SARS-CoV单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

参照已发表的SARS冠状病毒BJ0 1株基因序列 ,利用计算机软件预测并选取该病毒S、M、N三种主要结构蛋白部分抗原性优势区域 ,以编码Gly- Pro- Gly序列相连接合成两段嵌合基因A和B。并分别克隆于pGEX -6p- 1载体上用IPTG进行诱导表达 ,以纯化的嵌合蛋白A和B为抗原 ,分别免疫BALB c小鼠制备单克隆抗体。利用单克隆抗体亚型检测试剂盒和SARS CoV商品化ELISA检测试剂盒对其进行亚型和特异性鉴定。结果表明融合表达两段嵌合基因产物 ,其大小分别为 34kD和35kD ,Westernblot分析证实两种表达产物都能被SARS病人康复期血清所识别。获得了 6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞克隆株。亚型鉴定结果除D3C5为IgG2a外其他单抗均为IgG1,而且所有单抗的轻链均为κ链。特异性鉴定发现除D3D1外 ,其余的 5株单抗均能与SARS CoV商品化ELISA检测试剂盒发生特异性反应。将D3D1与灭活后经超声波裂解的SARS CoV进行Westernblot分析 ,发现它能特异性识别 180kD的蛋白带。分别融合表达了 6个S蛋白的寡肽 (S1- S6 ) ,并对筛选出的单克隆抗体相对应的抗原表位进行了初步鉴定。结果发现单克隆抗体D3D1特异性识别S2基因表达产物 (S蛋白的 4 4 7 4 5 8aa) ,D3C5特异性识别S5基因表达产物 (S蛋白的 789 799aa)。

不同地区人群SARS血清流行病学调查

目的 分析严重急性呼吸综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome ,SARS)流行期间不同地区人群及SARS临床诊断病例血清特异性抗体 (SARS -CoVIgG)变化规律以及健康人群是否存在隐性感染。方法 采用酶联免疫方法 (ELISA)及间接免疫荧光法 (IFA) ,对香港、澳门、北京、广州地区 14 5 3名健康人及广州和北京地区 2 5 7例SARS临床诊断病例进行血清SARS -CoVIgG抗体检测 ,并跟踪检测患者病后不同时间 (发病 3～ 2 70d)血清抗体变化情况。结果 4个地区健康人群 (包括 16 0名密切接触者 )中 ,用ELISA法检出 2例SARS -CoVIgG抗体阳性 ,阳性者进一步用IFA检测则为阴性 ;广州地区 2 0 0名健康体检者同时采用ELISA和IFA检测 ,结果均为阴性。ELISA和IFA同时检测 2 5 7例临床诊断病例发病 2 0d后的血清SARS -CoVIgG抗体 ,2种方法检出的阳性率均为 90 %。ELISA法跟踪检测 2 5 7例临床诊断病例发病后 3～ 2 70d血清IgG抗体 ,抗体滴度在发病后 4～ 6个月内随时间延长逐渐升高 ,多数病人抗体在第 4～ 6个月达到高峰 ,并持续到第 8个月 ,部分病人抗体达高峰后开始下降 ,但至第 9个月仍阳性。结论 健康人群中隐性感染率极低 ,血清SARS -CoVIgG抗体在病程后期有诊断价值 ,血清特异性抗体可持续 9个月以上。

SARS疫苗研究进展

2003年世界性的流行病——严重急性呼吸综合症（SAILS）引发了各国科学家对SARS相关冠状病毒（SARS-Coy）的研究热潮。SARS-Coy是一种新的冠状病毒，其致病机制还不清楚，目前尚无有效治疗SARS的抗病毒药物，研制一种安全有效的疫苗是阻止SARS再次流行最有效的方式。目前研究较多且有发展前景的SARS疫苗有：灭活疫苗、DNA疫苗和表位疫苗等。但在SARS疫苗的研究过程中也遇到了很多问题，如没有标准的动物模型、SARS-Coy变异快等问题。所以，研发一种安全有效的SARS疫苗任重而道远。