黄芩苷对人舌鳞癌细胞SCC15的抑制作用

目的探讨黄芩苷对人舌鳞癌细胞株SCC15细胞的抑制作用及可能机制,为舌鳞癌的防治提供新的思路及实验基础。方法单纯DMEM培养液培养的SCC15细胞为对照组,加入20 mg/mL黄芩苷溶液培养的SCC15细胞为黄芩苷组。2组细胞分别以划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的改变,流式细胞术检测细胞周期的改变,Western blotting检测细胞信号转导与转录激活子3(signal transduction and transcrip?tion activator 3,STAT3)磷酸化水平的差异。结果与对照组比较,划痕实验及Transwell迁移实验结果显示黄芩苷组细胞迁移能力降低(t=4.927,P=0.008);流式细胞术结果显示黄芩苷组G0/G1期增高(t=9.893,P=0.001),S期降低(t=8.528,P=0.001),G2/M期降低(t=3.550,P=0.024);Western blotting结果显示黄芩苷组SCC15细胞STAT3蛋白磷酸化水平下降(t=8.262,P=0.001)。结论黄芩苷对人舌鳞癌细胞SCC15具有抑制作用,其机制可能与降低STAT3通路磷酸化活性有关。

黄芩素对SCC15口腔癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响

目的探讨黄芩素(BAI)对人口腔癌细胞株SCC15增殖和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性的影响。方法以噻唑蓝比色法(MTT)检测BAI在不同浓度(终浓度的50、100、200μg/ml)不同作用时间(0、12、24、36、48、60、72 h)条件下对SCC15口腔癌细胞增殖活性的影响。比色法检测Caspase-3活性的变化,通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 BAI在体外对SCC15细胞株具有直接抑制增殖作用,并呈时间和剂量依赖性,对SCC15细胞的IC50是153.20μg/ml。不同浓度BAI处理细胞后,SCC15细胞被阻止于G0/G1期,抑制SCC15细胞分裂而降低其增殖能力。结论 BAI可对人SCC15口腔癌细胞株的凋亡具有促进作用,并且促凋亡作用呈时间-剂量依赖性。BAI体外具有增加He La细胞Caspase-3活性的作用,能明显上调SCC15细胞中Caspase-3活性,且呈时间与浓度依赖性。

miR-26b对口腔鳞癌细胞SCC15肿瘤干性的抑制作用

目的分析miR-26b对人口腔鳞癌细胞SCC15肿瘤干性的影响及潜在机制。方法比较5例口腔癌患者癌组织和癌旁组织miR-26b表达差异;以miR-26b模拟物及抑制物瞬染SCC15细胞,Sphere实验检测癌细胞体外成球能力、real-time PCR检测干性基因(Nanog/OCT4)表达,Western Blot检测上皮间质转化标志物E-钙粘蛋白水平。结果 5例患者癌组织miR-26b水平均低于癌旁组织(P <0.05)。过表达miR-26b使SCC15细胞成球率下降(P <0.05),Nanog及OCT4表达下调(P <0.05),E-钙粘蛋白水平升高(P <0.05);反之抑表达miR-26b后,SCC15成球率上升(P <0.05),Nanog及OCT4表达上升(P <0.05),E-钙粘蛋白水平下降(P <0.05)。结论 miR-26b能降低SCC15细胞的肿瘤干性,其机制可能与miR-26b抑制细胞的上皮间质转化有关。

黄芩素体外诱导人SCC15口腔癌细胞增殖及对凋亡的影响

目的探讨黄芩素(BAI)体外诱导人SCC15口腔鳞状癌细胞增殖及对凋亡的影响。方法将不同浓度的BAI(终浓度50,100,200μg/ml)作用于SCC15口腔癌细胞,72 h后以噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞活力,利用荧光染色法计算细胞凋亡指数,琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡时DNA的片段化程度。结果 BAI在体外对SCC15细胞株具有直接抑制增殖作用,并呈时间和剂量依赖性,对SCC15细胞的IC50是177.36μg/ml。不同浓度BAI处理细胞后,琼脂糖电泳出现明显的"梯状"条带,随着药物浓度的增加,DNA梯状条带越来越明显,存在剂量依赖性,核内DNA已断裂成规律大小片段,出现规律的DNA降解,表明BAI诱导细胞发生了凋亡。结论 BAI可诱导人口腔癌细胞SCC15的凋亡,并且促凋亡作用呈时间-剂量依赖性。

人DLL1真核表达质粒的构建及过表达DLL1抑制人口腔鳞癌细胞SCC15的增殖

目的:构建人全长DLL1基因真核表达质粒及过表达DLL1对人口腔鳞癌细胞增殖的影响.方法:PCR扩增人全长DLL1基因,酶切和测序鉴定后克隆至真核表达载体pCMV-Tag4并构建真核重组质粒DLL1/pC MVTag4,瞬时转染HEK293T细胞并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鉴定DLL1的表达;进一步检测DLL1在SCC15等3株人口腔鳞癌细胞中的表达;DLL1/pCMV-Tag4瞬时转染SCC15细胞,Q-PCR和Western blot检测过表达及MTT检测DLL1过表达对细胞SCC15增殖的影响.结果:真核重组质粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T细胞中成功表达;DLL1在口腔鳞癌细胞中的表达高于正常口腔细胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15细胞中获得表达且过表达DLL1抑制SCC15细胞的增殖.结论:人全长DLL1分子在HEK293T及SCC15细胞中获得表达,过表达DLL1抑制口腔鳞癌细胞SCC15的增殖.

黄芪总苷对SCC15口腔癌细胞活力的影响及机制

目的探讨黄芪总苷对SCC15口腔鳞状癌细胞活力的抑制作用及机制。方法将不同浓度黄芪总苷(100,200,400μg/ml)作用于SCC15口腔癌细胞,72 h后以噻唑蓝比色法检测各组细胞活力,Western blot法检测细胞凋亡抑制蛋白Survivin的表达。结果黄芪总苷可剂量依赖性地抑制SCC15口腔癌细胞活力。不同浓度黄芪总苷均可抑制Survivin在SCC15细胞中的表达,Survivin的表达随黄芪总苷浓度增加而减少。结论黄芪总苷可能通过抑制Survivin表达而降低SCC15口腔癌细胞活力。

DZNep对口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的:本研究旨在检测DZNep对口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15增殖性、侵袭性和迁移性的抑制作用。方法:通过MTT实验检测DZNep对口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15增殖性的抑制作用并确定药物最适浓度;通过Transwell侵袭实验检测DZNep对口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15侵袭性的抑制作用;通过Transwell迁移实验检测DZNep对口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15迁移性的抑制作用。结果:与对照组比较,DZNep组的口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15增殖活性明显降低(P<0.05),其半抑制浓度(IC50)为1000 nmol·L^-1;DZNep组的口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15的细胞侵袭和迁移比例也明显降低(P<0.01)。结论:DZNep能有效抑制口腔鳞癌细胞系Tca8113和SCC15的增殖、侵袭和迁移,有望成为口腔鳞状细胞癌靶点治疗的新药物。

miR-509通过调控二磷酸腺苷-核糖基化因子6对人舌鳞状细胞癌SCC15细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-509对人舌鳞状细胞癌SCC15细胞生物学行为的影响及对二磷酸腺苷-核糖基化因子6(adenosine diphosphate-ribosylation factor 6, ARF6)信号通路的调控作用。方法取对数生长期SCC15细胞,随机分为miR-509 mimic组(转染miR-509 mimic)、miR-509 inhibitor组(转染miR-509 inhibitor)、mimic NC组(转染mimic NC)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、对照组(仅转染脂质体)。转染24 h, 5组采用实时荧光定量PCR法检测miR-509相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Transwell小室试验检测细胞侵袭能力,采用Western blot法检测ARF6蛋白相对表达量。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-509与ARF6的靶向关系。结果 miR-509 mimic组miR-509相对表达量(6.17±0.25)、细胞凋亡率[(12.46±0.37)%]均高于对照组[4.28±0.36、(3.08±0.30)%]和mimic NC组[4.25±0.34、(2.98±0.41)%](P<0.05),侵袭细胞数[(8.82±2.07)个]少于对照组[(27.40±3.26)个]和mimic NC组[(28.36±3.14)个](P<0.05),ARF6蛋白相对表达量(0.27±0.05)低于对照组(0.62±0.05)和mimic NC组(0.64±0.04)(P<0.05);miR-509 inhibitor组miR-509相对表达量(2.50±0.28)、细胞凋亡率[(2.16±0.45)%]均低于对照组和inhibitor NC组[4.26±0.33、(3.06±0.24)%](P<0.05),侵袭细胞数[(125.26±3.36)个]多于对照组和inhibitor NC组[(28.93±2.85)个](P<0.05),ARF6蛋白相对表达量(0.86±0.06)高于对照组和inhibitor NC组(0.68±0.06)(P<0.05);miR-509 inhibitor组miR-509相对表达量、细胞凋亡率均低于miR-509 mimic组(P<0.05),侵袭细胞数多于miR-509 mimic组(P<0.05),ARF6蛋白相对表达量高于miR-509 mimic组(P<0.05);对照组、mimic NC组和inhibitor NC组miR-509相对表达量、细胞凋亡率、侵袭细胞数、ARF6蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ARF6 WT+miR-509 mimic组荧光素酶活性(0.52±0.17)低于ARF6 WT+mimic NC组(1.55±0.22)(t=6.417,P<0.001);ARF6 MUT+miR-509 mimic组荧光素酶活性(1.53±0.26)与ARF6 MUT+mimic NC组(1.56±0.25)比较差异无统计学意义(t=0.144,P=0.892)。结论 miR-509上调可促进人舌鳞状细胞癌SCC15细胞凋亡、抑制其侵袭,可能通过靶向抑制ARF6蛋白表达发挥作用。