激活Sonic hedgehog通路改善缺血缺氧心肌细胞DNA损伤

目的探究Sonic hedgehog通路在糖氧剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)诱导的乳鼠心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用及机制。方法原代培养乳鼠心肌细胞,建立OGD的缺血缺氧模型,分别给予Sonic hedgehog通路激动剂SAG1.3(0.002μmol·L^(-1))、抑制剂GANT61(0.005μmol·L^(-1))处理6、12 h,MTT法检测细胞生存率;Western blot检测DNA损伤标志物γH2AX、DNA损伤反应蛋白ATM、ATR,以及细胞凋亡相关蛋白p53、凋亡标志物cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达;免疫荧光检测γH2AX表达。结果与正常组相比,OGD组心肌细胞γH2AX、p-ATM表达呈时间依赖性增加,OGD 6 h达到高峰,OGD 12 h后表达逐渐下降;p-p53、cleaved-caspase-3表达增加,Bcl-2/Bax比例下降;与OGD 6 h、OGD 12 h组相比,给予SAG1.3组OGD心肌细胞γH2AX、p-ATM表达明显下降,心肌细胞存活率上升,p-p53、cleaved-caspase-3表达下降,Bcl-2/Bax比例上升;GANT61组OGD心肌细胞较OGD组γH2AX、p-ATM表达明显上升,细胞存活率下降,p-p53、cleaved-caspase-3表达上升,Bcl-2/Bax比例下降。结论激活Sonic hedgehog通路可以通过抑制ATM磷酸化,减少γH2AX表达,改善缺血缺氧诱导的心肌细胞DNA损伤,抑制细胞凋亡。