激酶(ERK)在涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞系SACC-LM和SACC-83中的表达,探讨其与SACC肺转移发生的关系。方法:选择停止在G1/S期的SACC-LM和SACC-83细胞,测定其细胞内FAK和ERK酶活力,采用Western blotting方法检测SACC-LM及SACC-83细胞中FAK及ERK蛋白表达,对其结果进行量化分析。结果:FAK及ERK在SACC-LM细胞中的活性均高于SACC-83细胞(P<0.01),SACC-LM细胞中FAK酶活性与ERK酶活性呈正相关关系(r=0.62,P<0.05)。Western blotting方法检测到在SACC-LM细胞中两种蛋白的表达水平均高于在SACC-83细胞中的表达水平(P<0.05)。结论:FAK及ERK可能参与了SACC的发生发展过程和转移信号转导通路,FAK及ERK蛋白表达变化与SACC的转移行为有关。

单次不同X线剂量照射对SACC-83细胞的放射生物学效应

目的 了解体外培养的SACC-83细胞对不同剂量X线照射的反应。方法 采用SACC-83细胞系,于体外分别给予 2Gy、5Gy、lOGy、15Gy、20Gy、25Gy和 30Gy的X线照射,进行集落细胞数、集落形成率、凋亡DNA电泳梯状图谱、流式细胞仪凋亡率的检测和细胞形态学观察。结果 对照组细胞倍增迅速,2Gy、5Gy、l0Gy细胞增殖缓慢, 15Gy以上的其余各组细胞未见增殖;集落形成率检测显示, 15Gy以上剂量照射各组均为 0. 2~15Gy照射能检测到凋亡带, 15Gy以上为明显的坏死带。15Gy已达体外SACC-83细胞的致死剂量。在形态学上 20~30Gy为坏死,在 10Gy^15Gy为凋亡与坏死的过渡区,在l0Gy剂量时表现为单纯的细胞凋亡, 2~5Gy表现为凋亡细胞与活细胞同时并存。经 2, 5Gy剂量照射细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2 /M期细胞的比例增多,经 10、15、2OGy剂量照射细胞主要表现为S期细胞和G2 /M期细胞的比例均减少。结论 通过SACC-83建立的射线细胞模型,提示在单次连续低剂量的放射线作用下表现为凋亡和活细胞共存,随着放射剂量的增加为凋亡,进而为凋亡和坏死并存,大剂量时,为细胞的坏死,这说明放射线对腺样囊性癌的作用为致细胞凋亡和直接细胞毒作用。照射剂量不同可能引起不同时相的细胞发生凋亡。

β-榄香烯对人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中VEGF蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯对人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。方法分别用浓度为40、60和80mg／L的β-榄香烯乳剂处理人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞12h和24h。对照组仅换培养液，不加β-榄香烯。应用免疫组织化学S—P法检测VEGF在人涎腺腺样囊腺癌细胞中的表达。结果不同浓度的β-榄香烯对SACC-83细胞中VEGF蛋白的表达均有影响，与对照组两两相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；以浓度为60mg／Lβ-榄香烯作用24h最强，但与其他实验组两两相比，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论β-榄香烯可下调人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中VEGF蛋白的表达，为临床进一步防治涎腺腺样囊腺癌浸润转移奠定一定的理论基础。

榄香烯对人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞eIF4E及VEGF表达影响的研究

目的探讨β-榄香烯对体外培养的人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中真核细胞翻译启始因子(eIF4E)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法将SACC-83细胞复苏培养24 h后分为6组:空白对照组,榄香烯60 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、120 mg/L组,顺铂组,采用免疫细胞化学方法检测各组不同时点(12 h、24 h、48 h)SACC-83细胞中eIF4E和VEGF蛋白表达水平。结果β-榄香烯各组和顺铂组各时点与对照组比较,均下调人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中eIF4E及VEGF蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),且均有时间、剂量依赖性。100 mgg/L、120 mg/L榄香烯组对SACC-83细胞中eIF4E及VEGF蛋白下调水平低于顺铂组(P<0.05)。结论β-榄香烯通过抑制SACC-83细胞的生长,遏制了肿瘤血管、淋巴管转移,为肿瘤靶向治疗提供了理论基础和实验依据。

重组人白细胞介素2对重组人肿瘤坏死因子抗肺癌AGZY-83a细胞株的增强作用

采用染料摄入法,以重组人白细胞介素2(rhIL-2)和重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-SAMZ)联合应用于肺腺癌 AGZY-83a 细胞株,探讨 rhIL-2对 rhTNF-SAMZ 抗肿瘤的增强作用。结果表明,rhIL-2单独使用对 AGZY-83a 无细胞毒作用,rhIL-2在39.06～2500U/ml 浓度下分别与对应的 rhTNF-SAMZ 伍用,对 AGZY-83a 的细胞毒作用均较 rhTNF-SAMZ 单独使用有所增强,但存在剂量选择性。当二者均为625U/ml 时,增强作用最强。

银杏酚酸对人腺样囊性癌细胞SACC-83作用的研究

目的探讨银杏酚酸(Ginkgolic Phenols And Acids,GPAA)对体外培养SACC-83的抑制作用,通过MTT法检测其对SACC-83的生长抑制率。方法采用流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡比例,倒置显微镜观察细胞凋亡。结果 GPAA对SACC-83的增殖有抑制作用,且与浓度呈正相关。结论GPAA对SACC-83的生长具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡。

YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达

目的:观察YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达。方法:通过免疫组织化学法检测YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达,用Western印迹法检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对涎腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)SACC-83细胞YAP2蛋白的抑制。结果 :SACC组织中YAP2蛋白在肿瘤细胞胞质中阳性表达,正常腺体中YAP2蛋白主要表达在部分导管上皮中,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色结果显示SACC-83中YAP2蛋白阳性表达,加入EGFR蛋白后,SACC-83中YAP2蛋白表达有所降低。Western印迹法结果显示,不同质量浓度的EGFR蛋白(5、10、20、40μg/L)对SACC-83细胞YAP2蛋白的表达都有一定抑制作用,其中40μg/L质量浓度组抑制作用最明显。结论:YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中高表达,EGFR蛋白对YAP2蛋白在SACC-83中表达有抑制作用。

P53对涎腺腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的为了探讨P53基因对腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用及机制。方法构建携带人野生型P53基因的腺病毒表达载体,以脂质体法瞬时转染腺样囊性癌SACC83细胞,RT PCR检测转染细胞P53基因mRNA的表达,TRAP PCR ELISA法检测转染细胞端粒酶活性的改变。并将P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2630共转染SACC83细胞,测定转染细胞荧光素酶报告基因活性。结果1.瞬时转染含人野生型P53基因的重组腺病毒表达载体pΔE1P53于腺样囊性癌SACC83细胞后,其P53基因mRNA的表达明显增强;2.基因转染后,SACC83细胞内源性端粒酶活性显著降低。3.P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2630共转染SACC83细胞后,其荧光素酶活性显著下降。结论外源性表达P53基因可以降低腺样囊性癌细胞SACC83细胞端粒酶活性,并可能通过抑制端粒酶hTERT基因启动子的转录活性实现。

吲哚乙酸/辣根过氧化物酶对SACC-83细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨植物激素中吲哚乙酸/辣根过氧化物酶(IAA/HRP)对人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞体外增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用CCK-8比色法检测IAA/HRP对人涎腺腺样囊性癌SACC-83增殖的抑制作用,应用实时荧光定量PCR及Western blot检测凋亡相关基因Caspase-3和Livinα基因mRNA及蛋白表达水平的改变。结果:IAA/HRP对SACC-83细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的IAA/HRP(60、100μmol/L IAA+1.2 mg/L HRP)可上调Caspase-3 mRNA及蛋白的表达(P<0.05),下调LivinαmRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论:IAA/HRP可抑制SACC-83增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制是通过调节Caspase-3和Livinα的表达而实现的。

涎腺腺样囊性癌来源外泌体促进成纤维细胞PD-L1表达

目的:研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)来源的外泌体(exosome,EXO)对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法:通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型;使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育,以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取;将EXO与HPLF细胞共孵育后,全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因,GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路;使用qPCR、Western blotting和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果:SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF细胞内吞摄取;EXO处理HPLF细胞后,细胞中PD-L1分子显著上调表达(Fold change=10.19),差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反应信号通路;体外实验证明EXO可以从mRNA和蛋白水平显著促进HPLF细胞中PD-L1的表达(24.7±4.75 vs 1.03±0.11,P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞来源EXO可以促进HPLF细胞中免疫检查点配体PD-L1的表达。

乌骨藤中C_(21)甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的研究乌骨藤提取物C_(21)甾体苷对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC)低侵袭细胞株(salivaryadenoidcysticcarcinoma-83,SACC-83)和肺高转移细胞株(SACC-LM)增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度(5,10,20,40,60,80,100μmol·L^(-1))C_(21)甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC_(20)和IC_(50);细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果不同浓度的C_(21)甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C_(21)甾体苷的IC_(20)浓度为7.49μmol·L^(-1),IC_(50)浓度为38.34μmol·L^(-1);作用于SACC-LM细胞的C_(21)甾体苷IC_(20)浓度为9.30μmol·L^(-1),IC_(50)浓度为46.04μmol·L^(-1);细胞克隆集落形成明显减少。C_(21)甾体苷IC_(20)浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。经7.49,9.30μmol·L^(-1)C_(21)甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.01),而Bax、Caspase3的mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论乌骨藤C_(21)甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。

涎腺疾病

Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用；HSV-tk与p53基因对涎腺多形性腺瘤细胞的杀伤作用；腮腺良性肿瘤切除的改良术式；抑癌基因PTEN在腮腺肿瘤中的突变与缺失；基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在涎腺多形性腺瘤生物学行为中的意义；涎腺透明细胞癌10例临床病理分析；……

涎腺疾病

20051965 紫杉醇及β榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞毒作用的研究；20051966 涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的诱导与P53基因的修复；20051967 腮腺癌术后放疗的评价；20051968 涎腺腺样囊性癌中p53、PCNA评分和Bcl-2表达与病理分型和复发的关系；20051969 自体下颌下腺移植治疗重症干眼症的供体制备；20051970KAT性腮腺炎8例报告……

涎腺疾病

LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响，紫杉醇对腺样囊性癌细胞侵袭力及明胶酶的影响，转化生长因子β1在人涎腺黏液表皮样癌高低转移细胞系中的表达，神经营养素-3对腺样囊性癌细胞体外迁移能力的影响……