多头绒泡菌SC35类蛋白的免疫电镜研究

经抗SC3 5单克隆抗体标记后 ,在电子显微镜下观察到多头绒泡菌S、G2 、前期、中期和后末期细胞核中存在大量金颗粒 ,说明多头绒泡菌细胞核含有SC3 5类蛋白。在G2 期和前期时 ,SC3 5类蛋白主要分布在细胞核的核仁区域和非核仁区域的染色质间区域 ;中期和后 末期时 ,SC3 5类蛋白主要分布在细胞核内染色体间区域 ;说明染色质 (体 )间区域和核仁区域是富含SC3 5类蛋白的区域。对核仁的进一步观察指出 ,在核仁中金颗粒主要分布在DFC ,FC中的金颗粒很少 ,说明在核仁中SC3 5类蛋白主要存在于DFC组分中。

多头绒泡菌PSCL32.5蛋白的性质及其含量在细胞周期中的变化

用免疫印迹技术检测到低等真核生物多头绒泡菌中含有两种与HeLa细胞SC3 5单克隆抗体反应的蛋白 ,其分子量分别为 3 2 5kD和 82 5kD ,将其命名为PSCL3 2 5和PSCL82 5。用SDS PAGE技术对PSCL3 2 5蛋白进行了纯化 ,用等电聚焦方法确定PSCL3 2 5蛋白的等电点为 6 19。应用免疫印迹技术检测多头绒泡菌细胞周期不同时相的PSCL3 2 5含量 ,发现该蛋白的含量在细胞周期中是变化的 ,在S早期时含量最低 ,从S期到G2 期含量逐步增高 ,G2

多头绒泡菌G_2期cDNA表达文库的构建

cDNA表达文库是分离、筛选基因的重要平台.为分离多头绒泡菌SC35类似蛋白PSCL32 5及其激酶的基因,首先检测多头绒泡菌PSCL32 5及其激酶在细胞周期不同时相的含量,发现PSCL32 5在G2期含量最高;再从多头绒泡菌G2期RNA出发,构建多头绒泡菌G2期cDNA表达文库.得到cDNA文库的初始滴度为1 22×106pfu/mL(pfu为噬菌体数目),cDNA扩增文库的滴度为1 12×1011pfu/mL,插入片段的重组率接近100%,插入片段的大小在0 5～2 5kb范围,说明所构建的cDNA文库质量较好.