桃叶珊瑚苷对人结肠癌HT-29细胞恶性生物学行为及SCAP/SREBP-1通路的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对人结肠癌HT-29细胞恶性生物学行为及固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)/固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)通路的影响。方法实验设结肠癌HT-29细胞组、5-氟尿嘧啶组(30μmol/L)、桃叶珊瑚苷低剂量组(50μmol/L)、桃叶珊瑚苷高剂量组(100μmol/L),各组每孔设6个平行样,培养72h后,采用四唑盐(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭迁移能力,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定细胞SCAP、SREBP-1 mRNA与蛋白水平。结果与结肠癌HT-29细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、桃叶珊瑚苷低、高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.32±0.03)、(0.65±0.04)、(0.47±0.05)比(0.95±0.03),P均<0.05]及存活率[(29.47±3.14)%、(55.98±2.48)%、(38.45±2.54)%比(94.25±5.63)%,P均<0.05]下降,穿膜数[(159.69±24.84)个、(422.59±32.96)个、(242.59±31.55)个比(659.85±29.96)个,P均<0.05]减少,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(1.63±0.28)、(4.96±0.32)、(2.86±0.31)比(6.25±0.32),P均<0.05;SREBP-1:(1.95±0.42)、(4.73±0.50)、(2.93±0.51)比(5.90±0.52),P均<0.05]和蛋白[SCAP:(0.27±0.06)、(0.83±0.11)、(0.52±0.09)比(1.26±0.18),P均<0.05;SREBP-1:(0.24±0.04)、(0.87±0.12)、(0.56±0.08)比(1.22±0.17),P均<0.05]水平降低,凋亡率[(15.96±0.78)%、(8.99±0.85)%、(12.63±0.87)%比(4.32±0.63)%,P均<0.05]升高。与5-氟尿嘧啶组比较,桃叶珊瑚苷低、高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.65±0.04)、(0.47±0.05)比(0.32±0.03),P均<0.05]及存活率[(55.98±2.48)%、(38.45±2.54)%比(29.47±3.14)%,P均<0.05]较高,穿膜数[(422.59±32.96)个、(242.59±31.55)个比(159.69±24.84)个,P均<0.05]增多,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(4.96±0.32)、(2.86±0.31)比(1.63±0.28),P均<0.05;SREBP-1:(4.73±0.50)、(2.93±0.51)比(1.95±0.42),P均<0.05]和蛋白[SCAP:(0.83±0.11)、(0.52±0.09)比(0.27±0.06),P均<0.05;SREBP-1:(0.87±0.12)、(0.56±0.08)比(0.24±0.04),P均<0.05]水平升高,凋亡率[(8.99±0.85)%、(12.63±0.87)%比(15.96±0.78)%,P均<0.05]降低。与桃叶珊瑚苷低剂量组比较,桃叶珊瑚苷高剂量组人结肠癌HT-29细胞OD值[(0.47±0.05)比(0.65±0.04),P<0.05]及存活率[(38.45±2.54)%比(55.98±2.48)%,P<0.05]降低,穿膜数[(242.59±31.55)个比(422.59±32.96)个,P<0.05]减少,SCAP、SREBP-1 mRNA[SCAP:(2.86±0.31)比(4.96±0.32),P<0.05;SREBP-1:(2.93±0.51)比(4.73±0.50),P<0.05]和蛋白[SCAP:(0.52±0.09)比(0.83±0.11),P<0.05;SREBP-1:(0.56±0.08)比(0.87±0.12),P<0.05]水平降低,凋亡率[(12.63±0.87)%比(8.99±0.85)%,P<0.05]升高。结论桃叶珊瑚苷能明显抑制人结肠癌HT-29细胞增殖、侵袭,促进其凋亡;其机制可能与桃叶珊瑚苷抑制SCAP/SREBP-1通路的激活有关。

基于SIRT1/AMPK/SREBP-1c通路探讨加味二陈汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的探讨加味二陈汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响及机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、阿托伐他汀组(0.05 g·kg^(-1))及加味二陈汤低、高剂量组(12、24 g·kg^(-1))。采用连续10周高脂饲料饲养复制NAFLD小鼠模型。从第11周开始灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续给药6周。第16周结束给药前,小鼠禁食12 h后腹腔注射1 g·kg^(-1)葡萄糖溶液,于0、15、30、60、90、120 min测定小鼠血糖值。测定并记录各组小鼠体质量、肝脏质量,计算肝脏系数;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总谷胱甘肽(TGSH)及肝脏组织TC、TG的含量或活性。采用HE染色法及油红O染色法观察肝组织病理变化;采用RT-qPCR及Western Blot法检测肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)mRNA及蛋白表达情况。结果造模结束后,与正常组比较,各造模组小鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.001)。给药结束后,与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量及肝脏系数显著升高(P<0.05,P<0.001);血清TC、TG及LDL-C水平显著升高(P<0.001),HDL-C水平显著降低(P<0.001);肝组织TC、TG及血清ALT、AST水平显著升高(P<0.05,P<0.001);血清SOD、TGSH水平显著降低(P<0.05,P<0.001),空腹及注射葡萄糖后(15、30、60、90、120 min)的血糖水平明显升高(P<0.05,P<0.01);肝组织细胞质可见大量的空泡,胞质出现大量红染的脂滴;肝组织SIRT1、AMPK mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01),SREBP-1c mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,阿托伐他汀组及加味二陈汤低、高剂量组小鼠的体质量、肝质量、肝脏系数显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);血清TC、TG及LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),HDL-C水平显著升高(P<0.001);肝组织TC、TG及血清ALT、AST水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);血清SOD、TGSH水平明显升高(P<0.05,P<0.01),空腹及注射葡萄糖后(15、30、60、90、120 min)的血糖水平明显降低(P<0.05,P<0.01);肝细胞胞质内橘红色脂滴显著减少,脂质蓄积显著改善;肝组织SIRT1、AMPK mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),SREBP-1c mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001)。结论加味二陈汤对NAFLD小鼠肝脏脂质代谢有显著改善作用,其机制可能与调控SIRT1/AMPK/SREBP-1c通路有关。

基于LXRα/SREBP-1c/FAS通路探讨茵杞调脂饮对代谢相关脂肪性肝病模型大鼠的治疗机制

目的:探索茵杞调脂饮对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型大鼠的干预机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组和造模组,分别给予普通饲料、高脂饲料喂养12周。确认MAFLD造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、阳性药物组(每日给予水飞蓟宾18.75 mg/kg)和茵杞调脂饮低、中、高剂量组(每日给药剂量分别为9.51 g/kg、19.02 g/kg、38.04 g/kg),每组8只,正常组也取8只,各组每日分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续8周。灌胃期间茵杞调脂饮低剂量组大鼠死亡1只。检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝组织甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,分别采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察各组大鼠肝组织脂肪变性程度,采用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)法检测各组大鼠肝组织X受体α(LXRα)、胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白表达。结果:病理形态学结果显示,模型组大鼠肝小叶结构破坏,肝细胞肿胀,细胞间界限模糊,可见明显脂滴;各给药组大鼠肝细胞脂肪变性明显减轻,脂滴数量和面积减少,以茵杞调脂饮高剂量组改善最为明显。模型组大鼠血清ALT、AST含量和肝组织TG、FFA、TNF-α水平显著高于正常组(P<0.01),肝组织SOD、GSH水平显著低于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述指标均较模型组明显改善(P<0.05,P<0.01),其中茵杞调脂饮高剂量组上述指标改善程度明显优于阳性药物组,中药各剂量对上述指标的改善表现出一定的剂量依赖性。模型组大鼠肝组织LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),其中茵杞调脂饮高剂量组LXRα、FAS蛋白表达显著低于阳性药物组(P<0.05),中药各剂量对上述蛋白表达的调节作用表现出一定的剂量依赖性。结论:茵杞调脂饮能改善MAFLD模型大鼠肝组织病理形态学表现,减少脂质沉积,减轻肝细胞损害,其机制可能与调节LXRα/SREBP-1c/FAS通路有关。

黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c/ACC通路的影响

目的 探讨黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠的防治作用及机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(辛伐他汀,2.1 mg·kg^(-1))组和黄芪总皂苷+荷叶总生物碱低(17+40 mg·kg^(-1))、中(34+80 mg·kg^(-1))、高(68+160 mg·kg^(-1))剂量组;采用高脂饲料喂养复制高脂血症大鼠模型,同时给予药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;采用HE染色法观察肝脏组织病理形态学变化;qRT-PCR法检测肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)m RNA表达情况;免疫荧光法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c、ACC、CPT-1蛋白表达情况;Western Blot法检测肝组织中AMPK、p-AMPK、SREBP-1c、ACC、p-ACC、CPT-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);大鼠肝细胞内有大量的脂滴聚集,胞浆疏松,出现了大量脂滴空泡和气球样变,细胞核偏移;大鼠肝组织AMPK、CPT-1 mRNA表达显著下调(P<0.01),ACC、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著增加(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平明显下降(P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平明显下降(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显升高(P<0.01);大鼠肝细胞内的脂肪沉积均有明显减轻,仅见少量的脂滴空泡;大鼠肝组织AMPK、CPT-1mRNA的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著减少(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论 黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱可能通过调节AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路,抑制脂肪合成,促进脂肪酸氧化分解来防治高脂血症。

内质网应激通过SCAP/SREBP-1c调控L02肝细胞脂质合成代谢

目的在内质网应激状态下,观察SCAP/SREBP-1c对肝细胞脂质合成代谢的影响。方法用毒胡萝卜素(Tg)诱导人L02正常肝细胞株建立内质网应激模型,Western blot检测GRP78的蛋白表达。甘油三酯(TG)试剂盒和油红O染色检测肝细胞内脂变程度;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因FAS、ACC1的mRNA表达情况,Western blot检测n SREBP-1c、FAS、ACC1的蛋白表达情况。通过miRNA瞬时转染沉默SCAP基因的表达,观察上述指标的变化情况。结果实验组GRP78蛋白的相对表达量与对照组比较,均显著增加(P<0.05),Tg在体外成功建立肝细胞内质网应激模型。与空白对照组相比,Tg组肝细胞内甘油三酯含量明显增加(P<0.05),脂滴明显增多;n SREBP-1c的蛋白水平明显升高(P<0.05);下游靶基因FAS和ACC1的基因和蛋白水平均明显上调(P<0.05),与n SREBP-1c的升高趋势一致。转染SCAP-3 miRNA载体后,以上指标均明显下调(P<0.05)。结论内质网应激通过SCAP/SREBP-1c调控肝细胞脂质合成代谢,促进脂质沉积,是NAFLD重要的发病机制之一。靶向干扰SCAP,能减轻内质网应激所致的肝细胞脂肪变程度,成为安全有效的NAFLD防治新靶点。

丹红注射液对高脂血症大鼠肝脏AMPK/SREBP-1/ACC通路的影响

目的探讨丹红注射液(Danhong injection,DHI)对大鼠高脂血症的作用及机制。方法采用高脂饲料制备大鼠高脂血症模型,检测各组大鼠肝脏腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、p-ACC的蛋白表达水平。结果给予丹红注射液后,肝脏AMPK、SREBP-1和ACC的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p-ACC和p-AMPK的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论丹红注射液通过增强AMPK的活化,抑制SREBP-1和ACC的活性,促进脂肪酸氧化,减少脂质沉积,有效降低了高脂血症大鼠的血脂水平。

黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响

目的观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响。方法采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS(2.4 g·kg^(-1))灌胃给药,连续16周。测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)(Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)(Ser731)、蛋白激酶B(Akt)(Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P <0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P <0.05,P <0.01),AMPKα、n SREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P <0.05,P <0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P <0.05,P <0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P <0.05)。与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P <0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P <0.05,P <0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P <0.05,P <0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P <0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P <0.05)。结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗。

苦参碱对结肠癌肝转移小鼠SCAP/SREBP1信号通路的调节作用研究

[目的]研究苦参碱对结肠癌肝转移小鼠肿瘤抑制作用及对SCAP/SREBP1信号通路的调节作用。[方法]72只小鼠随机分为空白对照组、肝转移模型组、苦参碱低、中、高剂量组及卡培他滨组,每组12只,采用脾内注射结肠癌HCT116细胞法建立结肠癌肝转移小鼠模型,苦参碱低、中、高剂量组分别灌胃给予12.5、25、50 mg/kg的苦参碱,给药21 d,卡培他滨组按照267 mg/kg灌胃给予卡培他滨,测定小鼠肝脏质量及肝转移结节数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)、白介素(IL)-6水平,苏木精-伊红(HE)染色法检查肝组织病理学,实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA水平,免疫印迹(Western blot)法测定肿瘤组织SCAP、SREBP1水平。[结果]与空白对照组比较,肝转移模型组小鼠肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);与肝转移模型组比较,苦参碱各剂量组肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),随着苦参碱剂量的增加,各项指标降低更明显。[结论]苦参碱能够显著抑制结肠癌肝转移,缓解肝组织病理学改变,其机制可能与调节SCAP/SREBP1信号通路有关。

基于AMPK/SREBP-1c信号通路探讨益气健脾汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠糖脂代谢的影响

目的探讨益气健脾汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)信号通路的影响。方法将40只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、益气健脾汤组,每组10只。除空白组外,其他组均使用高脂饮食喂养建立非酒精性脂肪性肝病模型,造模周期为12周,从第9周开始,二甲双胍组给予二甲双胍100 mg/(kg·d)灌胃,益气健脾汤组给予益气健脾汤0.5 mL/d(生药浓度2.34 g/mL)灌胃,空白组和模型组给予蒸馏水0.5 mL/d灌胃。灌胃4周后,经腹主动脉采血,ELISA法检测血脂指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)]、肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);取肝脏,计算肝指数,使用HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理学改变,分别采用Western blot法和RT-qPCR法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c蛋白及mRNA表达情况。结果模型组小鼠血清TG、TC、FFA、ALT、AST、FPG、FINS水平及HOMA-IR、肝指数、NAS评分和油红O染色面积均明显高于空白组(P均<0.05),二甲双胍组和益气健脾汤组各指标均明显低于模型组(P<0.05)。HE染色及油红O染色显示,模型组小鼠肝组织可见肝细胞明显肿胀、气球样变性,大泡样脂滴形成并融合;二甲双胍组和益气健脾汤组肝细胞肿胀、气球样病变、脂肪变性均较模型组轻。各组小鼠肝组织中AMPK蛋白和mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05);与空白组比较,模型组小鼠p-AMPK蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,二甲双胍组及益气健脾汤组p-AMPK蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),并且益气健脾汤组SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论益气健脾汤可以通过调控AMPK/SREBP-1c信号通路改善非酒精性脂肪性肝病小鼠的胰岛素抵抗,抑制脂质合成,进而改善糖脂代谢。

苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白表达的影响

目的观察苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪中激活蛋白(SCAP)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)蛋白表达的影响。方法将高脂饲料喂养的雄性SPF级ZDF大鼠随机分为模型组、苦酸通调组、吡格列酮组,普通饲料喂养的雄性SPF级ZL大鼠为正常对照组,每组10只。苦酸通调组按照3.29 g/kg/d灌胃给药,吡格列酮组按照1.07 mg/kg/d灌胃给药,连续给药12周。经Western blot法检测各组大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组SCAP及SREBP-1c蛋白表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,苦酸通调方组及吡格列酮组可明显降低SCAP及SREBP-1c蛋白表达(P<0.01)。结论苦酸通调方可明显降低糖尿病大鼠腹部脂肪组织中SCAP及SREBP-1c蛋白的表达。

基于AMPK/SREBP-1通路研究狗肝菜多糖对高脂饮食大鼠糖脂代谢的影响

本研究探讨狗肝菜多糖(DCP)对高脂饮食大鼠糖脂代谢的作用及机制。实验采用高脂饲料喂养8周,将造模成功的40只大鼠随机均分为正常组、模型组、DCP剂量组(100、200mg/kg),每组10只;从第9周开始,DCP剂量组灌胃给药,正常组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,持续6周,处死,收集血样和肝脏。采用生化法检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、糖基化终产物-肽(AGE-P)和糖化血红蛋白(HbA1c)含量,及肝脏中TG和肝糖原含量;葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清空腹胰岛素(FINS)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);油红O染色观察肝组织脂肪沉积状况;蛋白免疫印迹实验(Westernblot)检测大鼠肝组织中胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测SREBP-1mRNA、AMPKmRNA水平。结果显示,DCP(100和200mg/kg)剂量组能显著下调TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、AGE-P和HbA1c含量和HOMA-IR,上调HDL-C和肝糖原含量,减少脂肪沉积物,同时明显上调p-AMPK水平,抑制肝组织SREBP-1蛋白及其mRNA的表达。结果表明,DCP调节大鼠糖脂代谢的机制可能与调控AMPK/SREBP-1通路有关。

化浊开郁方对非酒精性脂肪肝大鼠SREBP-1信号通路的影响

目的:研究化浊开郁方对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型大鼠的治疗效果及作用机理。方法:SD健康雄性大鼠60只按随机数字表法分为正常组、模型组、阳性药组、化浊开郁方低、中、高剂量组。高脂饲料12周建立NAFLD模型。阳性药组灌胃二甲双胍,化浊开郁方低、中、高剂量组灌胃化浊开郁方,连续给药8周。检测各组大鼠体质量、血脂相关指标,行肝组织HE染色和油红O染色。荧光定量PCR和Western blot法检测各组大鼠肝组织中固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)、ATP-柠檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACLY)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因及蛋白表达情况。结果:HE染色结果表明化浊开郁方能显著缓解NAFLD模型大鼠肝组织脂肪变性、气球样变和炎细胞浸润;油红O染色结果表明化浊开郁方可显著降低NAFLD模型大鼠肝脏中脂质含量。与正常组比较,模型组大鼠体质量及血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)显著升高(P<0.05,P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)显著降低(P<0.01),肝组织中SREBP-1、ACC、ACLY、FASN基因及蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,化浊开郁方中、高剂量组大鼠体质量及血清TC、TG、LDL-C显著降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C(P<0.05)显著升高,化浊开郁方低、中、高剂量组SREBP-1、ACC、ACLY、FASN基因及蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:化浊开郁方可通过降低SREBP-1信号通路相关基因及蛋白表达,减轻高脂饮食诱导的NAFLD模型大鼠肝脏中脂肪堆积,发挥治疗NAFLD的作用。

葡萄糖介导SCAP的N-糖基化为SREBP-1激活和肿瘤生长所必需

细胞代谢的改变是许多肿瘤的一个重要特征。在肿瘤细胞中,有氧糖酵解和脂质生成的增加能提供肿瘤细胞生长所需的能量和脂质。然而葡萄糖代谢和脂质生成通路之间的相互联系依然不清楚。本文的研究人员立足于此,探讨了葡萄糖代谢和脂质生成通路之间的联系,发现葡萄糖能通过胰岛素非依赖的通路来控制SCAP并促进脂质生成。研究表明,EGFR信号能增加肿瘤细胞对葡萄糖的摄取。

SREBP-1及其抑制剂调节肿瘤代谢的研究进展

脂类作为三大营养物质之一,参与能量的供应和储存、细胞的构建和作为活性分子参与细胞生命活动。脂类代谢异常是肿瘤细胞的重要特征之一,主要表现为脂肪酸从头合成及氧化代谢活跃,这些改变与肿瘤信号通路增强,相关代谢酶改变等密切相关。目前,脂代谢通路中相关酶及转录因子成为肿瘤治疗的潜在药物靶点。SREBP-1是细胞内调控脂类代谢的关键转录因子,主要调控胆固醇和脂肪酸合成中关键酶基因的表达,调节脂质新生。SREBP-1及其调控的脂肪酸合成途径通常在正常组织和细胞中的表达和活性较低,在肿瘤细胞中,SREBP-1被激活,其下游基因的表达也升高,在加快胞内脂肪酸和胆固醇合成的同时,还通过细胞内各信号通路影响肿瘤细胞脂代谢、糖代谢以及氨基酸代谢,为维持肿瘤细胞的增殖和转移提供额外的能源和物质。运用遗传和药理手段抑制肿瘤细胞中SREBP-1的表达和活化,可显著抑制体内和体外多种肿瘤细胞的增殖和迁移。因此,SREBP-1将是一个有潜力的针对肿瘤细胞脂代谢的肿瘤治疗靶标。本文综述了SREBP-1在肿瘤中的异常表达对肿瘤信号通路和物质代谢的影响以及SREBP-1抑制剂在肿瘤中的研究进展。

萆薢总皂苷调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂高胆固醇饲料+20%果糖水喂养16周,将造模组小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))、TSD高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃给药,连续8周。测定小鼠活动度、肝脏系数、肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及血清TC、TG、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色、油红O染色和透射电子显微镜观察肝组织和肝细胞病理变化、脂质蓄积情况和肝脏超微结构形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织AMP活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及其磷酸化形式的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠活动度明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显升高,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显降低,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组小鼠活动度明显增加(P<0.05),TSD各剂量组小鼠活动度无明显改变;TSD及阿托伐他汀组小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显降低,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显升高,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSD可能通过调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路减少脂质合成,从而改善小鼠NASH。

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏FXR/SREBP-1c表达的影响

目的:研究山楂叶总黄酮(TFHL)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织法尼酯衍生物受体(FXR)与固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)通路的影响,探讨其抗NAFLD的作用机制。方法:采用高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,TFHL高、中、低剂量组、模型组及正常组共5组,每组8只,药物干预后采用全自动生化仪检测肝组织病理学、血脂、血清转氨酶等,Real-time PCR及Western Blot分别检测肝组织中FXR、小异二聚体伴侣分子(SHP)、SREBP-1c、脂肪合成酶(FAS)的mRNA和蛋白表达。结果:应用TFHL干预后,大鼠肝组织病理学改善,肝组织甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)含量和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01);FXR mRNA和蛋白、SHP mRNA表达较模型组明显增加(P<0.05);SREBP-1c mRNA和蛋白、FAS mRNA表达较模型组明显减少(P<0.05)。结论:FXR表达下调及其靶基因SREBP-1c、FAS表达上调可能是NAFLD肝脏脂质沉积的分子基础;TFHL可能通过调控FXR/SREBP-1c通路改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂质代谢紊乱。

苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型中脂代谢及AMPK、ACC、SREBP-1蛋白的影响

目的观察苦酸通调方对胰岛素抵抗HepG2细胞内AMP活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羟化酶(ACC)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1信号分子的影响。方法通过0.25 mmol/L棕榈酸联合30 mmol/L高糖孵育24 h诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率确定给药浓度。荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)法检测细胞葡萄糖摄取能力,油红O染色观察细胞内脂质累积情况,三酰甘油试剂盒检测细胞内三酰甘油含量,Western印迹法检测细胞内AMPK、ACC、SREBP-1的蛋白表达水平。结果与模型组相比,苦酸通调方干预后,呈剂量依赖性增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖摄取量,减少细胞内三酰甘油含量(P<0.05),上调AMPK、ACC蛋白磷酸活化水平,减少SREBP-1蛋白表达(P<0.05)。结论苦酸通调方可能通过调控AMPK/ACC/SREBP-1信号转导过程,增强肝细胞葡萄糖摄取能力,减少细胞内三酰甘油蓄积,从而改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。

基于PERK-eIF2α通路探讨冠心康对LDLR-/-高脂血症小鼠血脂的调控机制

目的观察中药复方冠心康对LDLR-/-高脂血症小鼠肝脏PERK-eIF2α信号通路以及ATP结合盒转运子亚家族成员1(ABCA1)和固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的影响,探讨冠心康对高脂血症的调控机制。方法通过高脂饮食诱导30只LDLR-/-小鼠12周,构建高脂血症模型小鼠后随机分为模型组、冠心康组和辛伐他汀组,以10只同遗传背景的C57BL/6J小鼠为正常组。冠心康组以冠心康煎剂灌胃,辛伐他汀组以辛伐他汀水溶液进行灌胃。各组干预12周取材进行指标检测。生化仪检测血清血脂;HE染色观察肝脏病理形态变化;real-time PCR检测肝脏PERK、eIF2α、SREBP-2、ABCA1基因表达;Western blot法检测肝脏PERK、eIF2α磷酸化水平和SREBP-2、ABCA1蛋白表达。结果与模型组比较,冠心康组和辛伐他汀组的血清TG、TC下降(P<0.05),HDL-C升高(P<0.05),冠心康组和辛伐他汀组对蛋白PERK磷酸化以及SREBP-2水平有下调作用,对ABCA1有上调作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论冠心康通过影响SREBP-2和ABCA1的表达,可显著调节LDLR-/-高脂血症小鼠的血脂水平,从而维持肝脏胆固醇稳态的平衡,其作用机制可能与PERK-eIF2α信号通路有关。

降脂理肝汤对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型SREBP-1c通路的影响

目的:观察降脂理肝汤对油酸诱导的HepG2细胞中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)通路相关蛋白表达的影响,探讨降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝的可能机制。方法:采用油酸诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪肝细胞模型,降脂理肝汤4 mg/ml和阿托伐他汀0.005 mg/ml干预后,利用油红O染色定性定量检测细胞内脂质蓄积情况;试剂盒检测细胞内TG、TC和FFA水平;Western bolt观察和分析细胞p-SREBP-1c、SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达的变化。结果:油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积明显;细胞内TG、TC和FFA含量明显升高,细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平显著下调,SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达水平显著上调。降脂理肝汤和阿托伐他汀干预显著降低油酸诱导的HepG2细胞TG、TC和FFA含量。细胞SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达显著下调;此外,降脂理肝汤干预显著减少油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积,显著上调细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平。结论:降脂理肝汤可能通过抑制SREBP-1c通路干预NAFLD。

枳葛口服液基于AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路调控酒精性肝病大鼠糖脂代谢

目的从腺苷酸活化蛋白激酶/固醇调节元件结合蛋白-1/脂素-1 (AMPK/SREBP-1/Lipin-1)通路探索枳葛口服液对酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)大鼠糖脂代谢的影响机制。方法以单纯酒精灌胃法构建ALD大鼠模型,除正常组灌胃蒸馏水外,其余各组均给予酒精灌胃(1ml/100g),同时干预组灌胃不同剂量(高、中、低剂量)枳葛口服液,对照组灌胃解酒灵口服液,连续12周后取血测定各组大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)、空腹血糖(FBG)、胰岛素浓度(INS)含量;油红染色观察肝组织病理学变化,免疫荧光、免疫组化测定AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路蛋白表达。结果与正常组相比,模型组ALT、AST、TC、TG、FBG、INS含量均明显升高,胰岛素敏感性(IS)降低,胰岛素抵抗(IR)显著(P<0.01),肝组织脂肪变性明显,AMPK蛋白表达明显抑制,其下游因子SREBP-1及Lipin-1表达增加(P<0.01);与模型组相比,枳葛口服液各剂量组及对照组以上指标均有不同程度的改善,胰岛素敏感性增强,胰岛素抵抗减轻,肝脂质沉积减少,AMPK蛋白激活,其中高剂量组疗效最明显(P<0.01),中剂量组与对照组疗效相当(P>0.05),低剂量组改善不显著(P>0.05)。结论枳葛口服液可能通过AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路改善肝组织脂肪变性,增加肝脏对胰岛素的敏感性,减轻胰岛素抵抗,从而改善ALD大鼠糖脂代谢紊乱。