两例新发SATB2基因突变致语言障碍的临床表型特征并文献复习

目的探讨SATB2基因突变导致语言障碍的临床特征和诊治方法。方法分析2019~2020年确诊的2例SATB2相关综合征(SATB2-associated syndrome,SAS)患者的临床资料,总结其语言障碍的临床表型特点和诊疗进展,并复习文献。结果两例患儿均为男性,临床表现主要为全面发育迟缓、牙列不齐和口语表达障碍,其中患儿2伴有先天性腭裂。基因检测结果显示,患儿1检测到SATB2基因新生杂合移码突变(c.1259dupA,p.N420Kfs*17);患儿2检测到SATB2基因新生杂合错义突变(c.169G>A,p.G57S)。两个基因突变位点均为既往未曾报道过的新变异位点。结合患儿临床表现及分子遗传检测结果,2例患儿均诊断为SAS。回顾性分析国内外文献报道,86例SAS患者(包括本文报道的2例)均表现为接受性语言障碍和表达性语言障碍,91.7%的患者有牙列发育异常,36.0%的患者有腭裂。SAS患者大多是非语言交流者(66.3%),具有口语交流能力的个体65.4%表现出言语失用的特征。94.9%的SAS患者使用手势替代沟通,并且伴有喂养问题(73.2%)、进食吞咽困难(72.9%)和流涎(60.0%)等口腔功能障碍。结论SATB2基因突变导致不同程度的语言障碍,常伴有口腔发育异常,以言语受限和语言障碍为主的全面发育迟缓是SAS的早期识别症状。临床上需要根据SAS患者口腔功能和语言-言语障碍表型特征制定整体的临床干预和语言康复措施。

MSCs成骨分化中BMP2对成骨转录因子SATB2表达的调控作用

目的探索间充质干细胞(MSCs)成骨分化中骨形态发生蛋白2(BMP2)对成骨转录因子SATB2表达的调控作用。方法体外培养小鼠间充质细胞系C2C12,腺病毒介导的BMP2(Adv-BMP2)诱导其向成骨细胞分化,建立并验证C2C12细胞成骨分化细胞模型。Real-Time PCR和Western blotting分别检测C2C12细胞成骨分化过程中经不同浓度Adv-BMP2处理不同时间时SATB2 mRNA和SATB2蛋白表达;以经相应浓度Adv-β-Gal处理细胞作对照。结果经150 pfu/cell Adv-BMP2处理C2C12细胞5 d后,成骨细胞标志基因Ⅰ型胶原、骨唾液酸蛋白和骨钙素表达以及碱性磷酸酶活性均显著增加,MSCs成骨分化模型构建成功。150 pfu/cell Adv-BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,SATB2 mRNA和SATB蛋白表达随分化进程而增加;Adv-BMP2浓度为0～225 pfu/cell时,SATB2表达随Adv-BMP2浓度升高而增加。结论 BMP2可调控SATB2的表达,从而影响MSCs成骨分化。

SATB2基因siRNA对口腔鳞状细胞癌生长及STAT3信号的抑制作用

目的:探讨抑制SATB2基因表达对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法:以Lipofectamin^TM2000为载体,将阴性对照siRNA(阴性组)与SATB2特异性siRNA(抑制组)转染人OSCC细胞株CAL-27,设置空白组,CCK-8法检测siRNA转染4d的细胞增殖;siRNA转染CAL-27细胞48h,Western印迹法检测E-cadherin,STAT3,p-STAT3和cleaved caspase-3蛋白表达。克隆形成实验、Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞克隆形成率、细胞侵袭和迁移能力及细胞凋亡率。结果:转染siRNA的CAL-27细胞SATB2蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。与空白组相比,抑制组细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,E-cadherin和cleaved caspase-3蛋白表达明显升高,p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:RNA干扰抑制SATB2基因表达可抑制OSCC细胞生长,机制与下调STAT3信号有关。

SATB2相关综合征13例病例系列报告

目的总结SATB2相关综合征(SAS)的临床及遗传学特征,为早期干预及产前咨询提供依据。方法回顾性分析2016年1月至2020年6月于复旦大学附属儿科医院就诊且基因诊断为SAS患儿的临床资料和基因检测结果。结合人类基因突变数据库(HGMD)和PubMed,对SAS的临床表型及遗传特征进行文献复习。结果13例SAS患儿进入本文分析,男7例,女6例,样本检测年龄为生后3 d至9岁7月(M为14月龄)。13例均存在发育迟缓,>1岁的患儿均出现语言发育障碍。8例行头颅MR检查,7例提示脑成像异常。4例癫癎发作。2例骨发育不良,4例四肢肌张力低下,2例心血管畸形。13例均有小颌和牙齿畸形,4例腭裂,3例体重低于同龄儿2 SD,2例流涎,1例角膜白斑。4例并发肺部反复感染,1例合并先天性喉软化及声带麻痹。13例患儿检测到13种SATB2基因杂合变异,包括6种错义变异(E436A、L261P、L626P、R399C、A590T、E566K),2种无义变异(Q666Ter、R239 Ter),5种染色体2q32-2q37区缺失/重复导致的拷贝数变异,其中R239 Ter和E566K为HGMD已收录的致病位点,其余11种均为新变异。结论SAS可累及多系统,需通过基因检测协助明确诊断。建议将SATB2基因作为原因不明的神经发育障碍性疾病的重要候选基因进行筛查和诊断。

SATB2基因增强槲皮素抑制肾癌细胞生长的机制

目的:探讨核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)基因及槲皮素对肾癌细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及机制。方法:人肾癌786-O细胞分为空白组、重组体pcDNA3.1-SATB2组、槲皮素组和pcDNA3.1-SATB2+槲皮素组,其中pcDNA3.1-SATB2转染参照Lipofectamine 2000说明。各组细胞处理48 h后,通过CCK-8,Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力和凋亡。Western印迹法检测SATB2,STAT3,p-STAT3,MMP-2和Bcl-2蛋白表达。结果:转染pcDNA3.1-SATB2的786-O细胞SATB2蛋白表达明显升高(P<0.05)。pcDNA3.1-SATB2及不同浓度槲皮素均可抑制786-O细胞活力,且槲皮素可呈现浓度和时间依赖性抑制细胞活力(P<0.05)。pcDNA3.1-SATB2及槲皮素均可抑制786-O细胞侵袭能力,诱导凋亡,下调p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达,而联合使用pcDNA3.1-SATB2和槲皮素对786-O细胞侵袭能力、凋亡及p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达影响更明显(P<0.05)。结论:过表达SATB2可增强槲皮素对肾癌细胞活力和侵袭能力抑制及凋亡促进作用,机制与抑制STAT3信号通路有关。

Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究

目的:制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准品。方法:提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得第一链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。结果:重组质粒经PCR扩增及序列测定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。结论:所构建的pGMT/Satb2基因实时荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此法可作为实时荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。

槲皮素对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及分子机制

目的探讨槲皮素对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)增殖和成骨分化以及对特异AT序列结合蛋白2(SATB2)基因表达的影响。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度槲皮素对hBMSCs增殖活性的影响,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测成骨分化生物标志物Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(BGLAP)和分泌磷酸蛋白1(SPP1)mRNA的表达,qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blot)检测SATB2 mRNA和蛋白表达变化,在hBMSCs转染SATB2特异性siRNA或SATB2过表达载体质粒,分析敲低或过表达SATB2对槲皮素干预的hBMSCs增殖和成骨分化的影响。结果在一定范围内槲皮素呈浓度依赖性促进hBMSCs增殖,5μmol/L时促进细胞增殖效果最佳,选择5μmol/L的槲皮素用于后续研究。5μmol/L的槲皮素能够有效促进ALP活性以及Runx2、BGLAP和SPP1 mRNA的表达,并且能够上调SATB2 mRNA和蛋白表达。敲低SATB2能够阻碍槲皮素对hBMSCs增殖和成骨分化的促进作用,而过表达SATB2能够增强槲皮素对hBMSCs增殖和成骨分化的促进作用。结论槲皮素可通过上调SATB2基因的表达促进hBMSCs增殖和成骨分化。

MiR-27a对人牙髓干细胞增殖、迁移及成牙本质分化的作用

目的探讨miR-27a对人牙髓干细胞的增殖、迁移以及成牙本质分化的影响及其潜在的分子作用机制。方法利用实时荧光定量PCR检测miR-27a以及相关基因的表达水平;分别利用CCK-8实验以及Transwell细胞迁移实验检测人牙髓干细胞的增殖以及迁移能力;通过采用双萤光素酶报告实验验证miR-27a的靶基因;利用Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果 MiR-27a过表达可抑制人牙髓干细胞的增殖以及迁移,同时抑制成牙本质向分化相关基因(ALP,DMP1及OCN)的表达(P<0.05);miR-27a的抑制可促进人牙髓干细胞的增殖及迁移,同时增加成牙本质向分化相关基因(ALP,DMP1及OCN)的表达(P<0.05);双萤光素酶报告实验和miR-27a转染实验结果提示miR-27a可以通过作用于Satb2的3'UTR区,负向调控其mRNA及蛋白的表达水平(P<0.05);Satb2的过表达能够拮抗miR-27a过表达对人牙髓干细胞增殖及迁移的抑制(P<0.05)。结论 MiR-27a能够抑制人牙髓干细胞的增殖及迁移,同时抑制成牙本质向分化相关基因的表达,这种作用可能与调控Sabt2基因有关。

一例Glass综合征患儿的SATB2基因突变分析

目的对1例Glass综合征患儿的的临床特征进行分析,同时检测患儿基因突变,探讨该综合征的表型与基因型特征。方法对患儿的临床表现及辅助检查结果进行分析,应用高通量测序平台进行医学外显子测序,对分析得到的可疑致病位点进行Sanger测序验证,并对家系成员进行检测。结果患儿表现为生长发育落后、智力障碍、语言发育迟缓、腭裂、牙齿拥挤、睑裂下斜。测序结果分析发现,患儿SATB2基因的第8外显子上存在致病性的新发杂合错义突变c.1166G>A(p.R389H),患儿父母该位点均为野生基因型。结论SATB2基因p.R389H杂合突变是该Glass综合征患儿的致病原因,该错义突变国内尚未见报道。

SATB2基因表达对结直肠癌细胞增殖和转移能力的影响

目的 :分析特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)对结直肠癌细胞增殖和转移能力的影响。方法:收集2014年9月~2016年9月期间在我院住院治疗的120例结直肠腺癌患者癌组织及其对应癌旁组织标本。均行免疫组织化学法检测,细胞培养与转染,采用实时荧光定量检测SATB2 miRNA的表达情况;并采用CCK-8法、细胞划痕实验分析SATB2干扰对SW480、LOVO细胞增殖能力与迁移能力的影响。结果 :实时荧光定量PCR检测结果发现结直肠癌组织SATB2 miRNA的表达明显低于对应的癌旁组织;与免疫组织化学检测具有一致性,72.50%的结直肠癌患者癌组织SATB2呈低表达,而76.66%的结直肠癌患者癌旁组织SATB2呈高表达,两者差别有统计学意义。培养24h时,癌组织与癌旁组织中SW480、LOVO细胞的增殖速度比较无明显差异,而48h至72 h结直肠癌患者癌组织中SW480、LOVO细胞的增殖速度显著高于癌旁组织,差异有统计学意义。划痕实验结果显示癌组织SW480、LOVO细胞的细胞迁移能力较癌旁组织明显增强。结论 :SATB2基因在结直肠癌癌组织和细胞中呈低表达,与结直肠癌SW480、LOVO细胞增殖和转移能力密切相关,故SATB2基因有可能成为结直肠癌新的治疗靶点。

2q33.1微缺失致SATB2基因部分缺失兄妹的表型及遗传学分析

目的 对来自同一家系的两例基因组微缺失致SATB2基因部分缺失的患儿进行基因型与表型分析.方法 对两例表现为智力障碍、发育异常的患儿进行染色体核型分析、单核苷酸微阵列分析(single nucleotide polymorphism microarray,SNP Array)、实时荧光定量PCR技术进行检测,同时对其父母进行染色体核型、SNP Array分析以明确异常基因的变异来源.结果 患儿1外周血染色体核型未见异常,SNP Array结果显示arr[hg19] 2q33.1(200 192 328-200 197 269)×1,2q35(218 105 663-218 816 675)×3,存在4.9 kb片段的缺失和711.0 kb片段的重复;患儿2外周血染色体核型结果未见异常,SNP Array结果显示为arr[hg19] 2q33.1 (200 192 328~200 197 269)×1,2q35 (218 105 663~218 810 908)×3,存在4.9 kb片段的缺失和705.2 kb片段的重复.该缺失区域与2q33.1微缺失综合征部分重叠,包含SA TB2(608148)基因部分片段,实测荧光定量PCR检测结果与芯片一致.重复区域遗传自父亲且无明确疾病相关报道.结论 两例息儿均存在相同位点SA TB2基因的部分缺失,主要临床表型基本一致.该基因单倍剂量不足是导致患儿出现异常临床表现的原因.

一例新生突变所致Glass综合征的遗传学分析

目的对一个Glass综合征家系的致病基因变异位点进行检测并对其进行遗传学分析。方法对先证者进行临床检查和全外显子组测序;对其家系成员通过PCR-Sanger测序验证可疑突变位点;用I-TASSER蛋白结构与功能分析软件对候选致病基因所编码的蛋白进行生物信息学分析。结果先证者临床表现为全面性发育迟缓,主要包括牙齿异常、共济失调、不会听指令;脑电图提示多灶性棘波、棘慢波、多棘慢波发放,左侧及睡眠期著等。检出先证者具有SATB2基因(NM_015265)c.1165C>T(p.R389C)新生杂合错义突变,其父母均未检出该突变;蛋白结构生物信息分析表明,p.R389C错义突变可导致蛋白的配体结构域发生变化,从而使SATB2蛋白失去相应功能,导致疾病发生。结论本研究确定了该家系中先证者的致病突变位点为SATB2基因c.1165C>T(p.R389C),进一步丰富了中国人群中Glass综合征的基因突变谱及临床表型谱,为深入阐明该病的分子病理机制及临床诊疗提供参考数据。