741对非亲缘关系供、受者HLA高分辨基因分型结果分析

目的研究造血干细胞捐献者资料库供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点等位基因高分辨全相合及不相合的概率。方法采用基因测序分型(sequence based typing,SBT),序列特异性寡核苷酸探针(sequence-specific oligo nucleotide probes,SSOP),聚合酶链反应序列特异性引物(sequence-specific primers,SSP)对741对HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合的无关供、受者进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因高分辨检测。结果HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因位点高分辨分型供、受者全相合的概率为0.1916(142/741);1个等位基因不相合的概率为0.1930(143/741),不相合的位点频率次序为:HLA-A>-Cw>-DQB1>-B>-DRB1;2个等位基因不相合的概率为0.2362(175/741),其中仅在一个位点(loci)上的概率为0.0175(13/741),位于两个位点上的概率为0.2186(162/741),以A+Cw组合位点不相合的概率最高,其次以B+Cw和DRB1+DQB1组合位点次之。结论对判断无关供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合,而HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1、HLA-Cw、HLA-DQB1高分辨基因分型全相合或部分相合的概率有重要参考价值,并且不仅能提高非亲缘造血干细胞移植的成功率,还有助于提高造血干细胞捐献者资料库数据的使用率。

石家庄地区RhD变异型的分子背景研究

目的研究石家庄地区RhD变异型的分布及基因分型。方法RhD变异型标本经血清学方法确认后,应用PCRSSP方法检测,对于检出的Rh弱D和部分D基因型,采用高分测序法(SBT)对RHD基因10个外显子进行序列分析。结果血清学实验检出D变异型(弱D或部分D)标本107例,PCR-SSP方法检测出部分D基因型14例,以D cat.VI type 3*型居多,弱D基因型93例,以弱D 15型为主,经测序发现3例Rh弱D表型均为第1外显子第22碱基T突变成C,且NCBI上未查到对应基因型。结论在石家庄地区,人群中RhD变异型个体的分子基础差异较大,呈多样性分布。

浙江省61株嗜肺军团菌血清1型菌株的SBT序列分型

目的了解浙江省空调冷却塔/冷凝水中嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的序列分型特征。方法选取2005～2011年间浙江省10个地区空调冷却塔/冷凝水中分离的61株Lp1型嗜肺军团菌菌株,采用欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)军团菌序列分型(SBT)方法,PCR扩增7对管家基因,对扩增产物进行测序、比对、递交,以获取等位基因号以及SBT序列型,运用DNAsp 5.0软件对测序结果进行核苷酸多态性分析,采用SplitsTree及eBURST软件对分型结果进行聚类分析。结果 61株Lp1型嗜肺军团菌可分为11种SBT序列型,其中5株(5/61)均为新发现序列型;ST-1型在10个地区(市)的冷却塔/冷凝水中均有分布,该序列型菌株占81.9%(50/61)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01095(mip)～0.05355(pilE)。聚类分析显示,浙江省Lp1型菌株分属多个克隆系,但主要分属ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149三大序列群,另有1株为不属于任何序列群的单体。结论聚类分析表明浙江省空调冷却塔/冷凝水中分离的Lp1型嗜肺军团菌存在遗传多样性,序列群分布与国内部分省份的结果相似,以ST-1序列型为主。

四川省部分地区温泉水嗜肺军团菌污染状况及基因分型

目的了解四川省部分地区温泉水中嗜肺军团菌污染状况,分析嗜肺军团菌SBT基因型别。方法随机采集省内部分温泉水进行嗜肺军团菌分离、鉴定和计数,对分离到的菌株进行血清分型、毒力基因(lvh、rtxA)检测、SBT基因分型。结果共采集水样27份,检出13株嗜肺军团菌,检出率为48.15%;分离到的嗜肺军团菌血清型包括Lp1、Lp3、Lp6、Lp9(或14)、Lp11和Lp13,以Lp1为主(占46.15%,6/13)。13株菌中,lvh、rtxA基因全部为阳性;13株嗜肺军团菌分为8种SBT型别,其中发现4种SBT新型。结论四川部分地区温泉水嗜肺军团菌污染比较严重,菌株均具有毒力,致病力强;温泉水中嗜肺军团菌SBT基因分型较分散,发现4个新的SBT型别。