SAP18和Sufu蛋白质复合物的表达纯化研究

通过分子克隆技术将Sufu和SAP18构建到原核载体,在原核表达系统进行外源表达,采用亲和层析和分子筛层析对Sufu和SAP18及其复合物进行纯化。同时利用非变性胶的方法进一步确定该蛋白之间的相互作用及结合比例。结果表明,原核表达系统中Sufu和SAP18蛋白表达量高,可以纯化到高纯度的蛋白质。Sufu和SAP18结合的摩尔比为1:1,按摩尔比1:2混合、纯化可以得到高纯度、稳定的蛋白复合物,从而为进一步复合物的结构生物学研究奠定基础。

Sin3A相关蛋白18在宫颈癌组织中表达及临床意义

为探讨Sin3A相关蛋白18 (SAP18)在宫颈癌组织中的表达情况,并研究SAP18对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移能力的影响与分子机制。利用TCGA和GTEx数据库分析SAP18在宫颈癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,并计算SAP18表达水平与患者生存率的关系。免疫组织化学染色试验检测宫颈癌组织标本中SAP18蛋白的表达情况。CCK-8试验和软琼脂克隆形成试验检测SAP18对HeLa细胞增殖的影响,细胞划痕试验检测SAP18对HeLa细胞迁移能力的影响。免疫印迹法验证敲低人乳头瘤病毒(HPV)编码的E6、E7蛋白对SAP18表达水平的影响。结果表明:SAP18在宫颈癌组织中呈高表达;SAP18表达水平与宫颈癌患者生存率呈负相关。过表达SAP18可增强HeLa细胞克隆形成、增殖和迁移能力。敲低HPV E6和E7蛋白导致SAP18表达水平下调。这一研究说明HPV通过E6和E7蛋白上调SAP18的表达促进宫颈癌恶性转化、增殖和迁移,SAP18蛋白的高表达不利于宫颈癌患者的生存。