期刊文献+
共找到71篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
基于SCAR标记的坛紫菜“闽丰1号”多重PCR鉴定技术的建立 被引量:10
1
作者 王婷 徐燕 +2 位作者 谢潮添 纪德华 陈昌生 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期688-695,共8页
为建立坛紫菜"闽丰1号"(Z-26)品系的种质分子鉴定方法,采用300条RAPD引物对6个坛紫菜纯系进行标记扫描,从中筛选出"Z-26"品系的特异性随机扩增多态DNA(RAPD)标记9个,经克隆和测序,其中两个特异性标记成功转化为特异... 为建立坛紫菜"闽丰1号"(Z-26)品系的种质分子鉴定方法,采用300条RAPD引物对6个坛紫菜纯系进行标记扫描,从中筛选出"Z-26"品系的特异性随机扩增多态DNA(RAPD)标记9个,经克隆和测序,其中两个特异性标记成功转化为特异SCAR标记(Z26-600和Z26-360),标记片段大小分别为530 bp和242 bp。并进一步通过4个不同实验验证,确定Z26-600和Z26-360两个标记是坛紫菜"Z-26"品系的特异和稳定性标记。最后为进一步简化种质鉴定程序,建立更为便捷和准确的种质鉴定方法,经过条件优化,以此两个标记为基础建立了坛紫菜"Z-26"品系的多重PCR鉴定方法,该方法可以在一次PCR反应中同时鉴定两个特异性标记。 展开更多
关键词 坛紫菜 随机扩增多态DNA(RAPD) 序列特异扩增区域(scar) 多重pcr
下载PDF
玉米孢囊线虫SCAR-PCR快速分子检测技术 被引量:2
2
作者 崔江宽 任豪豪 +4 位作者 曹梦园 陈昆圆 周博 蒋士君 汤继华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第17期3334-3342,共9页
【目的】玉米孢囊线虫(Heterodera zeae)为孢囊线虫属定居型半内寄生线虫,可侵染多种禾本科作物的根部,玉米孢囊线虫的发生和传播扩散将会对我国玉米生产造成严重威胁。本研究旨在建立玉米孢囊线虫的快速分子检测体系,以期从近缘属种可... 【目的】玉米孢囊线虫(Heterodera zeae)为孢囊线虫属定居型半内寄生线虫,可侵染多种禾本科作物的根部,玉米孢囊线虫的发生和传播扩散将会对我国玉米生产造成严重威胁。本研究旨在建立玉米孢囊线虫的快速分子检测体系,以期从近缘属种可以准确地检测出玉米孢囊线虫,为玉米孢囊线虫的监测预警和防控打下技术基础。【方法】从我国河南、河北、甘肃、山东、湖南、广西和北京共收集20个玉米孢囊线虫近缘属种群体作为供试线虫;选取13条含有10个碱基的随机引物,采用RPAD技术对供试孢囊线虫进行多态性分析,筛出玉米孢囊线虫特异性RPAD片段,并将其转化为玉米孢囊线虫SCAR-PCR引物;采用PCR方法测试玉米孢囊线虫特异性引物的准确性以及检测技术体系的稳定性、灵敏度和实效性。【结果】通过RAPD比对分析,发现随机引物OPA03能在玉米孢囊线虫基因组DNA中扩增出一条468 bp的特异性片段;将该片段回收测序,根据片段序列信息,利用Primer 5.0设计一对特异性引物HzF1/HzR1;特异性检测结果表明,HzF1/HzR1仅在玉米孢囊线虫群体中扩增出大小为393 bp的特异性片段,其他5种16个孢囊群体(禾谷孢囊线虫、菲利普孢囊线虫、大豆孢囊线虫、旱稻孢囊线虫和甜菜孢囊线虫)和4个其他种群(水稻干尖线虫、马铃薯腐烂茎线虫、落选短体线虫和咖啡短体线虫)均没有扩增出目的条带;以含有玉米孢囊线虫的混合种群孢囊DNA为模板时,特异性引物HzF1/HzR1也能扩增出来单一明亮的393 bp的特异片段,而不含玉米孢囊线虫的混合种群不能扩增出该片段;该体系实现了玉米孢囊线虫准确、稳定的检测目的;对建立的玉米孢囊线虫快速检测技术体系灵敏度和实用范围测试,表明该检测体系对玉米孢囊线虫单个孢囊和单条幼虫均有灵敏的检测能力,检出值不低于1/2000个孢囊和1/80条2龄幼虫。【结论】本研究建立的玉米孢囊线虫SCAR-PCR快速分子检测技术,可用于玉米孢囊线虫单一样本和混合种群的快速检测,对玉米孢囊线虫的孢囊和2龄幼虫均有灵敏的检测能力,检测引物特异性强,检测方法便捷稳定,灵敏度高。 展开更多
关键词 玉米孢囊线虫 RAPD 特异性检测 scar-pcr
下载PDF
SCAR-PCR技术在药用植物研究中的应用 被引量:1
3
作者 高现朝 卢小蕾 陈随清 《河南中医学院学报》 2007年第6期86-88,共3页
关键词 scar-pcr 植物 育种
下载PDF
基于PCR技术的松材线虫分子检测技术研究进展
4
作者 姬党成 金奕亨 熊忠平 《湖北林业科技》 2024年第3期67-73,共7页
松材线虫是世界性检疫对象,并对我国林业造成了严重的危害。由于线虫个体较小且鉴定特征单一,利用传统的形态学鉴定较为困难,因此客观的分子生物学鉴定方法显得尤为重要。本研究总结了近些年主要的松材线虫PCR检测技术及其与拟松材线虫... 松材线虫是世界性检疫对象,并对我国林业造成了严重的危害。由于线虫个体较小且鉴定特征单一,利用传统的形态学鉴定较为困难,因此客观的分子生物学鉴定方法显得尤为重要。本研究总结了近些年主要的松材线虫PCR检测技术及其与拟松材线虫的区别,阐述了常规PCR技术、PCR-PFLPs检测技术、RAPD和SCAR分子标记技术以及荧光PCR技术等各类检测技术的特异性序列、片段大小和应用场景,并探讨了各检测技术的优缺点,为后期研究提供参考。 展开更多
关键词 松材线虫 pcr PFLP RAPD scar RT-pcr
下载PDF
北方春玉米区玉米穗腐病禾谷镰孢菌复合种SCAR类型测定 被引量:7
5
作者 董怀玉 王大为 +4 位作者 王丽娟 刘可杰 姜钰 徐秀德 左驰 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期23-28,共6页
利用禾谷镰孢菌特异性引物Fg16F/R,对分离自我国北方春玉米区玉米穗腐病籽粒病原禾谷镰孢菌复合种(Fus arium gramine arum clade)的45株菌株作SCAR类型测定,并通过基因序列测定解析。结果表明,我国北方玉米穗腐病籽粒中携带的病原禾谷... 利用禾谷镰孢菌特异性引物Fg16F/R,对分离自我国北方春玉米区玉米穗腐病籽粒病原禾谷镰孢菌复合种(Fus arium gramine arum clade)的45株菌株作SCAR类型测定,并通过基因序列测定解析。结果表明,我国北方玉米穗腐病籽粒中携带的病原禾谷镰孢菌复合种存在两种SCAR类型:即类型1(F.gramine arum)和类型5(F.as iaticum),分别占供试菌株的80%和20%,并以F.gramine arum为优势致病种类。 展开更多
关键词 玉米 禾谷镰孢菌复合种 scar类型 pcr
下载PDF
天敌对烟粉虱捕食作用的SCAR标记检测 被引量:16
6
作者 吕志创 张桂芬 +1 位作者 万方浩 邓国荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1167-1173,共7页
以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用... 以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用SCAR标记法获得了长度为347bp的烟粉虱特异性片段(GenBank登录号为AY841800),根据此片段的碱基序列设计烟粉虱特异引物1对TB-F/TB-R94585,其扩增片段约为240bp;种特异性检验结果表明,该引物只对烟粉虱具有扩增能力,对温室粉虱及其它相关种类不具有扩增效果;同时该引物对不同虫态、不同性别的烟粉虱具有同样的扩增效应。田间检测结果表明,同种天敌昆虫幼体捕食作用检出率高于成虫;在所检测的4类群9种捕食性天敌中,龟纹瓢虫幼虫、异色瓢虫幼虫、草蛉幼虫及东亚小花蝽成虫和蜘蛛对烟粉虱捕食作用的检出率高于50%。 展开更多
关键词 捕食作用 烟粉虱 scar标记 捕食性天敌 东亚小花蝽 特征序列 研究结果 序列设计 扩增片段 检验结果 种特异性 扩增效果 温室粉虱 检测结果 天敌昆虫 龟纹瓢虫 异色瓢虫 标记法 检出率 引物 幼虫 性别 虫态 成虫 棉田 田间
下载PDF
西花蓟马的SCAR分子检测技术 被引量:20
7
作者 孟祥钦 闵亮 +3 位作者 万方浩 周忠实 王文凯 张桂芬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期323-330,共8页
西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是一种世界性入侵害虫,寄主范围广,危害严重,2003年首次在我国发生危害,并有进一步扩散蔓延的趋势。针对蓟马类害虫虫体微小、形态相似,难以准确快速区分的问题,采用特征序列扩增区域(SCAR... 西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是一种世界性入侵害虫,寄主范围广,危害严重,2003年首次在我国发生危害,并有进一步扩散蔓延的趋势。针对蓟马类害虫虫体微小、形态相似,难以准确快速区分的问题,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记技术,以西花蓟马及与之同域发生的其他种类蓟马为对象,筛选出1对西花蓟马特异性引物(FOMF/FOMR),其扩增片段大小为320bp。种特异性检测结果显示,该对引物只对西花蓟马的基因组DNA具有扩增能力,对同域发生的花蓟马F.intonsa(Trybom)、禾花蓟马F.tenuicornis(Uzel)、烟蓟马Thripstabaci L.等41种蓟马不具有扩增效果。该对引物不仅对不同虫态的西花蓟马具有扩增能力,而且在西花蓟马发生地的寄主植物组织内亦检测到了其卵的存在。同时,该检测技术灵敏度高,对成虫的最低检出阈值为1/160头。本检测技术在口岸检疫以及花卉、蔬菜和种苗调运中的害虫检测和监测中具有重要意义。 展开更多
关键词 西花蓟马 RAPD-pcr scar 快速检测 特异扩增 检出阈值
下载PDF
稻蝗属特异性SCAR分子标记的鉴定 被引量:2
8
作者 张建珍 李大琪 +2 位作者 李涛 马恩波 郭亚平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期4834-4839,共6页
【目的】研究稻蝗属特异性DNA分子标记,为稻蝗属物种的分类鉴定提供快速有效的分子检测方法。【方法】基于稻蝗属物种及其近缘属种的大量RAPD-PCR结果,筛选出稻蝗属物种特异性的RAPD条带,对该特异RAPD条带进行克隆、测序。基于所测序列... 【目的】研究稻蝗属特异性DNA分子标记,为稻蝗属物种的分类鉴定提供快速有效的分子检测方法。【方法】基于稻蝗属物种及其近缘属种的大量RAPD-PCR结果,筛选出稻蝗属物种特异性的RAPD条带,对该特异RAPD条带进行克隆、测序。基于所测序列设计特异引物,以稻蝗属不同物种和蝗总科其它物种基因组DNA为模板进行PCR扩增。【结果】随机引物S823可在稻蝗属不同物种扩增出约650bp的RAPD条带,经对该条带的克隆、测序,发现在3个受试的稻蝗属物种中序列同源度达92.3%—96.6%,序列G+C含量大于15%,并富含大量的A、T重复区;基于已知序列设计的特异引物对稻蝗属7个物种可以扩增出目的条带(550bp),而对赤胫伪稻蝗及蝗总科其它物种均无扩增条带。【结论】鉴定了稻蝗属特异的RAPD条带,基于该条带序列设计的特异引物可用于稻蝗属物种的快速分子鉴定。 展开更多
关键词 稻蝗属 RAPD-pcr scar分子标记
下载PDF
分子信标实时PCR检测瘢痕相关p53基因SNP方法的建立 被引量:4
9
作者 廖农 高建华 +3 位作者 曾位森 鲁峰 罗深秋 陈春林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1875-1878,共4页
目的建立分子信标实时PCR检测病理性瘢痕相关p53基因第72密码子单核苷酸多态性的新方法。方法采集瘢痕疙瘩患者外周血28例,提取DNA并用分子信标PCR检测p53基因多态性。设计一对p53基因第72密码子单核苷酸多态性荧光分子信标探针,荧光定... 目的建立分子信标实时PCR检测病理性瘢痕相关p53基因第72密码子单核苷酸多态性的新方法。方法采集瘢痕疙瘩患者外周血28例,提取DNA并用分子信标PCR检测p53基因多态性。设计一对p53基因第72密码子单核苷酸多态性荧光分子信标探针,荧光定量PCR检测该位点单核苷酸(SNP),并与反向斑点杂交法,DNA直接测序等方法比较。结果定量荧光PCR荧光分子信标检测的结果与测序结果吻合率达到100%,高于反向斑点杂交法且简便快捷。结论分子信标实时PCR检测技术适合临床p53基因第72密码子单核苷酸多态性快速诊断。 展开更多
关键词 P53基因 单核苷酸多态性 分子信标定量pcr 瘢痕
下载PDF
烤后烟叶多重PCR反应体系的优化 被引量:1
10
作者 马林 郭苗苗 +5 位作者 苏东赢 孙九喆 王二彬 刘善宇 帖金鑫 贾梦珠 《郑州轻工业学院学报(自然科学版)》 CAS 2015年第2期30-33,共4页
以烤烟品种中烟100为模板,利用两对SCAR引物,采用单因素和正交优化试验,研究烤后烟叶多重PCR反应体系中各主要因素的影响情况,建立了适合烤后烟叶多重PCR扩增的最佳反应体系:20μL体系中含模板DNA 45 ng,Mg2+浓度2.50 mmol/L,d NTP浓度0... 以烤烟品种中烟100为模板,利用两对SCAR引物,采用单因素和正交优化试验,研究烤后烟叶多重PCR反应体系中各主要因素的影响情况,建立了适合烤后烟叶多重PCR扩增的最佳反应体系:20μL体系中含模板DNA 45 ng,Mg2+浓度2.50 mmol/L,d NTP浓度0.40 mmol/L,Taq酶用量4.00 U.该体系多重扩增条带清晰,可缩短鉴别时间,为利用多重PCR技术鉴别烤烟DNA指纹图谱奠定了基础. 展开更多
关键词 多重 pcr 反应体系 烤后烟叶
下载PDF
苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:17
11
作者 吴然 李君英 +2 位作者 邵建柱 孙建设 张鹤 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期150-155,共6页
【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能... 【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。 展开更多
关键词 苹果锈果类病毒(ASSVd) 检测 实时荧光pcr
下载PDF
荧光定量PCR测定整合素β_1在瘢痕中的表达
12
作者 范志宏 马进 尹健 《实用美容整形外科杂志》 2003年第5期275-277,共3页
目的 了解整合素 β1在增生性瘢痕中表达水平及在瘢痕增生中的作用。方法 应用荧光定量PCR测定整合素 β1在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达。结果 增生性瘢痕中整合素 β1表达明显高于正常皮肤 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 ... 目的 了解整合素 β1在增生性瘢痕中表达水平及在瘢痕增生中的作用。方法 应用荧光定量PCR测定整合素 β1在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达。结果 增生性瘢痕中整合素 β1表达明显高于正常皮肤 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 应用荧光定量PCR可对皮肤细胞内的整合素 β1作较准确的测定 ,其方法简便且敏感。增生性瘢痕与正常皮肤中整合素 展开更多
关键词 荧光定量pcr 整合素Β1 增生性瘢痕 皮肤细胞 皮肤纤维化
下载PDF
基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术 被引量:3
13
作者 麻文建 郑磊 +2 位作者 张静 刘洋 朱天辉 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期25-33,共9页
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片... 为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序。根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2。利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875bp的条带,灵敏度达到30fg/μL,是常规PCR的1000倍。验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌。 展开更多
关键词 栗疫菌 随机扩增多态性DNA技术 序列特异扩增区域 巢式pcr 分子检测
下载PDF
5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
14
作者 胡国君 范旭东 +4 位作者 李军 任芳 孙喜陈 张尊平 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第10期79-83,88,共6页
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNM... 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。 展开更多
关键词 苹果 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 苹果锈果类病毒 多重pcr
下载PDF
南苍术与苍术素相关的ISSR-SCAR分子标记筛选 被引量:2
15
作者 王明强 方彦 +2 位作者 杭悦宇 汤诗杰 薛佳宇 《江苏林业科技》 2017年第2期1-5,共5页
为了探索鉴别茅山地区野生南苍术中高苍术素含量植株的分子学方法,为快速筛选高苍术素含量的植株提供理论依据,在茅山地区野外采集30株南苍术,提取根茎中挥发油,根据液相色谱法测定的挥发油中苍术素含量,筛选出5个高含量和5个低含量的单... 为了探索鉴别茅山地区野生南苍术中高苍术素含量植株的分子学方法,为快速筛选高苍术素含量的植株提供理论依据,在茅山地区野外采集30株南苍术,提取根茎中挥发油,根据液相色谱法测定的挥发油中苍术素含量,筛选出5个高含量和5个低含量的单株,分别构建高含量和低含量植株DNA混合池,用于南苍术与苍术素相关的ISSR-SCAR标记研究。结果显示,在所选的29条ISSR引物中,引物ISSR-846(5’-CACACACACACACACART-3’)可以在苍术素含量高的南苍术中扩增出片段长度为948 bp的特异性条带。针对该特异性条带的序列,设计了正向引物(5’-AAGAGATCATTGGTATTAAAATTAAGTGTTATTAGTAG-3’)和反向引物(5’-CATAGATTCAATGGCAATCCTCACATCAACTTCAGATTCA-3’),验证发现,设计的ISSR-SCAR引物仅能在茅山南苍术高苍术素含量个体中扩增出条带,其他含量个体均未扩增出条带。认为本研究筛选的位点特异性引物,可用来快速鉴别高苍术素含量的南苍术植株。 展开更多
关键词 南苍术 苍术素 ISSR-scar 位点特异性pcr
下载PDF
利用内标为基础的苹果锈果类病毒RT-PCR检测技术 被引量:5
16
作者 吕运霞 李楠 +6 位作者 王亚迪 王雪静 杨金凤 胡同乐 王树桐 王亚南 曹克强 《河北林果研究》 2017年第1期51-56,共6页
为开发准确、灵敏的苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)RT-PCR检测方法,以田间染病苹果组织为试材,提取高质量总RNA为模板,在常规RT-PCR检测体系中引入苹果线粒体nad5基因作为内标基因,对RT-PCR反应体系和程序进行优化,并测... 为开发准确、灵敏的苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)RT-PCR检测方法,以田间染病苹果组织为试材,提取高质量总RNA为模板,在常规RT-PCR检测体系中引入苹果线粒体nad5基因作为内标基因,对RT-PCR反应体系和程序进行优化,并测定其灵敏度和稳定性,最后利用优化的检测体系确定苹果果实着色期最佳检测部位。结果表明:以RNA提取改良法提取总RNA为模板合成cDNA后,进行PCR扩增,优化后的PCR体系(25μL)中cDNA模板2μL、ASSVd(20pmol/μL)正反向引物各1.0μL,nad5(20pmol/μL)正反向引物各0.1μL;扩增程序中退火温度为60.9℃,循环次数为35次;检测灵敏度为37.5ng新鲜样本;果实着色期,染病植株的幼嫩叶片、1a生枝的韧皮部和木质部、果实及部分种子样本均能检测到病毒,最佳检测部位为幼嫩韧皮部。研究结果可以为ASSVd高效、快速、准确的检测提供可靠方法,并为田间病害诊断及无毒苗木繁育提供依据和借鉴。 展开更多
关键词 苹果锈果类病毒 RT-pcr nad5 分布部位
下载PDF
Species-specific SCAR markers for authentication of Sinocalycanthus chinensis 被引量:2
17
作者 YE Qian QIU Ying-xiong +4 位作者 QUO Yan-qi CHEN Jian-xin YANG Shu-zhen ZHAO Ming-shui FU Cheng-xin 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2006年第11期868-872,共5页
Sinocalycanthus chmensis, an endangered species endemic to China, is cultivated as an omamental landscape tree in China. However, S. chinensis, Chimonanthus species and Calycanthusfloridus are difficult to be distingu... Sinocalycanthus chmensis, an endangered species endemic to China, is cultivated as an omamental landscape tree in China. However, S. chinensis, Chimonanthus species and Calycanthusfloridus are difficult to be distinguished in seedling market because of their similar morphological characters. In this study, ISSR (inter-simple sequence repeats) were applied to detect S. chinensis from its closely related species. A unique 748-bp band was found in all accessions of S. chinensis. SCAR (sequence characterized amplified regions) markers were created by cloning and sequencing the specific band, and designing a pair of primers to amplify the band of 748 bp. Diagnostic PCRs were performed using the primer pair with the total DNAs ofS. chinensis, Chimonanthus species and C. floridus as templates, with only S. chinensis being able to be amplified. This amplification is not only rapid (results can be obtained in less than 3 h), but is also easy to perform. Hence it is a feasible method for identifying S. chmensis in seedling market. 展开更多
关键词 AUTHENTICATION Diagnostic pcrs ISSR scar Sinocalycanthus chinensis Specie-specific
下载PDF
PCR-based molecular markers linked to the leaf rust resistance gene Lr19 in different bread wheat cultivars 被引量:1
18
作者 I. M. Huseynova F. B. Guliyeva +1 位作者 S. M. Rustamova Jalal A. Aliyev 《Advances in Biological Chemistry》 2013年第1期153-158,共6页
61 varieties of wheat collected in the gene fund of the Research Institute of Crop Husbandry were screened using SCAR-markers associated with the gene of resistance to brown leaf rust, Lr19. As a result of PCR analysi... 61 varieties of wheat collected in the gene fund of the Research Institute of Crop Husbandry were screened using SCAR-markers associated with the gene of resistance to brown leaf rust, Lr19. As a result of PCR analysis using SCS123 marker the 737 bp locus was detected in 48 genotypes. The expected fragment of the 688 bp was detected in 53 genotypes using the SCS253 marker. The results obtained using both markers indicate that the Lr19 gene is present on 7D chromosomes of 45 genotypes. The existence of the Lr19 gene has not been proven only for 5 from the 61 analyzed wheat genotypes. 展开更多
关键词 Wheat Brown Leaf RUST LR19 Gene scar-Markers pcr Analysis
下载PDF
烤烟品种的多重PCR技术标记鉴别
19
作者 贾梦珠 孙九喆 +7 位作者 苏东赢 杨金初 王二彬 许衡 王永超 王君婷 孟丹丹 马林 《轻工学报》 CAS 2017年第3期51-57,共7页
以12份烤烟品种为模板,针对6对SCAR引物进行引物比例和退火温度的条件优化,采用多重PCR技术,建立了12份烤烟品种的多重PCR指纹图谱和鉴别路线.结果表明,同普通PCR相比,多重PCR具有高效、快速、节约时间、成本低的优点,6对SCAR引物稳定... 以12份烤烟品种为模板,针对6对SCAR引物进行引物比例和退火温度的条件优化,采用多重PCR技术,建立了12份烤烟品种的多重PCR指纹图谱和鉴别路线.结果表明,同普通PCR相比,多重PCR具有高效、快速、节约时间、成本低的优点,6对SCAR引物稳定性好、条带特异性强,能准确区分12份烤烟品种. 展开更多
关键词 多重pcr技术 scar标记 烤烟品种鉴别 指纹图谱
下载PDF
Universally Primed PCR (UP-PCR) and its applications for taxonomy in Trichoderma
20
作者 Mette Lübeck 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期463-463,共1页
Universally Primed PCR (UP-PCR) is a PCR fingerprinting method that has demonstrated its applicability in different aspects of mycology. These applications constitute analysis of genome structures, identification of s... Universally Primed PCR (UP-PCR) is a PCR fingerprinting method that has demonstrated its applicability in different aspects of mycology. These applications constitute analysis of genome structures, identification of species, analysis of population and species diversity, revealing of genetic relatedness at infra-and inter-species level, and identification of UP-PCR markers at different taxonomic levels (strain, group and/or species) . A further development of the UP-PCR technique is an UP-PCR product cross hybridisation assay that facilitates investigation of sequence similarity (homology) of UP-PCR products and grouping of strains into UP-PCR hybridisation groups. This separates the strains into entities with high genetic similarity (DNA homology) . UP-PCR has been used as an aid in taxonomy and species delineation, and to monitor biocontrol strains following their release into the environment by fingerprint characterisation of pure cultures and through direct detection in soil by amplification of UP-PCR-derived SCAR markers. The technique has been applied to Trichoderma strains in particularly with the aims of strain recognition and classification. 展开更多
关键词 木霉属 分类学 真菌 UP-pcr 指纹法 菌株 监测
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部