食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡

目的观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响,并初步探讨其机制。方法常规培养胃癌SGC7901细胞,单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用,MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测BCL-2、BAX、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达。结果食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖,其中1.0μmol/L食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用最强,抑制率为65.32%±2.51%(P<0.01);食欲素A组可见较多凋亡细胞:胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光,有明显的核固缩,SB408124干预后,凋亡细胞数量明显减少(P<0.05);食欲素A作用后,凋亡率为59.52%±1.38%,而SB408124干预后,凋亡率降至38.96%±1.82%(P<0.05);食欲素A可上调凋亡相关蛋白BAX、Cyt c及活化caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白BCL-2的表达(P<0.05),SB408124干预后,食欲素A作用减弱。结论食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用;食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的。

侧脑室注射Orexin-1受体拮抗剂对大鼠心血管效应的影响

目的:用侧脑室微量注射和免疫组化方法研究食欲素-1受体(OX1R)拮抗剂SB408124对麻醉大鼠的心血管效应及其作用机制。方法:雄性SD大鼠,侧脑室微量注射SB408124,及甲硝阿托品、六甲溴铵静脉注射预处理后侧脑室注射SB408124,观测动脉血压(MAP)和心率(HR)的变化。然后,用免疫组化方法检测侧脑室注射SB408124对大鼠脑延髓头端腹外侧区(RVLM)内酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的影响。结果:侧脑室注射SB408124可显著降低麻醉大鼠的MAP和HR,但是HR变化不如MAP变化明显。应用六甲溴铵可完全阻断SB408124的心血管效应,但甲硝阿托品不能阻断SB408124的心血管效应。侧脑室注射SB408124可使鼠脑延髓头端腹外侧区内酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量显著降低。结论:侧脑室注射OX1R拮抗剂SB408124可显著降低麻醉大鼠的MAP和HR,其作用主要是通过抑制交感神经系统的活性而实现的。

食欲素A对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及机制

目的研究食欲素A(orexin A)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,及其可能作用机制。方法以不同浓度的orexin A干预Hep G2细胞24h,MTT法检测细胞的增殖能力,筛选最适的orexin A作用浓度。使用食欲素受体1选择性拮抗剂SB408124(10μM)预处理细胞1 h,然后用最适浓度的orexin A干预细胞24h,实验设置为:正常对照组、溶剂对照组、orexin A组、SB408124+orexin A组。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞的形态变化,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cytochrome c和Cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果 Orexin A以剂量依赖性方式明显抑制Hep G2细胞的生长,最适宜浓度为0.5μM,细胞G0/G1期百分比(72.50%±1.32%)明显高于S期(19.6%9±1.15%)。Orexin A促进Hep G2细胞凋亡,细胞凋亡率显著升高(<0.01)。Orexin A显著上调Bax和Cleaved-caspase-3表达水平,下调Bcl-2和线粒体Cytochrome c表达水平。SB408124的干预能够减小orexin A对Hep G2细胞的影响。结论 Orexin A通过食欲素受体1抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡。