SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的基因定位

目的了解SCCmec相关的psm-mec基因在血液来源人葡萄球菌中的基因定位特征,为深入研究psm-mec基因在人葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床血培养分离的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA基因和psm-mec基因,多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,PCR扩增mecR1/psm-mec基因与psm-mec/xylR基因间隔序列及fudoh基因,探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。结果 PCR检测显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,psm-mec基因的检出率为47.6%,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌,未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,10株psm-mec基因阳性菌株中,2株属典型SCCmecⅢ型,5株属类SCCmecⅢ型,3株属SCCmec新型别。基因间隔序列和fudoh基因检测显示,10株psm-mec基因阳性人葡萄球菌中,mecR1/psm-mec基因和psm-mec/xylR基因及fudoh基因均阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec基因广泛存在于血液来源的人葡萄球菌中,主要分布在典型SCCmecⅢ型、类SCCmecⅢ型和SCCmec新型别上,定位于mecR1基因与xylR基因之间。

胆汁分离携带Panton valentin杀白细胞基因金黄色葡萄球菌流行情况及SCCmec分型

目的调查消化内科患者胆汁分离携带Panton valentin杀白细胞基因的金黄色葡萄球菌流行情况及SCCmec分型。方法收集浙江大学医学院附属第一医院2008年7月～2013年7月消化内科患者815名分离的金黄色葡萄球菌75株，采用VITEK2COMPACT全自动微生物分析仪分析其药敏结果，采用PCR检测PVL基因，采用多重PCR对所有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec分型。结果消化内科金黄色葡萄球菌的感染率为9．2％，25例为社区获得性感染，其PVL阳性菌株16例，占64．0％；50例为医院获得性感染，其中PVL阳性菌株11例，占22％。SCC分型显示以SCCmecnl型为主，占43．3％（13／30），SCCmecⅡ型2株，SCCmec1V型10株，未检出SCCmecI型和V型。16株PVL基因阳性MRSA菌株中SCCmecnl型有9株（56．25％），IV型有6株（37．5％），另外有1株未成功分型。结论消化内科胆汁分离的金黄色葡萄球菌PVL基因携带及分子流行情况显示主要以SCCmec11I型为主，携带PVL基因率较高，存在区域性流行的特点。

牛源金黄色葡萄球菌耐药性及甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株演化相关性研究

为研究牛源金黄色葡萄球菌耐药性以及甲氧西林敏感(MSSA)和耐甲氧西林(MRSA)菌携带的耐药基因、MRSA的SCCmec基因型,揭示牛源MSSA与MRSA之间的演化相关性和MRSA起源和扩散途径,对2009年以来中国五省区不同牛场分离的54株金黄色葡萄球菌进行了药敏试验。对确定的12株MSSA和MRSA进行了耐药基因检测、SCCmec基因型分型和多位点测序分型(MLST)研究。54株菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素的耐药菌株分别为88.8%、81.5%、88.9%、90.7%、92.6%、94.4%、79.6%、63.0%和70.4%。其中,对所测10种抗生素完全耐药的占5.6%,对5种以上耐药的占85.2%,6株(11.1%)对头孢西丁耐药。12株MSSA和MRSA菌株的药敏和耐药基因检测结果显示,3株MRSA对10种抗生素耐药;6株MSSA菌中,新疆分离株对2～4种抗生素耐药,其它省区分离株对7种以上抗菌素耐药。12株MSSA和MRSA菌均检出ermC和tetK基因;6株MRSA中均检出aac(6′)/aph(2″)基因,5株检出tetM基因,4株检出aph(3′)-Ⅲ基因;6株MSSA均未检出aac(6′)/aph(2″)和aph(3′)-Ⅲ,4株检出tetM基因。用多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型显示,5株为SCCmec IV,1株未能分型;12株菌的MLST分型发现,所有菌株分为ST50、ST965、ST6、ST97和ST9序列型。经eBURST v3分析,MRSA分布在CC7、CC4、CC21和CC9四个克隆复合群(CCs)中,MSSA分布在CC7和CC32克隆复合群中。以上研究表明,我国牛源金黄色葡萄球菌不仅耐药严重,且表现多重耐药;MRSA基因型以SCCmec IV为主。对牛源SCCmec IV型MRSA与同型人源MRSA的耐药谱分析发现有较大差异,推测位于质粒或转座子上的耐药基因可能插入到金黄色葡萄球菌基因组中,导致耐药基因在不同菌株间传播。根据ST97中有MSSA和MRSA以及牛源MRSA与人源MRSA的MLST比较,确认我国牛源MRSA是在抗生素的选择压力下由来源于不同克隆复合群的MSSA获得SCCmecIV而产生,推测同一克隆株MRSA的扩散并不是MRSA大范围出现的主要原因。

tst和pvl基因阳性金黄色葡萄球菌流行情况及分子特征

目的了解中毒性休克综合征毒素-1的tst基因和杀白细胞素的pvl基因阳性金黄色葡萄球菌(金葡菌)流行情况及其附属基因调节子(agr)和葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)型别。方法收集上海市及浙江省共7所医院的916株金葡菌,聚合酶链反应(PCR)检测tst、pvl、mec A和mec C基因,并对tst或pvl基因阳性菌株作agr及SCCmec(针对甲氧西林耐药金葡菌,MRSA)遗传学分型。结果 916株金葡菌中tst阳性208株,阳性率22.7%;pvl阳性35株,阳性率3.8%;mec A阳性665株(MRSA),未检测到mec C基因。在665株MRSA中,tst阳性198株(29.8%),agr和SCCmec分型均以2/Ⅱ型为主,分别占97.0%和94.4%;pvl阳性14株(2.1%),agr分型以1型(85.7%)为主,SCCmec分型以Ⅲ型(42.9%)和Ⅳa型(28.6%)为主。在251株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)中,tst阳性10株(4.0%);pvl阳性21株(8.4%)。tst阳性率在MRSA菌株中较MSSA中高,而pvl检出率则在MSSA菌株中较高,且浙江地区MRSA中pvl的阳性率高于上海菌株,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 tst基因在MRSA菌株中阳性率较MSSA高;pvl阳性率相对较低,但因其与某些严重的金葡菌感染相关,临床应予以关注。

多重PCR系统的建立及其在社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌中PVL噬菌体分型中的应用

目的从基因组型和表型两方面解析从医院环境中分离出的社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA),对携带杀白细胞素(PVL)基因的MRSA中的PVL溶原噬菌体进行分型。方法聚合酶链式反应(PCR)解析菌株所携带的SCCmec基因岛型及PVL毒素基因;凝固酶试验测定菌株的凝固酶型;设计8组PCR反应组合检测PVL溶原噬菌体型。结果 36株菌株所携带的SCCmec基因岛分型多样化。携带Ⅳc型SCCmec的菌株占多数,为16株(44.4%),其次为携带Ⅱ型SCCmec的菌株,为10株(27.8%)。各菌株所携带的SCCmec型别与菌株的凝固酶分型高度一致。经多重PCR检测,6株PVL阳性菌株所携带的PVL噬菌体型分别为φ108PVL型(3株),φ2958PVL型(1株)和φSa2mw型(2株)。结论院内分离的社区型MRSA的基因型和表型多样化,PVL噬菌体分型的多重PCR系统具有可应用性,应用此系统对鉴别具有异构六角形头部和伸长形头部的PVL溶原噬菌体有意义。

某院ICU医院获得性肺炎患者痰分离MRSA耐药基因和pvl基因携带情况

目的了解医院获得性肺炎患者痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因和毒力因子pvl基因携带情况。方法对来源于某院重症监护病房(ICU)医院获得性肺炎患者痰中的46株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)检测细菌耐药基因(mecA、aacA-D、tetK、tet M、msrA、msrB、ermA、ermC、vatA、vatB、vatC、femB和linA)和毒力因子pvl基因,并以PCR法分析MRSA菌株SCCmec型别。结果 46株MRSA中,耐药基因mecA、aacA-D、tetK、msrA、ermA、ermC、femB和linA的检出率分别为100%、54.35%、36.96%、13.04%、36.96%、52.17%、71.74%和10.87%,所有菌株均未检出tet M、msrB、vatA、vatB和vatC基因;毒力基因pvl携带率为65.22%。46株MRSA共检出4种SCCmec基因型,其中SCCmecⅡ型、Ⅲ型、IVc型、V型分别为26.09%、52.17%、2.17%和2.17%。结论医院获得性肺炎患者痰中MRSA携带多种耐药基因,且毒力基因pvl携带率较高,SCCmec基因型以Ⅲ型为主,临床医务人员对此情况应高度重视。

金黄色葡萄球菌药敏表型和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型

【摘要】 目的 探讨金黄色葡萄球菌的耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型情况。方法 采取纸片琼脂扩散法对500株金黄色葡萄球菌进行药敏检测和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的测定,并采取多聚酶链反应（PCR）法进行SCCmec基因分型检测。结果 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率为40.0%（200/500）,而且对克林霉素和复方磺胺甲噁唑以及四环素具有较高的耐药率,其中对庆大霉素和喹诺酮类药物的耐药率较低,同时对克林霉素和β-内酰胺类的药物呈现完全耐药,其他的则表现多重的耐药性,并未发现有耐万古霉素的菌株;通过对MRSA的SCCmec基因分型,其中主要表现为SCCmecⅢ型和 SCCmecⅣ型以及SCCmecⅤ型,另外有7株未分型。结论 在金黄色葡萄球菌的分离中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表现多重耐药性,其SCCmec基因分型主要表现为SCCmecⅢ型和SCCmecⅣ型以及SCCmecⅤ型。

金黄色葡萄球菌SCCmec类型与侵袭力的相关性研究

目的 探讨金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒（Staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec）类型与金黄色葡萄球菌侵袭力的关系,为进一步预防和控制金黄色葡萄球菌感染提供科学依据.方法 收集甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）和5种不同SCCmec类型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株,定量侵袭人Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）2 h后,用Triton-X 100裂解细胞,收集并涂板培养细胞内细菌,计数细菌克隆形成单位.以细胞内细菌量与原始细菌量的比值作为衡量该菌株侵袭力的指标.结果 ①MSSA和MRSA整体侵袭率比较差异无统计学意义;②Ⅱ型SCCmec金黄色葡萄球菌侵袭率高于Ⅲ型、Ⅳ型和MSSA（P值分别为0.021、0.005、0.016）.结论 SCCmec类型影响但不决定金黄色葡萄球菌的侵袭力.

MRSA SCCmecⅢ型ccr基因在抗生素压力下的差异表达

目的分析不同种类、不同浓度抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)染色体mec盒(SCCmec)Ⅲ型ccr基因表达的影响。方法将临床分离株MRSA 62分别在不含抗生素及含有氨苄西林、替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的培养基中培养,每种抗生素分别设立20μg/ml(高),2μg/ml(中)和0.2μg/ml(低)3种浓度。提取细菌总RNA,采用Real-time PCR检测MRSA ccrA、ccrB、ccrC基因表达水平。结果在中等浓度的氨苄西林中MRSA 62ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。高浓度的万古霉素可杀死细菌,而低浓度万古霉素能诱导ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。高浓度的替考拉宁能杀死细菌,而中等浓度时诱导ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。中等浓度利奈唑胺ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。结论不同种类及浓度抗生素压力对MRSA SCCmecⅢ型ccr基因表达水平的影响不同,ccr基因的表达直接影响到耐药基因的整合与剪切表达水平,这可能是MRSA SCCmecⅢ型对抗生素耐药的机制之一。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子流行病学研究

目的研究某院临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特点,为临床预防、MRSA流行监测,制定防治方案等提供科学依据。方法采用药敏纸片法和PCR技术对从住院患者、医务人员及环境分离的MRSA进行表型、基因型鉴定,检测其杀白细胞毒素(pvl)基因,并进一步对mecA基因阳性标本进行SCCmec基因分型。结果从1352份标本中分离出108株金黄色葡萄球菌,MRSA为54株,主要分离于烧伤科占77.78%;根据SCCmec基因分型结果,54株MRSA以Ⅲ型为主,占68.52%,pvl基因均为阴性。结论某院MRSA临床检出率与2008年监测的数据相仿,流行情况以Ⅲ型SCCmec基因型为主,提示医院MRSA临床株与环境株之间MRSA可能具有同源性,临床必须采取严格措施加以控制。

我国猪源甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的分离与分子分型研究

目的:近期研究发现,养殖生猪是甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的重要宿主,本研究旨在阐明MRSA在我国养殖生猪中的分布和遗传学特征。方法:从我国河北、陕西、湖北和四川的生猪养殖场或屠宰场采集生猪鼻咽部拭子进行MRSA分离和鉴定,并对分离株进行了表型和基因型的分析。结果:从569份生猪鼻咽部拭子中分离出58株MRSA,这些菌株的耐药表型主要有2种:CIP-CLI-ERY-FOX-GEN-TET-CHL和CIP-CLI-ERY-FOX-GEN-TET;所有菌株均属于spa t899和SCCmecⅢ型,未检出PVL基因。经多位点测序分型分析后发现,我国猪源MRSA菌株以ST9型为主;脉冲场电泳(Pulssed Gel Electrophoresis,PFGE)分型分析显示,猪源MRSA菌株中存在优势的PFGE基因型和基因簇。结论:在我国养殖生猪中广泛存在ST9-spa899-SCCmecⅢ型MRSA菌株,这些菌株可能成为社区MRSA感染的新来源。

风心病术后获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染机制研究

目的分析风心病患者术后感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因型别及耐药情况,为不同感染型别耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的治疗提供指导。方法收集2015年1-12月风心病术后患者临床资料,对从患者临床标本中分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行SCCmec基因检测,K-B法分析不同基因型别菌株的耐药情况。结果63株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中,59株检测到SCCmecⅢ型基因,4株检测到SCCmecⅡ型基因。下呼吸道痰液标本分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌39株,其中携带SCCmecⅢ型基因37株,占94.87%,携带SCCmecⅡ型基因2株,占5.13%;血液标本分离18株,其中携带SCCmecⅢ型基因16株,占88.88%,携带SCCmecⅡ型基因2株,占11.12%;腹水以及伤口分泌物标本分别分离4和2株,均携带SCCmecⅢ型基因。携带SCCmecⅢ型基因的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对氨苄西林、左氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、氯霉素和利福平等的耐药率分别为100.00%、49.15%、37.29%、33.90%、10.17%和8.47%,对万古霉素和利奈唑胺仍然敏感;携带SCCmecⅡ型基因的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对氨苄西林、左氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、利福平的耐药率分别为100.00%、50.00%、25.00%、25.00%、25.00%,对氯霉素、万古霉素和利奈唑胺仍然敏感。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株基因型以SCCmecⅢ型为主,抗感染治疗时应首选万古霉素和利奈唑胺。