我国部分地区A2dB1型传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定及序列分析

为持续了解传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant infectious bursal disease virus,nVarIBDV)在我国流行情况,研究收集2021—2022年6个主要养禽地区疑似传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)鸡病料,采用RT-PCR进行检测,并对11株IBDV代表毒株的基因组双节段代表区段VP2-HVR和VP1-B-marker进行基因测序及序列分析。结果显示:所检测病料的IBDV阳性率为20.65%(19/92),其中11株IBDV代表毒株均为A2dB1型nVarIBDV。研究表明,nVarIBDV在我国主要养禽地区仍持续流行,而且出现了值得注意的新的突变位点,有必要进行持续的IBDV流行病学监测。

恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证

目的建立恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证。方法以SARS-CoV-2 Beta变异株灭活疫苗为包被抗原建立特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并优化方法的抗原包被浓度(1、2、4μg/mL)、待检血清稀释度(1∶800~1∶12800)、PBST封闭液(含1%BSA、2%BSA、1%脱脂奶、2%脱脂奶、1%BSA+1%脱脂奶)、封闭时间(30、60、90 min)、二抗稀释度(1∶5000、1∶10000、1∶15000、1∶20000)、血清及二抗孵育时间(30、60、90 min)、TMB显色反应时间(5、10、15、20、25、30 min)。采用建立的方法检测60份恒河猴阴性血清,确定阴、阳性临界值。验证该方法的敏感性及精密性。采用建立的方法及微量中和试验分别检测44份恒河猴血清抗SARS-CoV-2 Beta变异株特异性IgG抗体及中和抗体水平,并比较二者的相关性和一致性。结果确定最佳检测条件:抗原包被浓度为1μg/mL;封闭液为含1%脱脂奶粉的PBST,封闭时间为30 min;待检血清稀释度为1∶1600,孵育时间为90 min,二抗稀释度为1∶10000,孵育时间为30 min;底物显色时间为25 min。该方法的阳性临界值为0.093,阴性临界值为0.084,位于两者之间判为可疑。5份阳性血清测得阳性结果的血清稀释倍数均为1∶51200;精密性验证变异系数(CV)均<15%。44份恒河猴血清IgG抗体效价与中和抗体水平之间呈强相关(r=0.8580,P<0.0001);两种方法总符合率为90.9%,阳性符合率为93.6%,阴性符合率为84.6%;一致性检验Kappa为0.7838(95%CI:0.5865~0.9810)。结论建立的恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性和精密性,与微量中和试验具有较强一致性,可用于恒河猴血清IgG抗体的检测。

SARS-CoV-2 Delta变异株:从结构变异到强传染力

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)变体Delta变异株(B.1.617.2毒株),以极强的传播力迅速成为了目前世界范围的2019冠状病毒病(COVID-19)主要致病毒株。刺突蛋白作为冠状病毒的关键结构蛋白质,介导了SARS-CoV-2与靶细胞识别、结合及融合过程,与Delta变异株的高传染性密切相关。Delta变异株中刺突蛋白基因突变位点从其空间构象、表面亲水性与自由能等方面加以改变,影响了刺突蛋白与靶细胞膜的识别与融合过程,加速了结合进程。Delta变异株的分子结构及其功能研究对于COVID-19的预防及治疗至关重要。本文简述了SARS-CoV-2 Delta变异株相较于野生株的分子结构特点,着重以冠状病毒刺突蛋白为基础,回顾了中和抗体与血清之于Delta变异株的效力改变,并总结了SARS-CoV-2 Delta变异株的病毒动力学及临床特征,以期为拓宽Delta变异株分子结构功能变异研究方向,为未来COVID-19疫苗设计与应用提供思路。

上海市松江区方舱医院678例新型冠状病毒Omicron BA.2变异株感染病例的临床特征

目的 分析感染新型冠状病毒(SARS-CoV-2) Omicron BA.2变异株病例的临床特征,为Omicron BA.2感染的防治提供参考依据。方法 回顾性分析2022年4月3日至4月18日上海市松江区方舱医院收治的678例新型冠状病毒感染确诊患者的临床特征,同时根据临床分型分为无症状组369例和轻型组309例,比较两组患者的临床特征、疫苗接种及转阴时间。结果 患者平均年龄为(36.11±13.20)岁,呈低龄化趋势,主要集中在15~44岁组(73.9%),其次为45~59岁组(18.7%),≥60岁组(4.7%)及0~14岁组(2.7%)占比较少;患有慢性基础疾病者19例(2.8%),主要为高血压及糖尿病;总体疫苗接种率为94.5%,15~44岁组(97.6%)及45~59岁组(95.3%)接种率最高,≥60岁组(81.2%)次之,接种率最低为0~14岁组(27.8%);轻症组患者平均核酸转阴时间为(11.44±2.36) d,明显长于无症状组的(10.80±2.22) d,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者在性别、年龄、疫苗接种针数及完成疫苗接种至确诊感染的间隔天数方面比较差异均无统计学意义(P>0.05);生存分析结果显示,无症状组患者的转阴风险较轻型组患者高28.1%(HR=1.281,95%CI:1.100~1.492,P=0.001),但进一步亚组分析,在不同性别、年龄段及疫苗接种亚组中,两组患者预后比较差异均无统计学意义(P>0.05);在轻型组患者中,临床症状以干咳(68.0%)、发热(29.1%)最为多见,COX单因素分析结果显示,是否出现相关临床症状并非影响轻型患者转阴预后的影响因素(P>0.05)。结论 SARS-CoV-2 Omicron BA.2在不同性别及年龄段人群中具有普遍易感性,感染呈现低龄化趋势,感染者以呼吸道症状与发热为主要表现,核酸转阴天数与原始毒株相似,无症状感染者较轻型患者可能具有更短的病程。

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。

SARS-CoV-2 奥密克戎变异株的研究进展

严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的新变异株奥密克戎(Omicron,B.1.1.529)因其传染性强和对疫苗的逃逸突变在世界各地引起了广泛关注。SARS-CoV-2变异株的易感染性和抗体抗性主要由病毒刺突(S)蛋白受体结合域(RBD)上的突变决定。然而,对奥密克戎变异株的完整实验评估可能需要数周甚至数月才能完成。在此,研究人员将对奥密克戎株的传染性、疫苗策略以及血清抗体中和活性等方面进行分析,以期为尽快科学了解奥密克戎变异株的关键特性,提早制定长远对策提供思路。

银丹解毒颗粒治疗SARS-CoV-2变异株B.1.1.7 COVID-19临床观察

目的:观察银丹解毒颗粒治疗SARS-CoV-2变异株B.1.1.7新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)的临床疗效。方法:前瞻性收集2021年1月18日至2月1日北京地坛医院收治的17例服用银丹解毒颗粒的SARS-CoV-2变异株B.1.1.7 COVID-19患者,其中9例患者入院即口服银丹解毒颗粒(观察组Ⅰ),8例患者入院4 d后开始口服银丹解毒颗粒(观察组Ⅱ)。比较两组患者发热、呼吸道症状持续时间、炎症和免疫指标水平、病毒核酸水平及肺部炎症改善情况。结果:观察组Ⅰ咳嗽咳痰持续时间为6.50(4.50,8.50)d,观察组Ⅱ为11.00(10.00,12.50)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组Ⅰ咽部不适持续时间为7.00(6.00,10.00)d,观察组Ⅱ为11.00(10.00,12.50)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组Ⅰ胸闷持续时间为2.50(1.25,6.00)d,观察组Ⅱ为12.50(7.50,14.75)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组Ⅰ发热持续时间为6.00(3.00,7.00)d,观察组Ⅱ为7.00(3.50,7.75)d,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组Ⅰ肺部炎症渗出性病变消退时间为14.00(10.00,16.00)d,观察组Ⅱ为18.00(16.00,20.25)d,两组比较,差异有统计学意义(P=0.01)。入院第14天,观察组Ⅰ血清淀粉样蛋白A显著低于入院第7天(P=0.001);入院第14天,观察组Ⅱ血清淀粉样蛋白A低于入院第7天(P=0.059)。结论:银丹解毒颗粒同样适用于SARS-CoV-2变异株B.1.1.7 COVID-19患者,及早应用可更好地改善呼吸道症状、促进肺部炎症渗出性病变的吸收。

传染性法氏囊病病毒新型变异株VP2蛋白原核表达及免疫效果评价

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定,并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡,通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达,获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达,大小约40 kD,且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应,其琼扩效价可达1∶32;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好,安全性高,无免疫引起的不良反应,剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8,而血清抗体效价均在1∶20000以上,表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应,抗体阳性率达100%;使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况,结果显示免疫组鸡只均未发病,其法氏囊也无明显萎缩现象,即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达,且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好,能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果,为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。

SARS-CoV-2突变株Omicron家族的演化传播和流行现状

冠状病毒(CoV)属于套式病毒目冠状病毒科,为有包膜的单股正链RNA病毒,基因组约27~32 kb。近年来,冠状病毒对人类的生命健康造成了巨大的威胁,如2002年出现的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)以及2012年出现的中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV),特别是2019年出现并流行至今的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2),其在全世界范围内暴发,严重危害了人类健康和社会秩序,引发了人们的高度关注。迄今为止,SARS-CoV-2已经演化出了多个变体,且仍处于不断变异中。目前流行株型以Omicron为主,同时伴有其他多个变异型。当前我国新冠疫情防控已进入“乙类乙管”常态化防控阶段,SARS-CoV-2依然是未来一段时间内重要的公共卫生问题之一。本综述总结了SARS-CoV-2 Omicron主要株型的关键突变以及其与病毒传染致病、免疫逃逸等特性的关系,为了解SARS-CoV-2演化传播、流行现状等提供了参考。

我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析

为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767nt毒株为基准,其基因组第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸增加。同时,本实验选用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,其结果可作为流行毒株分型鉴别依据。

SARS-CoV-2 Omicron变异株的研究进展

拥有较强变异能力的严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2, SARS-CoV-2)在新型冠状病毒肺炎疫情长期流行的过程中不断发生变异进化。2021年11月,一种刺突蛋白携带大量突变的SARS-CoV-2变异株在南非博茨瓦纳出现并被命名为“Omicron”,随后该毒株迅速取代Delta变异株成为现阶段全球流行毒株。与此前流行毒株相比,Omicron变异株具有更高的传染性和较强的免疫逃逸能力,其蔓延是当下全球2019冠状病毒病(Corona Virus Disease 2019, COVID-19)日新增确诊病例居高不下的关键因素。本文就Omicron变异株的起源、免疫逃逸机制及毒株致病性等方面进行综述。在总结Omicron变异株特点的同时分析该变异毒株对疫苗接种策略的潜在影响,以期为该变异毒株及将来可能出现的新发毒株的防控提供参考。

不同时期8株IBDV地方株VP2基因变异分析

对分离于洛阳地区1991和2001年前后间隔达10年之久的两个时期的8株IBDV进行了VP2基因的克隆与序列分析。结果发现,8个地方株虽均属于IBDV超强毒株,但各个毒株间也有一定的差异。根据它们的核苷酸和氨基酸同源性高低可明显分为3群,分别位于系统进化树上超强毒区的3个小分支上。第1群包括1991年分离的L912、L914和L916三株;第2群包括L913、L017和L018三株;第3群包括2001年分离的L015和L016二株。群内各毒株间同源性较高,在98.3%～100%之间;群间各毒株的同源性则相对较低,在95%～97.9%之间,其中最低的为L015和L017、L016和L018二对,同源性均只有95%。进一步的序列分析表明,8个地方分离株均具有vvIBDV所具有的特征。其中,1991年的4株在各亲水区和七肽区的氨基酸和经典株及传统的超强毒株相比均无明显的变化;而2001年的4个分离株虽仍符合超强毒株的特点,但在相应亲水区均有1～2个氨基酸发生替换,特别是L015和L016株还出现了4个其它各毒株均没有的氨基酸位点变化。

PRRSV广东变异株分离及NSP2部分序列分析

2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒株BL2,其NSP2基因540位-563位（相对于VR2332 ORF1a）发生24个氨基酸序列的缺失,该缺失位于高致病性株的缺失区域内,但缺失长度小于高致病性株。国内外文献未曾报道过类似的突变。以NSP2部分序列构建系统进化树表明,与该毒株同源性最高的是我国2005年分离的经典毒株SHB（91.5%）,同时该毒株与我国2006年后流行的高致病性毒株也有较高的同源性（89.9%-91.3%）。动物回归试验表明,该毒株显示高致病性。

高致病性PRRSV Nsp2变异株Power SYBR Green real time RT-PCR检测方法的建立

根据高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp2变异株Nsp2基因保守区的核苷酸序列设计合成了1对引物,建立了Power SYBR Green模式的实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测高致病性PRRSV Nsp2变异株。以pMD-Nsp2质粒为阳性对照制作标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果显示,该方法只能检测到高致病性PRRSV Nsp2变异株的特异性扩增信号;检测线性范围广,在模板浓度为3.15×10^9-3.15×10^0copies/μL具有良好的线性关系,相关系数（r^2）为0.998;最低检测限为3.15copies/μL。对25份疑似高致病性PRRS猪病料的检测结果显示,该方法与病毒分离的符合率为100%。表明,建立的Nsp2-Power SYBR Green RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。

豫西地区PRRSV新近流行株ORF5基因变异及Nsp2基因特征分析

为研究豫西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新近流行株ORF5基因的变异情况及Nsp2基因的结构特征,采用RT-PCR方法扩增了26份近期采自豫西地区猪场疑似PRRS猪肺脏样品中的ORF5全序列和Nsp2部分序列,并对其生物信息学和结构进行了分析。结果表明:成功扩增出的21株PRRSV流行株间ORF5全基因同源性为96.6%～100%,氨基酸同源性为97.5%～100%;与参考毒株JXA1、MLV、VR-2332和LV的核苷酸同源性分别为96.6%～98.9%、88.4%～89.2%、88.0%～89.5%和66.8%～67.3%;对阳性病料进行了部分Nsp2基因的扩增,测序结果显示,所有流行株的Nsp 2基因与已报道的美洲株VR-2332相比,不存在核苷酸的插入或突变,但存在2个位点共90个碱基的缺失;遗传衍化分析表明,流行毒株属于美洲型。研究结果揭示了豫西地区新近流行的PRRSV ORF5基因的变异情况及Nsp 2基因的特征,为该地区的PRRS防控工作提供了理论依据。

乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-I表达

目的：研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-I／抗原肽复合物的表达．方法：通过定点突变技术将1．2拷贝HBV野生型质粒p3．8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97．经序列测定和生物学活性检测后，野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达．重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定，再用脂质体介导转染HepG2细胞，ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原，转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色，流式细胞术分析细胞表面HLA—I表达．结果：3株重组载体经内切酶消化，电泳后显示2条区带，分别与1．2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同．测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078c→G和nt2189A→C，保持原定点突变．EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S／CO值明显高于变异株V60和L97，3株：HBsAg定量S／N值接近，HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当．EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达，3株重组载体转染细胞HLA—I的荧光强度不同，野生株增强为18．2，L97明显升高至34．5，而V60降低至3．4．结论：HBV能增强HepG2细胞表面HLA-I／抗原肽复合物的表达，核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-I表达发生变化。

公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和ORF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.

高致病性PRRSV缺失变异株Nsp2基因的克隆与遗传变异分析

从湖南省内多个出现疑似猪"高热病"症状的猪场采集病料70份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查.结果检出PRRSV阳性病料54份,阳性率高达77.14%(54/70).对其中8份分别来自娄底、浏阳、永州、双峰、益阳、株洲、宁乡和溆浦的病料中的PRRSV基因组Nsp2高变区部分基因片段进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析.与国内外美洲型PRRSV分离株比较,序列相似性为72.2%～100%,其中,与公布的高致病性PRRSV缺失变异毒株的同源性最高,序列相似性为98.2%～100%.序列分析表明,这些毒株均是天然存在缺失的变异毒株,其Nsp2均有2个部位出现了缺失,分别为编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失和编码29个氨基酸的连续87个核苷酸的缺失,与高致病性PRRSV缺失变异毒株序列的缺失情况完全一致,且与其具很高的同源性,从而确定了分离的毒株均为引起猪"高热病"的猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,这是国内外少见的PRRSV缺失变异及毒力显著增强的现象.

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析

采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSV ORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR-2332相比缺失第482位和533-561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。

IBDV地方变异株VP2基因的克隆与特性鉴定

应用 RT- PCR技术对 1株分离于地方免疫鸡群中暴发的传染性法氏囊病病例的传染性法氏囊病病毒 ( infec-tious bursal disease virus,IBDV) HN0 2 6株的 VP2基因进行了克隆与序列分析 ,并与相应毒株的 VP2高变区核苷酸及氨基酸序列进行了比较研究。结果表明 ,HN0 2 6株的核苷酸和氨基酸序列与变异株 Var- A的同源性最高 ,分别达97.3%和 97.6 % ;其次为超强毒株 UK6 6 1 ,分别为 95 .7%和 95 .2 % ;而和弱毒株 PBG98的同源率仅有 92 .8%和90 .3%。其中 ,在第一、二亲水区 ,HN0 2 6株均有 1个氨基酸发生了变化 ,即第 2 2 2位转变为 E、第 31 8位转变为 D。更重要的是 ,其 2 4 9位和 2 5 4位上的氨基酸分别为 K和 S,这些均为变异株的特性。另外 ,HN0 2 6株的七肽区保持SWSASGS不变 ,且第 2 79位和 2 84位氨基酸分别为 D和 A,又完全具备强毒株的特性。因此 ,初步确定所分离的HN0 2 6为有较强致病力的变异株 IBDV。