葱白提取物对高脂血症大鼠SREBP2/PCSK9信号通路和线粒体功能的影响

目的探讨葱白提取物(FOB)对高脂血症(HLP)大鼠固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2/前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9信号通路和线粒体功能的影响。方法脂肪乳灌胃法构建大鼠HLP模型并进行模型鉴定,将大鼠分为:正常组、模型组、FOB低、中、高剂量组、瑞舒伐他汀组。生化方法检测血清脂质含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态变化,油红O染色观察脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹分别检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、PCSK9和SREBP2 mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察肝组织线粒体,流式检测活性氧(ROS)及线粒体膜电位,qPCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体融合蛋白(mfn)1、mfn2、神经萎缩蛋白(OPA)1、线粒体动力相关蛋白(Drp)1表达水平。结果与模型组比较,FOB能够显著降低血脂水平,减少脂质沉积,修复肝组织损伤,升高LDLR水平,降低PCSK9和SREBP2水平,缓解肝组织线粒体损伤,降低ROS水平,升高线粒体膜电位,升高mtDNA拷贝数、mfn1、mfn2、OPA1水平,降低Drp1蛋白水平。结论FOB能够降低血脂、改善线粒体功能,其机制可能与FOB调控SREBP2/PCSK9信号通路有关。

基于miR21/PI3K-Akt/SREBP通路研究泽泻汤对高脂血症模型小鼠的调脂作用机制

目的 探索经典名方泽泻汤对高脂血症模型小鼠的调脂作用机制。方法 采用ELISA法检测血清中血脂四项、肝功能指标及胆固醇脂酰转移酶(LCAT)水平。采用HE和油红O染色法判断肝组织病理情况。采用网络药理学预测泽泻汤降脂相关靶点,实现对交集靶点GO功能和KEGG通路富集分析。采用PCR芯片技术检测网络药理学筛选的目的基因,应用qPCR和Western blot检测基因和蛋白表达量。结果 泽泻汤可显著调节高脂血症模型小鼠的血脂四项水平,改善因高脂引起的肝损伤指标升高,对肝脏组织中脂质代谢关键酶HMGR、CYP7A1及脂质转运体ABCA1、Apo-A1具有反向调节作用。HE和油红O染色显示,泽泻汤可改善肝组织病理形态,减轻肝组织的脂质沉积情况,阳性面积比率显著下降(P<0.01)。PCR芯片获取反向调节基因44个,GO功能富集分析获取了266个条目,KEGG通路富集分析筛选得到99条信号通路。qPCR及Western blot结果显示,泽泻汤组显著下调PIK3CG、AKT1、IL-6基因表达量(P<0.05,P<0.01),上调ABCG1基因表达量(P<0.05),下调PI3 Kinase p110β、p-AKT(Ser473)及SREBP-1c蛋白表达水平(P<0.01);泽泻汤能够反向调节miR21-5p(P<0.01)。结论 泽泻汤对高脂血症模型小鼠脂代谢具有显著的调节作用,能改善高脂血症引起的肝损伤,其调脂作用可能与调节胆固醇在体内代谢、转运有关,与miR21/PI3K-Akt/SREBP通路密切相关,且泽泻汤全方调脂效果优于单味药。

苦参碱对结肠癌肝转移小鼠SCAP/SREBP1信号通路的调节作用研究

[目的]研究苦参碱对结肠癌肝转移小鼠肿瘤抑制作用及对SCAP/SREBP1信号通路的调节作用。[方法]72只小鼠随机分为空白对照组、肝转移模型组、苦参碱低、中、高剂量组及卡培他滨组,每组12只,采用脾内注射结肠癌HCT116细胞法建立结肠癌肝转移小鼠模型,苦参碱低、中、高剂量组分别灌胃给予12.5、25、50 mg/kg的苦参碱,给药21 d,卡培他滨组按照267 mg/kg灌胃给予卡培他滨,测定小鼠肝脏质量及肝转移结节数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)、白介素(IL)-6水平,苏木精-伊红(HE)染色法检查肝组织病理学,实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA水平,免疫印迹(Western blot)法测定肿瘤组织SCAP、SREBP1水平。[结果]与空白对照组比较,肝转移模型组小鼠肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);与肝转移模型组比较,苦参碱各剂量组肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),随着苦参碱剂量的增加,各项指标降低更明显。[结论]苦参碱能够显著抑制结肠癌肝转移,缓解肝组织病理学改变,其机制可能与调节SCAP/SREBP1信号通路有关。

SCAP/SREBP2/LDLr通路在LPS诱导人血管平滑肌细胞泡沫化中的作用

目的:研究炎症介质——脂多糖(LPS)是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加人血管平滑肌细胞对天然低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成。方法:人血管平滑肌细胞在无血清培养基中培养24 h后,分为对照组(继续无血清培养);高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml);高脂加LPS组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,同时加入LPS,终浓度400 ng/ml);高脂加LPS加肝素组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,加入LPS,终浓度400 ng/ml,加入肝素,终浓度5 mg/ml),以上各组细胞培养24 h后收获。酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,油红O染色法检测细胞内脂质水平,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2表达水平,细胞免疫化学法检测SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果:细胞内胆固醇测定及油红O染色发现,LPS通过增加人血管平滑肌细胞对非修饰LDL摄取,导致人血管平滑肌细胞转变为泡沫细胞。在LPS不存在时,25μg/ml LDL减少LDLr mRNA水平(P<0.05)。然而,LPS增加LDLr mRNA水平,逆转25μg/ml LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了血管平滑肌细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP蛋白表达增加和SREBP2的mRNA水平升高(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS通过增加SCAP/SREBP2复合物从内质网到高尔基体转位,干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在血管平滑肌细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论:本研究提示,在LPS刺激条件下,SCAP/SREBP2/LDLr通路可能是血管平滑肌细胞泡沫化的另一条通路。

鸠坑龙井茶对高脂饮食C57BL/6小鼠肝脂肪变性SREBPs通路信号的影响及肠道菌群调节作用研究

探究鸠坑龙井茶水提物(LJT)对小鼠肝组织脂质代谢SREBPs通路信号影响及肠道菌群的调节作用。通过高脂饮食诱导小鼠构建非酒精性脂肪肝(NAFL)模型,并给予LJT(300 mg·kg^(-1))灌胃干预。定期记录小鼠的体质量,检测小鼠血清生化指标和葡萄糖耐受水平,观察并分析Hematoxylin-Eosin(HE)染色、油红O染色肝组织切片特征;应用Real-time qPCR技术检测小鼠肝组织SREBPs通路7个基因(SREBP-1c、FAS、SCD-1、ACC-1、SREBP-2、HMGCR、PPARγ)的相对表达量,采用蛋白免疫印记技术(Western Blot)分析肝组织蛋白质表达水平,同时对小鼠肠道菌群进行高通量测序(16 S rDNA)并分析其结构。结果显示,LJT干预后小鼠体质量、血糖AUC、血清TG、TC、LDL-C和肝脏中TG、TC水平有显著下降,龙井组小鼠肝组织SREBP-1c、FAS、ACC-1、SCD-1和PPARγ蛋白表达水平降低,SREBP-1c、SCD-1、FAS、ACC-1、SREBP-2、HMGCR、PPARγ基因的相对表达量显著下调;16 S rDNA分析发现,小鼠肠道菌群门水平主要为Firmicutes、Bacteroidota、Desulfobacterota和Actinobacteriota 4类,LJT有效延缓了高脂饮食引起的Firmicutes相对丰度升高和Bacteroidota相对丰度下降趋势,并增加了肠道菌群的物种丰度。结果表明,LJT能够干预小鼠肝脂肪变性SREBPs通路信号表达,改善小鼠肠道菌群紊乱,具有降脂减肥作用。

二陈汤对肥胖小鼠肝脏脂代谢及AMPK/ACC/SREBP1信号通路作用机制研究

目的:观察二陈汤对肥胖小鼠肝组织AMPK/ACC/SREBP1信号通路的作用,并探讨其改善肝脏脂质代谢及炎性病变的作用机制。方法:将小鼠随机分为空白(Control)组、模型(Model)组、奥利司他(Orlistat)组和二陈汤(ECD)组。除Control组外,其他各组小鼠通过高脂饲料建立肥胖模型。Orlistat组和ECD组小鼠分别给予奥利司他胶囊和二陈汤,Control组和Model组小鼠给予等体积的生理盐水。计算小鼠体重、肝脏湿重和肝体比值;检测小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;HE染色和油红O染色分别用于观察肝组织病理形态及肝组织脂滴的变化;ELISA检测肝组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平;Western bolt检测肝组织中AMPK、ACC、SREBP1及其磷酸化的蛋白表达水平。结果:与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠体重、肝脏湿重及肝体比值都有所降低(P<0.01,P<0.05),且肝组织病理结构和脂滴沉积得到明显改善。与Control组比较,Model组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01),而HDL-C水平下降(P<0.01)。与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平下降(P<0.01,P<0.05),而HDL-C水平升高(P<0.01,P<0.05)。与Control组比较,Model组小鼠肝组织中p-AMPKα/AMPKα、p-ACC/ACC的表达水平显著降低(P<0.01),而IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、SREBP1的表达水平显著升高(P<0.01)。与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠肝组织中p-AMPKα/AMPKα、p-ACC/ACC表达水平升高(P<0.01,P<0.05),而IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、SREBP1表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:二陈汤可通过调节AMPK/ACC/SREBP1信号通路改善肥胖小鼠肝脏脂代谢紊乱。

痛泻要方合四逆散对2型糖尿病KK-Ay小鼠脂代谢及AMPK/SREBP1c/Fas通路的影响

目的 观察痛泻要方合四逆散对2型糖尿病KK-Ay小鼠脂代谢以及肝脏AMPK/SREBP1c/Fas通路的影响。方法 将24只SPF级雄性KK-Ay小鼠建立2型糖尿病模型,采用随机表数字法分为模型组、痛泻药方合四逆散中药低、中、高剂量组,每组各6只,另取6只雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。干预4周后,检测小鼠血脂[高密度脂蛋白(High density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL)、甘油三酯(Triglyceride, TG)]以及脂联素的表达水平,并通过RT-PCR,Western blot检测小鼠肝脏中AMPK、SREBP1c、Fas蛋白以及基因的表达情况。结果 痛泻药方合四逆散可明显上调KK-Ay小鼠的血清HDL和脂联素水平,下调TG和LDL表达水平,差异有统计学意义(P<0.05),且呈现剂量依赖性;另外,中药高剂量组可以增加小鼠肝脏中AMPK基因和磷酸化蛋白表达水平,降低SREBP1c和Fas的基因和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 痛泻药方合四逆散能通过调控AMPK/SREBP1c/Fas信号通路而改善2型糖尿病KK-Ay小鼠脂代谢紊乱。

桃叶珊瑚苷对人结肠癌HT-29细胞恶性生物学行为及SCAP/SREBP-1通路的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对人结肠癌HT-29细胞恶性生物学行为及固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)/固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)通路的影响。方法实验设结肠癌HT-29细胞组、5-氟尿嘧啶组(30μmol/L)、桃叶珊瑚苷低剂量组(50μmol/L)、桃叶珊瑚苷高剂量组(100μmol/L),各组每孔设6个平行样,培养72h后,采用四唑盐(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭迁移能力,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定细胞SCAP、SREBP-1 mRNA与蛋白水平。结果与结肠癌HT-29细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、桃叶珊瑚苷低、高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.32±0.03)、(0.65±0.04)、(0.47±0.05)比(0.95±0.03),P均<0.05]及存活率[(29.47±3.14)%、(55.98±2.48)%、(38.45±2.54)%比(94.25±5.63)%,P均<0.05]下降,穿膜数[(159.69±24.84)个、(422.59±32.96)个、(242.59±31.55)个比(659.85±29.96)个,P均<0.05]减少,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(1.63±0.28)、(4.96±0.32)、(2.86±0.31)比(6.25±0.32),P均<0.05;SREBP-1:(1.95±0.42)、(4.73±0.50)、(2.93±0.51)比(5.90±0.52),P均<0.05]和蛋白[SCAP:(0.27±0.06)、(0.83±0.11)、(0.52±0.09)比(1.26±0.18),P均<0.05;SREBP-1:(0.24±0.04)、(0.87±0.12)、(0.56±0.08)比(1.22±0.17),P均<0.05]水平降低,凋亡率[(15.96±0.78)%、(8.99±0.85)%、(12.63±0.87)%比(4.32±0.63)%,P均<0.05]升高。与5-氟尿嘧啶组比较,桃叶珊瑚苷低、高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.65±0.04)、(0.47±0.05)比(0.32±0.03),P均<0.05]及存活率[(55.98±2.48)%、(38.45±2.54)%比(29.47±3.14)%,P均<0.05]较高,穿膜数[(422.59±32.96)个、(242.59±31.55)个比(159.69±24.84)个,P均<0.05]增多,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(4.96±0.32)、(2.86±0.31)比(1.63±0.28),P均<0.05;SREBP-1:(4.73±0.50)、(2.93±0.51)比(1.95±0.42),P均<0.05]和蛋白[SCAP:(0.83±0.11)、(0.52±0.09)比(0.27±0.06),P均<0.05;SREBP-1:(0.87±0.12)、(0.56±0.08)比(0.24±0.04),P均<0.05]水平升高,凋亡率[(8.99±0.85)%、(12.63±0.87)%比(15.96±0.78)%,P均<0.05]降低。与桃叶珊瑚苷低剂量组比较,桃叶珊瑚苷高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.47±0.05)比(0.65±0.04),P<0.05]及存活率[(38.45±2.54)%比(55.98±2.48)%,P<0.05]降低,穿膜数[(242.59±31.55)个比(422.59±32.96)个,P<0.05]减少,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(2.86±0.31)比(4.96±0.32),P<0.05;SREBP-1:(2.93±0.51)比(4.73±0.50),P<0.05]和蛋白[SCAP:(0.52±0.09)比(0.83±0.11),P<0.05;SREBP-1:(0.56±0.08)比(0.87±0.12),P<0.05]水平降低,凋亡率[(12.63±0.87)%比(8.99±0.85)%,P<0.05]升高。结论桃叶珊瑚苷能明显抑制人结肠癌HT-29细胞增殖、侵袭,促进其凋亡;其机制可能与桃叶珊瑚苷抑制SCAP/SREBP-1通路的激活有关。

苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白表达的影响

目的观察苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪中激活蛋白(SCAP)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)蛋白表达的影响。方法将高脂饲料喂养的雄性SPF级ZDF大鼠随机分为模型组、苦酸通调组、吡格列酮组,普通饲料喂养的雄性SPF级ZL大鼠为正常对照组,每组10只。苦酸通调组按照3.29 g/kg/d灌胃给药,吡格列酮组按照1.07 mg/kg/d灌胃给药,连续给药12周。经Western blot法检测各组大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组SCAP及SREBP-1c蛋白表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,苦酸通调方组及吡格列酮组可明显降低SCAP及SREBP-1c蛋白表达(P<0.01)。结论苦酸通调方可明显降低糖尿病大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白的表达。

Insig-SCAP-SREBP转运体系的研究进展

固醇调节元件结合蛋白SREBPs(sterol regulatory element bingding proteins)是真核细胞内调节脂质合成的关键核转录因子.新合成的SREBPs是一种没有活性的前体蛋白,通过两个跨膜α-螺旋结合在内质网上,必须由内质网转运到高尔基体后,才能加工成有活性转录因子--核SREBPs(nSREBPs).……

菊花、菊茎主要成分的含量差异及基于SREBP通路调控游离脂肪酸代谢的比较研究

目的比较菊花和菊茎化学成分及调节脂代谢作用机制的差异。方法采用HPLC法比较菊花和菊茎中主要成分的含量差异;采用油酸钠诱导的方法,建立Hep G2细胞脂肪蓄积模型,考察不同浓度菊花和菊茎提取物对Hep G2细胞中脂肪蓄积的影响;采用RT-PCR法检测各组Hep G2细胞内SREBP-1c、FAS、ACC基因的m RNA表达水平。结果菊花样品中绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸成分含量均高于菊茎且菊茎中未检测出木犀草苷成分;高、中浓度的菊花和菊茎样品均能显著降低油酸钠诱导Hep G2细胞脂肪蓄积;菊花和菊茎均能上调FAS基因m RNA表达,下调SREBP-1c、ACC基因m RNA表达。结论虽然菊花及菊茎化学成分差异明显,菊茎也具有抑制脂肪蓄积活性,有进一步研究与开发的价值。

荷叶碱对非酒精性脂肪肝模型小鼠肝组织中SREBP信号通路的影响

[目的]研究中药荷叶有效成分对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的治疗作用及相关机制。[方法]通过蛋氨酸和胱氨酸联合缺乏饲料建立NAFLD模型小鼠,同时灌胃不同剂量荷叶碱,通过考察造模给药后各组小鼠体质量及血清生化指标,同时对肝组织分别进行苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色,研究荷叶碱对NAFLD模型小鼠的治疗作用。此外提取造模给药后各组小鼠肝组织总核糖核酸(RNA),荧光定量核酸扩增检测(qPCR)法检测各组小鼠肝组织中胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)通路相关基因表达,初步探究荷叶碱缓解NAFLD的作用机制。[结果]荷叶碱能显著降低NAFLD模型小鼠体质量、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)水平,同时荷叶碱可缓解NAFLD模型小鼠肝组织中脂肪变性,减少肝组织中脂质含量;此外,荷叶碱可下调NAFLD模型小鼠肝组织中SREBP通路相关基因SREBP-1、乙酰CoA羧化酶(ACC)、ATP-柠檬酸裂解酶(ACLY)及脂肪酸合酶(FASN)表达。[结论]荷叶碱对NAFLD具有明显的疗效,其作用机制可能与抑制肝细胞SREBP通路激活相关。

缺血性心脑血管疾病患者SCAP基因Ile796Val多态性的研究

目的 探讨甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白 (SCAP)基因 Ile796Val多态性与缺血性心脑血管疾病患者的相关性。方法 选取冠心病患者 1 1 2例分为 2组〔血清胆固醇 (TC)与甘油三酯 (TG)正常组 50例 ,血清 TC与 TG增高组 62例〕,缺血性脑卒中患者 53例。采用 PCR-RFLP的分析方法 ,检测老年人群中缺血性心脑血管疾病患者 SCAP基因 Ile796Val的多态性。结果 冠心病血脂正常组与对照组相比 ,基因型和等位基因差异无显著性 (P>0 .0 5)。冠心病血脂增高组和缺血性脑卒中组与对照组相比 ,基因型和等位基因均有显著性差异 (P<0 .0 5) ,且 A等位基因频率显著高于对照组。结论 SCAP基因 Ile796Val多态性对心脑血管的遗传学研究具有重要意义。提示 SCAP基因 A等位基因与动脉粥样硬化有着密切的关系 ,并且增加了罹患缺血性心脑血管疾病的风险性。

SCAP与胆固醇水平的调节机制

ＳＲＥＢＰ裂解激活蛋白(ＳＲＥＢＰ ｃｌｅａｖａｇｅ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＳＣＡＰ)是哺乳动物脂质合成和摄入的中心调节因子。在胆固醇代谢的反馈调节系统中,ＳＣＡＰ与膜结合转录因子胆固醇调节元件结合蛋白(ｓｔｅｒｏｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ;ＳＲＥＢＰｓ)等调节因子,共同控制一系列酶编码基因的转录过程,包括胆固醇和脂肪酸生物合成过程中所需的酶。作者介绍了ＳＲＥＢＰ的结构、分类和功能及其二步蛋白水解释放;ＳＣＡＰ的结构和作用机制及其在胆固醇水平调节中的作用;ＳＣＡＰ基因缺陷型及其胆固醇水平异常,并提出了尚待解决的问题。对ＳＣＡＰ的研究是胆固醇水平调节领域的一个新课题。

基于AMPK/SIRT1/SREBP1信号通路探究膜肾颗粒对膜性肾病大鼠蛋白尿的治疗作用

目的 基于单磷酸腺苷活化的蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP1)信号通路观察膜肾颗粒对膜性肾病大鼠蛋白尿的影响及作用机制。方法 80只SD大鼠随机挑选15只为空白组,其余大鼠利用改良Border法建立膜性肾病大鼠模型,造模大鼠随机分为模型组、环孢素A(cyclosporin A,CsA)组和膜肾颗粒低、高剂量(1.85、7.38 g/kg)组。观察大鼠一般状态,采用双缩脲比色法检测大鼠造模前、造模后、给药结束后24 h尿蛋白定量(urinary protein quantity,UTP);使用全自动生化仪检测大鼠尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)水平;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、基底膜六胺银染色(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色观察肾脏病理学变化;采用Western blotting检测大鼠肾组织Nephrin、AMPK/SIRT1/SREBP1通路相关蛋白表达。结果 各组BUN、Scr水平无明显差异。与空白组比较,模型组大鼠24 h-UTP、TC、TG水平明显升高(P<0.01),肾组织病理改变明显,肾组织Nephrin、p-AMPKα/AMPKα和SIRT1表达显著降低(P<0.01),SREBP1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组24 h-UTP、TC、TG水平明显降低(P<0.01),肾组织病理改变减轻,Nephrin、p-AMPKα/AMPKα、SIRT1蛋白表达水平明显升高(P<0.05、0.01),SREBP1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论 膜肾颗粒可以显著减少膜性肾病大鼠蛋白尿水平,可能与上调肾组织AMPKα/SIRT1信号通路表达,减少SREBP1合成,改善脂代谢重编程有关。

白虎加人参汤对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的:研究白虎加人参汤对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇反应元件结合蛋白-1(SREBP1)信号通路的影响。方法:通过高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立T2DM模型大鼠,并用不同剂量的白虎加人参汤灌胃。通过检测各组大鼠造模给药后血清中相关生化指标和肝组织病理学变化,评估白虎加人参汤对T2DM模型大鼠的治疗作用;然后,运用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫分析法检测白虎加人参汤干预后,各组大鼠肝组织中AMPK/SREBP1信号通路关键因子腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)基因及蛋白水平,初步探究白虎加人参汤治疗T2DM模型大鼠的作用机制。结果:白虎加人参汤可明显降低T2DM模型大鼠血清中空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,同时改善T2DM模型大鼠肝组织病理学变化。qPCR及蛋白质免疫分析结果显示,白虎加人参汤可显著降低T2DM模型大鼠肝组织中AMPK基因与蛋白水平,上调SREBP1、ACC1、ACLY、FASN基因与蛋白水平。结论:白虎加人参汤对T2DM模型大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与调节肝组织中AMPK/SREBP1信号通路,改善脂代谢有关。

爪蟾卵母细胞固醇调控通路的建立及姜黄素的作用

[目的]在爪蟾卵母细胞中建立人类SCAP/SREBP固醇调控系统,利用此系统研究姜黄素对SCAP/SREBP调控通路的作用。[方法]构建带有绿色荧光报告蛋白基因的PLXRN-4SRE-fpa质粒,将构建质粒和其他几种质粒分别提取混和成实验组质粒和对照组质粒,通过微注射的方法分别共注射到Ⅴ、Ⅵ爪蟾卵母细胞核内,与不同浓度的姜黄素共孵育3天,使用荧光定量PCR检测荧光表达量。[结果]相同浓度的姜黄素对注射含有固醇调节元件质粒的卵母细胞荧光表达量要明显高于不含相应元件的质粒。[结论]构建的质粒pLXRN-4SRE-fPA能在爪蟾卵母细胞中有效地应答SCAP、SREBP调控因子;通过影响SCAP/SREBP调控通路调节SRE-1下游基因的表达可能是姜黄素调脂作用的机理之一;利用核内共注射的方法在爪蟾卵母细胞中建立的SCAP/SREBP调控系统可作为SCAP配体类药物快速筛选和作用机制研究的细胞模型。

固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)的研究进展

对SCAP的结构、功能、单核苷酸多态性等方面作一综述,并就固醇对SCAP的反馈性调节机制进行讨论。

血管平滑肌SCAP过表达抑制自噬促进脂质积聚的机制研究

目的探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage activating protein,SCAP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)泡沫化的影响及其分子机制。方法构建LV-SCAP与LV-Control血管平滑肌细胞系,免疫印迹法检测SCAP及其下游相关蛋白nSREBP2表达水平;油红O染色观察负荷LDL胆固醇后脂滴积聚,酶标仪检测细胞总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)水平;单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverine,MDC)染色检测自噬小泡聚集;Western blot检测自噬相关蛋白LC3b、P62与AMPK-mTOR通路表达;mTOR抑制剂雷帕霉素处理LV-SCAP过表达细胞株,Western blot与油红O染色验证处理后效果。结果与LV-Control组相比,LV-SCAP组nSREBP2表达明显上调(P<0.05),经LDL胆固醇负荷后产生的脂滴增多,TC、TG水平明显增高(P<0.05);LV-SCAP组细胞内自噬小泡聚集减少,自噬相关蛋白LC3b下调,P62上调,p-AMPK/AMPK水平降低,p-mTOR/mTOR水平升高(P<0.05)。Rapa处理结果显示LC3b表达增加,P62水平降低(P<0.05),油红O染色脂滴沉积减少(P<0.05)。结论SCAP可能通过影响AMPK-mTOR信号通路抑制血管平滑肌细胞的自噬过程,促进其泡沫化,进而参与血管动脉粥样硬化的发生发展。

晚期氧化蛋白产物致胆固醇敏感器SCAP功能失调导致巨噬细胞胆固醇含量增加

目的:探讨晚期氧化蛋白产物对巨噬细胞内胆固醇含量及SCAP表达的影响。方法:采用伏波醇酯(PMA)诱导THP-1单核细胞形成巨噬细胞,AOPP体外干预THP-1源性巨噬细胞,油红O染色鉴定,应用酶法测定巨噬细胞内胆固醇含量,应用Real-time PCR与Western blot方法测定巨噬细胞LDLr、SREBPs、SCAP mRNA及蛋白表达。结果:AOPP组巨噬细胞内胆固醇含量明显高于对照组,AOPP组巨噬细胞LDLr、SREBPs、SCAP mRNA及蛋白表达显著高于对照组。结论:晚期氧化蛋白产物能够增加巨噬细胞内胆固醇含量,SCAP功能障碍是细胞内胆固醇含量增加的主要原因之一。