Affymetrix公司开发出SARS基因芯片

Affymetrix公司是目前全球最大的基因芯片提供商,在SARS基因组序列公布不到一周的时间里,公司就宣布已经开发出SARS基因诊断芯片。这种芯片在SARS流行病学研究和诊断中将起到重要作用。 该芯片利用加拿大、美国和亚洲公布的SARS病毒基因组序列制成,包含了所有的29,700个碱基。

SARS-CoV S蛋白基因的克隆及其与VSV-G融合表达载体的构建

为了解重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)表面S蛋白的受体结合功能域及其在宿主细胞上的作用受体,应用PCR技术从SARS-CoVcDNA中克隆到S蛋白的全长基因,并构建了S蛋白与疱疹性口腔炎病毒胞膜蛋白(VSV-G)融合表达载体pVSV-G'-SG,进而为制备含有SARS-CoVS蛋白膜外区的逆转录病毒假毒粒奠定了实验基础。

BCR-ABL抑制剂STI571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究

为了探讨抑癌基因SARI(suppressor of AP-1regu lated by IFN)在慢性髓系白血病(CML)中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群中SARI基因的相对表达水平。在体外以CML细胞株K562为研究模型,使用BCR-ABL抑制剂STI571(im atinib)处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测SARI基因的相对表达水平。结果表明,CML患者外周血中SARImRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异(p<0.001)。使用STI571(2.5μm o l/L)处理K562细胞24小时后SARImRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性(p<0.001)。结论:CML患者外周血SARImRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且SARI基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关。本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索。

猪Sar1b基因的分子克隆、序列分析及原核表达

根据GenBank已发表的猪Sar1b基因序列(GenBank登录号:AY819557)设计1对引物,以猪肝脏组织总RNA的反转录产物为扩增模板,用RT-PCR方法扩增出猪Sar1b基因cDNA全长编码区,经过EcoRI-SalI双酶切后定向克隆于pET28a原核表达载体,获得pET28a-Sar1b重组原核表达载体。将携带有重组原核表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过1 mmol/LITPG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大小大约为26 ku,与预期表达蛋白大小一致。Western blot检测显示该蛋白为His融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。猪Sar1b基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

SARS冠状病毒Orf3和Orf4的克隆和分析

目的 :克隆SARS冠状病毒的Orf3和Orf4两个开放性读框 ,并对其进行DNA序列和蛋白质结构分析。方法 :通过RT PCR ,从SARS冠状病毒基因组中扩增得到特异性片段 ,利用TA克隆将PCR产物克隆入PUCm T载体并进行测序、同源性比较和蛋白质结构分析。结果 :RT PCR扩增出的特异产物与预期长度相符 ,序列分析表明 ,其核苷酸序列与已发表的SARS病毒的Orf3和Orf4同源性在 99%以上。结论 :成功克隆SARS冠状病毒Orf3和Orf4两个开放性读框 ,为表达及功能研究奠定了基础。

关节假体周围感染早期诊断中的eno和sar A基因检测

目的探讨eno和sar A基因检测应用于关节假体周围感染(PJI)早期诊断的效率和价值。方法选择5种最常见PJI致病菌,通过37℃培养、单克隆TSB肉汤扩增;盖玻片置入并37℃恒温摇床48 h培养成膜,建立体外PJI人体关节模型,并提取经过超声波裂解的RNA洗脱液样本41个进行eno和sar A基因的PCR检测,根据检测结果分析诊断的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值、准确性并比较差异。结果eno检测具有较高的敏感性(83.33%),但较多假阳性结果影响其检测特异性(47.06%);sar A检测没有出现假阳性结果,检测特异性较高(100%),但敏感性偏低(41.67%)。结论eno和sar A基因检测用于早期诊断PJI有很高的使用价值,合理设计并序贯应用eno的检测敏感性初步诊断和sarA的特异性筛除假阳性结果能够更好地实现早期诊断葡萄球菌致病PJI。

SARS由蝙蝠传播至人类谜底正在揭开

近日从中科院武汉病毒所获悉,该所石正丽与崔杰课题组在云南省一处洞穴里发现一个菊头蝠种群,经过5年的SARS样冠状病毒监测,在它们体内所含的病毒毒株中,找到了传播至人类的SARS病毒的全部基因组组分。2002年末,广东省出现多例类似肺炎的病例,即严重急性呼吸综合征（SARS）。2003年SARS在全球范围内传播并感染了数千人。科学家鉴定出罪魁祸首为一株冠状病毒,

SARS2基因错义突变所致HUPRA综合征的临床特征和遗传学分析并文献复习

目的分析高尿酸血症-肺动脉高压-肾衰竭-碱中毒综合征(HUPRAS)的SARS2致病基因特定位点的致病性。方法选取2022年3月9日就诊于福建省儿童医院的HUPRAS患儿1例,对患儿进行临床和实验室检查,抽取患儿及其父母外周血进行全外显子基因变异检测,并对所筛选的变异进行Sanger测序验证及生物信息学分析。结果患儿男,6个月,其SARS2等位基因分别携带父系遗传的c.1205G>A/p.Arg402His变异和母系遗传的c.680G>A/p.Arg227Gln变异,其中c.680G>A既往未被报道。这两个变异人群频率极低,致病性软件预测其有害。Arg402和Arg227均进化高度保守,突变导致其编码的丝氨酰tRNA合成酶的氢键结构及疏水性均产生了变化,提示这两个变异能够解释患儿HUPRAS表型。结论SARS2基因的c.1205G>A/p.Arg402His和c.680G>A/p.Arg227Gln复合杂合变异可能导致HUPRAS。

应用多重PCR检测食品中SARS病毒靶基因的初步研究

以分子生物学方法——聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,初步探讨了食品中SARS病毒靶基因片段的多重PCR检测技术。根据GenBank公开发表的SARS病毒基因组cDNA序列,人工合成克隆特异性靶基因DNA片段,以此片段作为阳性对照,并将其添加到罐装蘑菇、牛肉干、大豆、鱼干等食品的cDNA中作为阳性样品,再根据世界卫生组织推荐的引物序列合成引物,进行单PCR与多重PCR检测分析。结果表明:以单PCR法获得了121bp、182bp及302bp3条靶基因片段;以二重PCR法获得了121bp+182bp、121bp+302bp与182bp+302bp的靶基因片段组合;以三重PCR法获得了121bp+182bp+302bp的靶基因片段组合。检测灵敏度的实验表明:182bp片段的模板DNA量在0.003ng以上时,单PCR都能扩出清晰的条带,而121bp的靶基因片段只有模板DNA量在0.03ng以上时,单PCR才能扩出清晰的条带。它们的二重PCR分析的灵敏度与相应的单PCR分析灵敏度相同。

水杨酸与植物诱导抗病性

水杨酸(SA)被认为是诱导植物抗病反应的重要信号分子之一。许多研究报道:水杨酸参与植物的HR(超敏反应)和SAR(植物系统抗病性)介导的与植物病理相关的PRP(也叫PRS,病程相关蛋白)基因的表达。文章就SA与植物抗病性间的关系、SA抗病机理、SA在植物系统抗病性间的信号传递以及SA调节SAR基因表达的分子机理作以综述。

生物芯片逃离资本“冻土”?

即使凶猛的 SARS 病毒仍在猖獗,五月的鲜花依然开遍了山野——生命如此坚强而美丽。如同这旺盛的五月春花,半年来陷足于资本困境的广大中国生物芯片企业,不以资本外逃、求贷无门而式微,却在生命的呼唤中找到新的技术资本生机。作为高速度、高平行处理个体生物信息的强有力技术手段,生物芯片的新机遇来了——人类基因组计划(HGP)全序列分析如期完成;进入后基因组时代,蛋白组计划、疾病基因组计划等概念和计划提出;尤其是针对紧急公共卫生事件处理的强大医疗需求,中央财政的专项已超过30个亿,生物芯片企业有望通过技术水平的提升,稳健地走出2002年底的资本"冻土层",更将重续数年来为巨额资本所紧紧追随的"新经济"好梦……

植物系统性获得抗病性的产生机理和途径

坏死型病原物侵染或某些生化制剂诱导处理后,植株未受侵染或处理部位产生对随后病原物侵染的抗性,称为植物系统性获得抗性(systemic acquired resistance,SAR)。SAR具有抗性表现系统、持久、抗病对象广谱三大特点。坏死型病原物侵染或某些生化制剂处理后,植株受处理部位迅速产生系统性信号,经韧皮部传导到未侵染或处理部位,诱发SAR基因表达。水杨酸是诱发SAR的系统性信号之一。此外,上部非处理部位处于敏化状态(conditioning或sensitizing),能更迅速有效地产生针对挑战接种病原物的防卫反应。敏化状态产生依赖于SA对防卫反应信号放大和强化(signal potentiation)机制。SAR信号传导途径错综复杂,通过诱变筛选获取了一系列SAR突变体,已克隆数个编码SAR信号传导途径成分的基因,并分析了其产物功能。