水动力尾静脉注射介导Akt/β-catenin/Yap质粒转染建立小鼠肝癌模型

目的通过应用水动力尾静脉注射(hydrodynamic tail vein injection,HTVi)Sleeping Beauty(SB)质粒及促癌基因质粒,构建一种新型小鼠肝癌模型。方法6周龄雄性C57BL/6J小鼠,按照体重随机分为对照组和模型组。将冻存的SB、Akt、β-catenin、Yap质粒转化入感受态E.coli DH5α大肠杆菌,于LB培养基扩增后提取质粒。每只模型组小鼠尾静脉快速注射上述质粒混合溶液2 mL,包含SB质粒5μg,Akt、β-catenin、Yap质粒分别15μg,对照组小鼠给予等量PBS尾静脉注射。继续饲养8周后处死小鼠,观察小鼠情况,记录体重、肝重。观察小鼠肝脏病理学变化,并应用Western blot法检测小鼠肝组织中Akt、β-catenin、Yap基因表达水平。结果高压注射质粒8周后,对照组小鼠活动度好,皮毛光亮;小鼠肝脏形态正常;肝组织HE染色显示,对照组小鼠肝小叶结构完整。模型组小鼠活动减少,皮毛无光泽。与对照组比较,模型组小鼠体重下降、肝重增加、肝体比显著上调;模型组小鼠肝脏体积增大,质地较硬,表面出现颗粒状、结节样改变;肝组织HE染色显示,模型组小鼠肝组织结构紊乱,并出现多个肿瘤结节。此外,与对照组相比,模型组小鼠肝组织中Akt、β-catenin、Yap基因表达均明显上调。结论应用水动力尾静脉注射SB质粒及Akt/β-catenin/Yap质粒的方法可成功建立小鼠肝癌模型,为肝癌发病机制及药物研发提供快速、经济的动物模型。