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人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达 被引量:2
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作者 黄方敏 郑启新 +1 位作者 吕斌 鲍同柱 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期165-168,共4页
目的 构建人共刺激分子CD80 (B7 1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原 3(Sart3)融合基因真核表达载体 ,并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法 采用RT PCR技术 ,从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列 (第 1~ 12 81bp) ... 目的 构建人共刺激分子CD80 (B7 1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原 3(Sart3)融合基因真核表达载体 ,并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法 采用RT PCR技术 ,从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列 (第 1~ 12 81bp) ,此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7 1cDNA和Sart3cDNA共克隆入真核表达载体 pEGFP N1,测定核苷酸序列确定重组成功后 ,分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞 ,利用流式细胞仪和Westernblot检测B7和Sart3的表达。结果 构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列 (NM_0 0 5 191、NM_0 14 70 6 )一致 ,阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强 ,免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应 ,融合蛋白分子量与B7 Sart3 EGFP的预测分子量相当。结论 成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN ,并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。 展开更多
关键词 sart3基因 B7基因 克隆 基因表达 RT-PCR技术 共刺激分子 肿瘤疫苗
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Antitumor immunity of human SART3 gene vaccine against mouse tumor in vitro/vivo
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作者 Yu HE Shuhua YANG +1 位作者 Yong LIU Tao LI 《Frontiers of Medicine》 SCIE CSCD 2008年第1期51-57,共7页
To determine whether squamous cell carcin-oma antigen recognized by human T cell 3(SART3)gene can induce antitumor immunity against tumor cells which express the gene,we constructed mouse tumor cells expressing human ... To determine whether squamous cell carcin-oma antigen recognized by human T cell 3(SART3)gene can induce antitumor immunity against tumor cells which express the gene,we constructed mouse tumor cells expressing human SART3(LM8-SART3)and carried out experiments in vitro/vivo.After subcutaneous injection with SART3 gene vaccine,cytotoxic T lymphocyte(CTL)activity in vitro was measured using Cell Counting Kit-8.As for the in vivo part,C3H mice were divided into several groups.One group was challenged with tumor cells after immunity.Another group was treated with the vaccine after tumor implantation.It was found that human SART3 DNA vaccine can elicit a specific CTL reaction from the mouse splenocytes.After vaccination,tumor occurrence and tumor growth speed was reduced.The vaccine also shows activity in tumor treatment.We con-clude that the human SART3 DNA vaccine can induce antitumor ability against tumor cells expressing human SART3(LM8-SART3)in vitro/vivo which may provide new possibilities in antitumor therapy. 展开更多
关键词 sart3 protein human DNA vaccine antitumor immunity OSTEOSARCOMA
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结直肠癌患者组织和血清外泌体的LASTR水平及临床意义 被引量:1
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作者 熊伟 韩华 +2 位作者 陈华敏 吴晓明 黄光钺 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2021年第12期1108-1113,共6页
目的探讨结直肠癌患者组织和血清外泌体的LASTR水平及临床意义。方法基于UALCAN在线分析结直肠癌组织的LASTR水平及其与预后的关系。差速超速离心法制备146例结直肠癌患者和127例健康体检者的血清外泌体后采用实时定量PCR(qPCR)检测LAST... 目的探讨结直肠癌患者组织和血清外泌体的LASTR水平及临床意义。方法基于UALCAN在线分析结直肠癌组织的LASTR水平及其与预后的关系。差速超速离心法制备146例结直肠癌患者和127例健康体检者的血清外泌体后采用实时定量PCR(qPCR)检测LASTR水平,分析血清外泌体LASTR水平与结直肠癌临床病理特征的关系,受试者工作特征(ROC)曲线分析外泌体LASTR水平诊断结直肠癌的效能,结合随访数据和多因素分析进行生存分析。结果478例结肠癌组织的LASTR水平[中位数(25%~75%四分位数范围)]为0.173(0.061~0.351),高于41例正常组织的0.031(0~0.065),166例直肠癌组织的LASTR水平为0.137(0.059~0.267),高于10例正常组织的0.010(0~0.042),差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织的LASTR水平与总生存期(OS)有关,其中高水平者的OS较短(P<0.05)。结直肠癌患者的外泌体LASTR水平为4.538(3.280~5.662),高于健康体检者的1.701(1.298~2.411),差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示外泌体LASTR水平诊断结直肠癌的曲线下面积为0.929(95%CI:0.900~0.958),当最佳截断值为3.020时约登指数最大,灵敏度和特异度分别为80.14%和92.91%。外泌体LASTR水平与淋巴结转移、分化程度、远处转移、浸润深度、TNM分期和OS有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位和肿瘤大小无关(P>0.05)。外泌体LASTR低水平组的中位OS未达,优于高水平组的47.0个月(HR=5.494,95%CI:3.040~9.928,P<0.001),多因素分析发现外泌体LASTR水平是OS的危险因素(HR=4.165,95%CI:2.974~6.138,P=0.017)。结论结直肠癌组织和外泌体LASTR水平升高且参与了结直肠癌的进展,外泌体LASTR水平对于结直肠癌诊断和预后预测有一定价值。 展开更多
关键词 结直肠癌 长链非编码RNA LASTR 外泌体 临床意义 预后
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人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3基因疫苗肿瘤免疫研究
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作者 何宇 杨述华 +2 位作者 刘勇 周钢 李涛 《中国骨肿瘤骨病》 CAS 2010年第1期64-67,共4页
目的观察人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)基因的DNA疫苗能否诱导小鼠产生针对表达该基因肿瘤细胞的免疫反应。方法构建表达人SART3基因的C3H小鼠肿瘤细胞LM8-SART3。以空载体为对照,注射疫苗,分离小鼠脾细胞,体外检测CTL反应。于... 目的观察人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)基因的DNA疫苗能否诱导小鼠产生针对表达该基因肿瘤细胞的免疫反应。方法构建表达人SART3基因的C3H小鼠肿瘤细胞LM8-SART3。以空载体为对照,注射疫苗,分离小鼠脾细胞,体外检测CTL反应。于疫苗免疫后2周接种肿瘤细胞,比较免疫组与空载体组肿瘤长出及出瘤后肿瘤生长情况。结果体外可检测到疫苗诱导的小鼠脾细胞CTL活性;疫苗注射后小鼠成瘤率降低,肿瘤生长慢于对照组。结论表达人SART3基因的DNA疫苗可在一定程度上预防表达该基因的肿瘤细胞LM8-SART3在小鼠体内的成瘤及生长。 展开更多
关键词 sart3 基因疫苗 肿瘤免疫 骨肉瘤
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