网络药理学、分子对接结合实验验证探讨知母皂苷AⅢ治疗胶质母细胞瘤的作用机制

目的基于网络药理学、分子对接和体外实验验证探索知母皂苷AⅢ(TIA)治疗胶质母细胞瘤(GBM)的潜在靶点及其信号通路。方法利用Pharmmapper数据库预测TIA的作用靶点,通过GeneCards数据库获得GBM相关的疾病靶点;通过STRING数据库得到交集靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络图,并使用Cytoscape 3.6.0软件进行筛选和分析;交集靶点通过DAVID数据库进行基因本体(GO)功能注释分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,采用分子对接技术考察TIA与关键靶点的结合能力。最后,采用GBM细胞U-87MG、U251进行体外细胞实验,运用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞存活率、Transwell迁移测定实验检测细胞迁移能力,采用Western blot实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验及药物亲和反应的靶点稳定性(DARTS)实验等验证网络药理学分析结果。结果网络药理学预测结果显示,TIA作用靶点与GBM疾病靶点存在65个潜在共用靶点;GO分析结果主要集中在炎症应答、细胞增殖的正向调节等过程;KEGG富集分析显示,TIA通过免疫球蛋白G Fcγ受体(FcγR)介导的吞噬作用、谷胱甘肽代谢等信号通路发挥作用;分子对接分析结果显示,TIA与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的结合潜能最强。体外细胞实验结果显示,TIA呈选择性和剂量依赖性抑制人GBM细胞U-87MG和U251的体外增殖和迁移,并通过靶向亲和MMP-2,抑制其表达而发挥作用。结论TIA可能通过靶向结合MMP-2并抑制其表达而抑制GBM细胞的体外增殖和迁移。

知母皂苷AⅢ对肝癌细胞Akirin2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的:研究Akirin2在人肝癌组织中的表达及知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖和促进凋亡的潜在机制。方法:应用RT-qPCR法和免疫组织化学法检测103例肝癌组织中Akirin2的表达。应用MTT法分别检测Akirin2过表达组、Akirin2 inhibitor组以及不同浓度TA-Ⅲ(0、5、10、20、40 mol/L)、紫杉醇组(80 g/ml)干预后对HepG2细胞增殖活力的影响;平板克隆实验和流式细胞术分别检测Akirin2过表达、Akirin2抑制以及TA-Ⅲ干预后对HepG2细胞克隆、凋亡的影响;Akirin2和凋亡蛋白采用WB法检测。TA-Ⅲ(40 mol/L)处理HepG2细胞的同时转染Akirin2 mimics(TA-Ⅲ+Akirin2过表达组),比较过表达Akirin2对TA-Ⅲ干预细胞增殖、凋亡的影响。结果:肝癌患者肝癌组织中Akirin2呈显著高表达(P<0.05),且Akirin2的高表达与患者的不良预后独立相关(P<0.05)。Akirin2过表达组的细胞增殖能力、克隆能力显著高于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。Akirin2 inhibitor组的细胞增殖能力、克隆能力显著低于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。TA-Ⅲ处理组的HepG2细胞增殖活力显著抑制,细胞增殖活性抑制与干预浓度、时间成正比。TA-Ⅲ不同浓度处理HepG2细胞增殖活力、细胞克隆能力、Akirin2蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡蛋白显著高于对照组(P<0.05)。Akirin2过表达后,TA-Ⅲ对HepG2细胞的细胞增殖能力细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的影响作用被部分逆转。结论:Akirin2在肝癌中呈显著高表达,TA-Ⅲ可通过抑制Akirin2表达抑制癌细胞增殖,促进凋亡。

液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ质量浓度及其药物代谢动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ(TA-Ⅲ)的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并考察其药物代谢动力学(PK)特征。方法色谱柱为Agilent XDB-C_(8)柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-2 mmol/L乙酸铵(55∶45,V/V),流速为250μL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,以负离子多离子反应监测方式进行检测。将12只大鼠随机分为知母单煎液组和知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组,各6只,采用建立的LC-MS/MS法测定两组大鼠血浆中TA-Ⅲ的浓度(以人参皂苷Rg_(2)为内标)。结果TA-Ⅲ质量浓度在0.3~3000 ng/mL范围内与TA-Ⅲ和内标峰面积比值线性关系良好,定量下限为0.3 ng/mL,精密度、准确度、提取回收率、基质效应、残留效应、稳定性试验结果均符合方法学要求。与知母单煎液组比较,知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组大鼠TA-Ⅲ的血药浓度-时间曲线下面积增大,0-∞的平均滞留时间(MRT_(0-∞))和消除半衰期(t_(1/2))均显著延长(P<0.01)。结论该方法操作简便、结果准确可靠,可用于测定大鼠体内TA-Ⅲ的血药浓度。知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液促进了TA-Ⅲ的吸收,可延长其MRT_(0-∞)和t_(1/2)。

基于细胞代谢组学技术的知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2机制研究

目的通过细胞代谢组学实验探究知母皂苷元作用于肝癌HepG2的抗肿瘤机制。方法采用液质联用和核磁技术研究知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2后的代谢机制,应用正交偏最小二乘判别分析方法筛选潜在生物标志物,应用MetaboAnalyst和KEGG PATHWAY数据库查找相关的代谢途径。结果共鉴定筛选出谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、柠檬酸盐和2-酮戊二酸等51种生物标志物,寻找到丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路;苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成代谢通路;酮体的合成与降解的代谢途径等5条主要代谢通路。结论知母皂苷元作用于HepG2细胞后,可以引起肝癌HepG2细胞内代谢物较为广泛的变化。其中代谢标志物主要涉及氨基酸代谢和能量代谢,最终抑制了肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

知母皂苷B-Ⅱ对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用及机制研究

目的用体内外实验探讨知母皂苷B-Ⅱ(TB-Ⅱ)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治疗作用及可能的作用机制。方法体外棕榈酸(100μmol/L)处理人肝癌细胞(HepG2),同时加入不同浓度TB-Ⅱ干预24 h,检测细胞TG水平变化。将C75BL/6J小鼠随机分为正常饮食(NCD)组、高脂饮食(HFD)组、TB-Ⅱ低剂量组(HFD+LTB-Ⅱ)、TB-Ⅱ高剂量组(HFD+HTB-Ⅱ),NCD组喂以普通饲料,其余组均以高脂饲料喂养16周建立NAFLD动物模型,TB-Ⅱ低、高剂量组每天分别予50、100 mg/kgTB-Ⅱ灌胃;监测小鼠体质量、脂肪重量、生化指标及肝脏病理评估肝损伤程度,并通过实时定量PCR(RT-PCR)方法检测肝组织脂代谢相关基因变化。结果TB-Ⅱ处理后HepG2细胞TG水平下降;TB-Ⅱ治疗可使HFD小鼠体质量下降,血清转氨酶、TC、TG、LDL-C及肝组织TC和TG水平也显著下降,同时肝脏病理明显改善。其中脂质合成相关基因SREBP-1c、FAS及ACC1表达明显下降,并伴随脂肪酸β氧化关键基因CPT1、PPARα表达上调。结论TB-Ⅱ可通过调控肝细胞脂质合成及脂肪酸氧化延缓高脂诱导的NAFLD进程。

知母皂苷AⅢ通过调节Notch信号通路调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的机制

目的探讨知母皂苷AⅢ(TSAⅢ)对骨肉瘤细胞(HOS)增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)等的影响及其潜在机制。方法用10μmol/L及20μmol/L的TSAⅢ处理人HOS细胞,另设阴性对照组(Ctrl组)与γ分泌酶抑制剂(DAPT)阳性药物对照组,CCK8、平板克隆、划痕实验与Transwelll来评估TSAⅢ对HOS细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测TSAⅢ对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、细胞间紧密连接蛋白1(CLDN1)、N-钙黏附蛋白(N-cad)及波形蛋白(Vimentin)表达影响;流式细胞术检测TSAⅢ对骨肉瘤HOS细胞凋亡影响,Western blot检测TSAⅢ对抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)蛋白及促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)表达影响。构建HOS细胞小鼠模型,分为Ctrl组、DAPT组、TSAⅢ10μmol/L组及TSAⅢ20μmol/L组,21 d后比较各组小鼠肿瘤体积变化,肿瘤组织免疫组化染色比较各组Ki67、凋亡标志物半胱天冬氨酸酶-3剪切体(Cleaved Caspase3)及Vimentin表达差异;免疫荧光比较E-cad与N-cad表达差异。Western blot检测不同浓度TSAⅢ(0、10、20μmol/L)、不同时长TSAⅢ(0、6、12 h)与Notch激动剂Jagged1对Notch通路相关蛋白表达影响。结果CCK8结果显示,与Ctrl组比较,10μmol/L及20μmol/L TSAⅢ处理48 h时,细胞增殖受抑制程度最明显(P<0.01);平板克隆、划痕实验与Transwelll结果显示,TSAⅢ可以抑制HOS细胞增殖、迁移与侵袭;Western blot结果显示,TSAⅢ促进E-cad与CLDN1蛋白表达,且抑制N-cad与Vimentin蛋白表达。流式细胞术结果显示,TSAⅢ促进骨肉瘤HOS细胞凋亡;Western blot结果显示,TSAⅢ抑制BCL-2蛋白表达,促进BAX蛋白表达。动物实验结果显示,TSAⅢ抑制肿瘤增长;免疫组化结果显示,Ki67表达减少,Cleaved-Caspase3及Vimentin表达增加;免疫荧光结果显示,TSAⅢ促进E-cad表达,并抑制N-cad表达。Western blot结果显示,Notch通路相关蛋白表达随TSAⅢ处理时间与浓度的增加而下降,而Jagged1可以解除TSAⅢ对Notch通路的抑制。结论TSAⅢ可能通过抑制Notch信号通路来抑制骨肉瘤HOS细胞增殖、迁移及侵袭。

知母中的两种新呋甾皂苷

目的研究知母根茎的化学成分。方法采用水煎提取、大孔吸附树脂SP825柱色谱、反相C18柱色谱等进行分离,并通过化学手段和光谱分析(FAB-MS,1HNMR,13CNMR,1H-1HCOSY)鉴定其化学结构。结果从知母根茎中分离得到6种甾体皂苷,分别鉴定为:(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷N,1),知母皂苷E1(2),(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷O,3),知母皂苷E2(4),(25R)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5α-呋甾-2α,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(purpureagitosid,5),marcogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranoside(6)。结论化合物1和3为新化合物,命名为知母皂苷N和知母皂苷O,化合物5为首次从知母中分离得到。

RP-HPLC-ELSD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量

目的 阐明 EL SD对于检测菝葜皂苷元等不含发色团的化合物是一种优越的检测器 ,为知母药材及含知母制剂提供了一种可靠的质检手段。方法 采用 RP- HPL C- EL SD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量。结果 分离完全的色谱峰 ,有良好的线性关系 ,r=0 .9990 ,对药材及制剂测定的回收率分别为 10 0 .5 %、91.38%。结论 该方法先进、可靠、简便 。

知母皂苷对脂多糖引起的大鼠学习记忆障碍和炎症反应的影响

目的观察知母皂苷(SAaB)是否对脂多糖(LPS)引起的大鼠学习记忆障碍和炎症反应有改善作用。方法大鼠随机分为对照组、LPS损伤组、LPS+SAaB(20、40mg·kg-1)组。对照组和LPS损伤组大鼠灌胃给予0.2%的二甲基亚砜,SAaB组大鼠灌胃给予SAaB。连续给药7d后,左侧脑室内单次注射LPS30μg/只大鼠,注射量为5μl,正常对照组大鼠注射等量的生理盐水。脑室注射后d2进行大鼠Morris水迷宫实验,连续6d,训练期间继续给药。水迷宫实验结束后,Nissl染色观察海马CA1区锥体神经元改变;白细胞介素-1β(IL-1β)分别与integrinαM和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双重免疫荧光染色观察IL-1β表达部位;Westernblot检测海马IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平。结果 SAaB(40mg·kg-1·d-1)能明显改善LPS所致大鼠学习记忆能力损伤,表现在明显缩短大鼠的逃避潜伏期,增加大鼠在原平台象限的游泳时间占总游泳时间的百分比;海马CA1区锥体神经元损伤较LPS组明显减轻,对抗LPS引起的IL-1β及iNOS的蛋白表达水平增加;激光共聚焦实验结果显示IL-1β主要在小胶质细胞表达,少量在星形胶质细胞表达。结论 SAaB能改善LPS引起的大鼠学习记忆障碍,抑制其海马的炎症反应。

西陵知母中甾体皂苷的分离与鉴定

目的：从新鲜西陵知母（ＡｎｅｍａｒｒｈｅｎａａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓＢｕｎｇｅ．）根茎中分离出有生理活性的化学成分—甾体皂苷。方法：用柱色谱法分离纯化，通过理化方法及光谱分析（ＵＶ，ＩＲ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＥＩＭＳ，ＥＳＩＭＳ，ＨＭＢＣ，ＨＭＱＣ）鉴定化学结构。结果：从新鲜西陵知母根茎的乙醇提取物中分离得到西陵知母皂苷Ａ与Ｂ，其化学结构分别为萨尔萨皂苷元３ＯβＤ葡糖基（１→２）ＯβＤ半乳糖苷和萨尔萨皂苷元３ＯβＤ葡糖基（１→３）ＯβＤ葡糖基（１→２）ＯβＤ半乳糖苷。结论：西陵皂苷Ｂ为一新化合物。

知母中知母皂苷BⅡ的TLC鉴别及HPLC法含量测定

目的:建立知母药材中知母皂苷BⅡ的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。方法:TLC 法,展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,显色剂:10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。HPLC 法,色谱柱:HiQ-sil C_(18)(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水(53:47),流速:0.8 mL·min^(-1),检测:蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度:100℃,气体流速:2.6L·min^(-1)。结果:3批药材中知母皂苷 BⅡ成分的 TLC 分离效果均较好,HPLC 法测得知母皂苷 BⅡ的平均回收率为97.7%,RSD 为1.8%。结论:该方法准确可靠,可用于知母药材质量控制。

心血管相关基因芯片的制备及其在知母皂苷作用机理研究中的应用

目的 研究知母皂苷活血化瘀作用的分子机制。方法 制备了包含 87个心血管疾病相关基因探针的寡核苷酸芯片。将 80mg·L- 1 知母皂苷作用 8h及未作用的培养人血管内皮细胞提取总RNA ,通过逆转录分别标记Cy 5和Cy 3荧光染料 ,然后与芯片杂交 ,检测知母皂苷对血管内皮细胞中心血管疾病相关基因表达的影响。 结果知母皂苷作用于血管内皮细胞后 ,血管紧张素酶原 (AGT)基因、肾上腺素α2A受体 (ADRA2R)基因和内皮素转换酶 1(ECE 1)基因的表达均有不同程度的下调。结论 知母皂苷有调控血管内皮细胞功能的作用 ,可能是其治疗心血管疾病的机制之一。

知母皂苷抑制血小板聚集的活性成分筛选及构效关系分析

目的筛选从知母中分离的甾体皂苷抑制血小板聚集的活性成分并对其进行构效关系分析。方法雄性Wistar大鼠心脏取血,离心分离获得富血小板血浆,分别加入呋甾烷型或螺甾烷型甾体皂苷化合物孵育3min后,以二磷酸腺苷(ADP)诱导大鼠血小板聚集,采用比浊法检测血小板聚集情况,通过比较不同甾体皂苷化合物对ADP诱导血小板聚集的抑制作用分析化合物的构效关系。结果 8个呋甾烷型甾体皂苷均无抑制血小板聚集的活性;4个螺甾烷型甾体皂苷在不同程度上抑制了血小板聚集,其中知母皂苷AⅢ作用最强,随后依次是知母皂苷AⅠ、知母皂苷AⅢ异构体和知母皂苷Ⅲ,而萨尔萨皂苷元没有活性;在苷元结构C-3位连接不同类型糖基的甾体皂苷抑制血小板聚集的作用不同,其中C-3位糖基为葡萄糖(D-Glc)时能完全抑制血小板聚集,而连接其他糖基如半乳糖(D-Gal)、阿拉伯糖(D-Ara)、核糖(D-Rib)、鼠李糖(L-Rha)或甘露糖(D-Man)时,抑制活性有不同程度的减弱。结论知母皂苷AⅢ是知母抑制血小板聚集的主要有效活性成分之一;甾体皂苷抑制血小板聚集的活性与其结构密切相关;第31、52、2位上的基团类型可影响甾体皂苷抑制血小板聚集的生物活性。

知母的皂苷成分

目的：研究知母的化学成分，寻找新的活性物质。方法：利用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱及高效液相色谱等手段进行分离，根据化合物的理化性质及光谱（ＩＲ，ＦＡＢＭＳ，ＥＳＩＭＳ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＤＥＰＴ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，ＮＯＥＳＹ和ＲＯＥＳＹ）数据鉴定结构。结果：从中药知母分离得到两种甾体皂苷，确定其结构是：（５β，２５Ｓ）螺甾烷３β，１５α，２３α三醇３ＯβＤ吡喃葡萄糖基（１→２）βＤ吡喃半乳糖苷（１）和（５β，２５Ｓ）螺甾烷３β，２３α二醇３ＯβＤ吡喃葡萄糖基（１→２）βＤ吡喃半乳糖苷（２）。结论：１和２均是新化合物，分别命名为知母皂苷Ｆ和知母皂苷Ｇ。

知母总皂苷对慢性温和应激小鼠的保护作用及机制研究

目的探讨知母总皂苷(total timosaponin,TT)对慢性温和应激模型小鼠的保护作用并分析其可能的作用机制。方法建立小鼠慢性温和应激模型,测量小鼠对蔗糖水的摄取量,采用避暗实验考察小鼠学习记忆能力,放射免疫法测定小鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇含量,酶联免疫法测定海马脑源性神经生长因子(BDNF)含量。结果 TT(25、50 mg.kg-1,qd×21 d)可显著增加慢性温和应激模型动物的蔗糖水消耗量,延长动物逃避潜伏时间、减少逃避错误次数。生化结果显示,TT能够降低血浆ACTH和皮质醇的含量,提高海马组织内BDNF含量。结论 TT能够改善慢性温和应激模型小鼠的抑郁状态和学习记忆能力,其机制与抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进以及提高模型动物海马BDNF含量有关。

知母皂苷及其苷元对动物模型β肾上腺素受体的调整作用

目的:观察知母提取物知母皂苷(TIM)及其苷元(SAR)对动物模型病理性升高的β肾上腺素受体的调整作用,同时观察SAR对家兔氢化可的松模型血清皮质醇含量以及正常小鼠和甲亢大鼠糖皮质激素受体密度的影响,旨在探讨两种提取物调整β肾上腺素受体的调整作用及其机制。方法:(1)观察TIM对甲亢大鼠模型脑组织β肾上腺素受体的调整作用;(2)观察SAR对家兔氢考模型外周淋巴细胞β受体的调整作用;(3)观察SAR对家兔氢考模型血清皮质醇含量的影响;(4)观察SAR对正常小鼠和甲亢大鼠糖皮质激素受体密度的影响;(5)用放射配基结合分析法检测动物组织细胞β受体和糖皮质激素受体数目(Rt值);(6)用放射免疫分析法测定血清皮质醇含量。结果:氢化可的松和甲状腺素可以分别使兔外周淋巴细胞和大鼠脑组织β受体数目升高;SAR和TIM可使上述动物病理性升高的β受体密度趋于正常;SAR不影响兔肝脏糖皮质激素受体密度和血清皮质醇(Cor)含量。结论:TIM和SAR对动物模型病理性升高的β受体的具有调整作用。

知母商品药材中的皂苷类成分含量测定

目的：考察市场流通商品知母药材的品质。方法：采用高效液相-蒸发光散射法测定不同流通地区的商品知母药材中皂苷类成分的含量、结果：知母皂苷E1、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B、知母皂苷AⅢ的平均回收率分别为100．31％（RSD为1．93％）、99．22％（RSD为1．72％）、101．80％（RSD为2．04％）、101．54％（RSD为1．76％），4种皂苷类成分的含量之和为4．4502％～6．2854％。结论：知母商品药材中皂苷类成分含量存在一定的差异，其品质差异的影响因素有待进一步考察。

知母皂苷对淀粉样β蛋白片段25~35引起的神经细胞凋亡的保护作用(英文)

目的 研究知母皂苷（SAaB）对淀粉样β蛋白片段25—35（Aβ25-35）激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡的保护作用及有关的机制。方法 体外培养小鼠腹腔巨噬细胞24h，加入Aβ25-35（20μmol·L^-1），分别在加入Aβ25-350．5，1，2和6h取巨噬细胞，应用Western印迹方法检测不同时间点的胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）的蛋白表达改变，确定ERK1／2和p38MAPK蛋白表达达峰时间。然后，在加入Aβ25-35墙前10min，加入SAaB（10，30和100μmol·L^-1）或在加入Aβ25-35前30min，分别加入p38MAPK的特异性阻断剂SB203580和ERK上游激酶MEK的特异性阻断剂PD98059，分别在Aβ25-35作用0．5和2h后，取细胞进行Western印迹实验。Aβ25-35墙作用48h后，取培养的巨噬细胞上清液测定肿瘤坏死因子．Ot（TNF．Ot）及一氧化氮（NO）生成量的改变，应用免疫细胞化学染色观察巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。为了观察SAaB对Aβ25-35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡的保护作用，在巨噬细胞培养液内加入SAaB（10，30和100μmol·L^-1）作用10min，然后加入Aβ25-35（20μmol·L^-1）作用48h后，将培养的上清液转移到体外培养8d的小脑颗粒细胞内作用72h，对照组将未被Aβ25-35刺激的巨噬细胞上清液加入到神经细胞内。应用Hoechst33258染色观察小脑颗粒细胞凋亡改变。结果 Aβ25-35（20μmol·L^-1）可使巨噬细胞磷酸化ERK1／2和磷酸化p38MAPK表达明显增加，分别在加入β25-35后0．5h和2h作用达高峰。另外，Aβ25-35也可使巨噬细胞的TNF-α和NO产生增加以及iNOS表达增加，Aβ25-35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加是通过ERK1／2信号通路激活介导的，因为MEK的特异性阻断剂PD98059可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加。将Aβ25-35刺激48h的巨噬细胞上清液加入到培养的小脑颗粒细胞内，可使神经细胞凋亡百分比较对照组明显增加。SAaB（30和100μmol·L^-1）能明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞磷酸化ERK1／2、磷酸化p38MAPK和iNOS表达增加，SAaB（10，30和100μmol·L^-1）也能对抗Aβ25-35引起的TNF-α和NO的生成增加及明显降低由Aβ25-35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡。结论 SAaB对β25-35，激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡具有对抗作用，该作用与其抑制巨噬细胞的ERK1／2信号转导通路，进而抑制巨噬细胞TNF-α和NO的产生有关。

知母总皂苷抗实验性抑郁作用的研究

目的研究知母总皂苷(total timosaponin,TT)的抗抑郁作用及其机制。方法采用小鼠强迫游泳实验,获得性无助实验,慢性温和应激模型,育亨宾毒性增强实验以及5-羟色胺酸诱导甩头实验等多种动物模型考察TT的抗实验性抑郁作用及其可能的机制。结果在小鼠强迫游泳实验中,TT(25,50mg·kg-1,qd×14d)可明显缩短小鼠的不动时间,且对自主活动无明显影响;TT(12.5,25,50mg·kg-1,qd×14d)可显著减少获得性无助小鼠的逃避错误次数;TT(25,50mg·kg-1,qd×21d)可显著增加慢性温和应激模型动物的活动次数以及蔗糖水消耗量;TT(50mg·kg-1,qd×14d)可提高育亨宾给药后4h的小鼠死亡率;并且显著增加5-羟色胺酸诱导小鼠的甩头次数。结论TT在多种抑郁模型上具有一定的抗抑郁作用,可能与增强去甲肾上腺素能及5-羟色胺能神经系统有关。