温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘大鼠肠道动力的影响

目的 基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘(STC)大鼠肠道动力的影响。方法 将36只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为对照组6只和造模组30只。造模组采用“洛哌丁胺混悬液+夹尾刺激”复制气滞型STC大鼠模型,连续刺激14 d。当大鼠表现出激惹、易怒、烦躁等情况,正常喂养饲料时出现大便干硬、排便数量减少等表现时,说明气滞型便秘模型造模成功。将造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、西药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各6只,低、中、高剂量组分别按5.15、10.3、20.6 g/(kg·d)给予理气通便方药液灌胃;西药组按0.18 mg/(kg·d)给予琥珀酸普芦卡必利片混悬液灌胃;对照组和模型组按10 mL/(kg·d)给予无菌水灌胃,每日1次,连续灌胃14 d。比较6组末次给药后6 h的粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率;HE染色观察结肠组织病理变化;免疫组化检测结肠组织c-kit蛋白表达水平;Western blot检测结肠组织c-kit、SCF蛋白表达量。结果 HE染色显示:对照组大鼠结肠黏膜完整,杯状细胞和腺体排列整齐,未见炎症细胞聚集;模型组结肠黏膜出现肠腺排列欠整齐,黏膜下层间质血管扩张;各给药组结肠黏膜肠腺排列整齐,未观察到明显上皮损伤。与对照组比较,模型组粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率均明显降低(P<0.05),结肠组织c-kit蛋白表达水平和c-kit、SCF蛋白表达量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中剂量组、高剂量组粪便排出量、粪便含水率和小肠推进率均明显提高(P<0.05),低剂量组粪便排出量和粪便含水率均明显提高(P<0.05);给药组结肠组织c-kit蛋白表达水平均明显提高(P<0.05);低、中、高剂量组结肠组织c-kit蛋白表达量均明显提高(P<0.05),高剂量组SCF蛋白表达量明显提高(P<0.05)。结论 理气通便方可提高气滞型STC模型大鼠结肠组织中ICC的表达及调控SCF/c-kit信号通路,恢复对胃肠道节律的正常调控来改善便秘的症状。

基于SCF/C-kit信号通路探讨黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的影响

目的:观察黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的干预作用,并从干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路方面探索其作用机制。方法:选择健康SD雄性10周龄大鼠进行实验。取部分大鼠采用自体血注入法制作脑出血模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和黄连解毒汤组,每组24只;另取24只大鼠仅进针不注入自体血,作为假手术组;另取24只常规饲养大鼠作为正常组。黄连解毒汤组大鼠予黄连解毒汤颗粒剂悬浊液54 mg/d灌胃,莫沙必利组大鼠予莫沙必利悬浊液0.27 mg/d灌胃,其余各组均灌胃给予生理盐水。分别于给药24 h、4 d、7 d后,随机取每组8只大鼠,处死取材。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组各时期大鼠胃组织损伤情况并进行病理损伤评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kitmRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kit蛋白相对表达量。结果:正常组与同期假手术组大鼠胃黏膜病理评分、胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05);正常组、假手术组上述指标不同时间点组内比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠胃黏膜各观察时点病理评分均明显高于同期正常组、假手术组(P<0.01),胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白相对表达量均明显低于同期正常组、假手术组(P<0.01)。黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期模型组(P<0.01),给药7 d时评分均明显低于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期莫沙必利组(P<0.01)。黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白相对表达量均明显高于同期模型组(P<0.01),给药7 d时上述指标相对表达量均明显高于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点上述指标相对表达量均明显高于同期莫沙必利组(P<0.01)。结论:脑出血急性期常继发急性胃黏膜损伤,黄连解毒汤对脑出血急性期胃黏膜损伤有一定的保护作用,其可能通过调控SCF/C-kit信号通路保护胃黏膜,有效减轻胃黏膜损伤。

“朴实方”对慢传输型便秘小鼠结肠Cajal细胞及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:观察朴实方对慢传输型便秘(STC)模型小鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)及干细胞因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(c-Kit)信号通路的影响,探索朴实方治疗STC的作用机制。方法:50只ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(普芦卡必利,每日灌胃给药量为0.3 mg/kg)和朴实方高、低剂量组(每日灌胃给药量分别为17.0、8.5 g/kg),每组10只。除正常组外,其余各组小鼠采用复方地芬诺酯混悬液连续灌胃2周构建STC模型。造模成功后各给药组每日分别予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃给予同体积生理盐水,各组均连续灌胃2周。干预完成后,使用活性炭灌胃法测定各组小鼠肠道推进率,苏木精-伊红(HE)染色比较各组小鼠结肠组织学特征,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠血清SCF含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组小鼠结肠组织c-Kit蛋白、SCF蛋白表达情况,酶联实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组小鼠结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA表达。结果:模型组小鼠肠道推进率明显低于正常组(P<0.01),各给药组小鼠肠道推进率均明显高于模型组(P<0.01)。模型组小鼠结肠肌层厚度降低,腺体数量减少且充血、水肿,各给药组小鼠结肠组织病理改变较模型组减轻,以朴实方高剂量组和阳性对照组改善更为显著。模型组小鼠血清SCF含量和结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA及c-Kit、SCF蛋白相对表达量均明显低于正常组(P<0.01);朴实方高、低剂量组及阳性对照组小鼠血清SCF含量明显高于模型组(P<0.01),结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA及c-Kit、SCF蛋白相对表达量均明显高于模型组(P<0.05,P<0.01)。上述指标各给药组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:朴实方可以提高STC模型小鼠肠道推进率,改善小鼠结肠组织病理,其可能通过上调结肠组织中c-Kit和SCF的表达,激活SCF/c-Kit信号通路,促进结肠ICC增殖,增强肠道蠕动,从而改善STC模型小鼠便秘状态。

中医疗法靶向干预SCF/c-kit信号通路治疗功能性消化不良机制研究进展

功能性消化不良(FD)的病理机制尚未阐明,中医治疗FD优势明显,临床疗效确切,其中以中药复方、单味药及其成分和针灸等为代表的中医疗法在FD的临床治疗中具有重要地位。目前,针对FD的研究中干细胞因子(SCF)/c-kit信号转导的重要性日益凸显,并取得一定进展。中医疗法干预SCF/c-kit系统治疗FD的机制可能与其调节胃肠卡哈尔间质细胞、神经细胞和肥大细胞功能异常引起的胃肠动力障碍、十二指肠低度炎症和内脏敏感性增高有关。本文对中医疗法调控SCF/c-kit通路治疗FD进行综述,以期为临床治疗提供依据。

增液承气汤加减通过SCF/c-kit信号通路对慢性传输型便秘的作用机制研究

目的:探讨增液承气汤加减对慢性传输型便秘治疗的作用及其作用机制。方法:健康SD大鼠60只,应用复方地芬诺酯片灌胃构建慢性传输型便秘模型大鼠,造模成功后随机分成模型组、增液承气汤加减高、中、低剂量组(剂量分别为38.88、19.44、9.72 mg/kg)、阳性药组(12.5%的伊托必利混悬液,54 mg/kg),每组10只。另取未经造模的10只SD大鼠作为正常组。正常组和模型组大鼠给予等量的超纯水,各组大鼠连续灌胃7 d。给药期间每日定期监测大鼠体质量变化、活动状态、摄食量、饮水量;给药结束后测定大鼠排便情况、肠道传输功能;ELISA法检测血清中5-HT、VIP、SP水平;Western Blotting法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit的表达水平。结果:与模型组比较,增液承气汤加减高、中、低剂量组和阳性药组大鼠在给药期间体质量增长明显(P<0.05),摄食量增加(P<0.05),饮水量增加(P<0.05);大鼠首粒黑便排出时间明显缩短(P<0.05),血清中5-HT、VIP、SP水平明显降低(P<0.05);12 h大便数量、粪便含水量、肠管总长度、碳末推进长度、碳末推进率均明显升高(P<0.05);SCF、c-kit蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05)。结论:增液承气汤加减可剂量依赖性地改善大鼠慢性传输型便秘,其机制可能与SCF/c-kit信号通路有关。

SCF/c-kit信号通路对乳腺癌侵袭转移调控的作用及机制研究

目的:探讨SCF/c-kit信号通路对乳腺癌侵袭转移调控的作用及机制研究。方法:采用人乳腺癌细胞株MCF-7构建体外模型。将细胞分为空白对照组、SCF过表达组和SCF抑制组。采用MTT法检测细胞24h、48h、72h的增殖率,采用Transwell实验检测细胞24h、48h、72h的侵袭情况。结果:SCF过表达组在24h、48h、72h的细胞增殖率均显著大于SCF抑制组和空白对照组(P<0.05),且SCF抑制组细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05);SCF过表达组在24h、48h、72h的细胞侵袭数均显著大于SCF抑制组和空白对照组(P<0.05),且SCF抑制组细胞侵袭数显著低于空白对照组(P<0.05)。结论:SCF/c-kit信号通路的激活可增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,靶向抑制SCF/c-kit信号通路的表达可有效逆转对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用。

利那洛肽联合普芦卡必利对IBS-C小鼠氧化应激状态及SCF/c-kit信号通路的影响

目的探究利那洛肽联合普芦卡必利通过调控干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路对便秘型肠易激综合征(IBS-C)小鼠氧化应激损伤的修复作用。方法从50只C57BL/6野生型小鼠中随机选取10只作为对照组,其余40只采用冰水灌胃法构建IBS-C小鼠模型。造模成功后,将40只小鼠随机分为模型组(不进行其他处理)、利那洛肽组(给予利那洛肽)、普芦卡必利组(给予普芦卡必利)及联合给药组(同时给予利那洛肽和普芦卡必利),每组各10只。治疗14 d后,观察各组的粪便颗粒数和粪便含水量变化,采用墨汁灌胃法检测各组的胃残留率和小肠推进率,采用免疫组织化学染色法检测各组结肠组织中胃动素(MOT)和生长抑素(SS)水平,采用ELISA法检测各组血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和总抗氧化能力(TAOC)水平,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测结肠组织中SCF、c-kit的蛋白和mRNA的相对表达量。结果与模型组相比,各给药组的粪便颗粒数和粪便含水量均显著增多,胃残留率均显著降低,小肠推进率均显著升高,结肠组织中MOT、SS水平均显著降低,血清MDA、ROS水平均显著降低,血清SOD、TAOC水平均显著升高,结肠组织中SCF、c-kit的蛋白和mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05)。与利那洛肽组、普芦卡必利组相比,联合给药组的胃残留率均显著降低,小肠推进率均显著升高(P均<0.05)。结论利那洛肽联合普芦卡必利治疗可有效降低IBS-C模型小鼠的胃残留率,升高小肠推进率,并减轻其氧化应激损伤,这可能与SCF/c-kit信号通路的激活有关。

益气健脾通便方对慢传型便秘大鼠结肠组织ICC及SCF/c-kit信号通路的影响

目的:通过观察益气健脾通便方对慢传输型便秘模型大鼠结肠组织ICC表达的影响及对SCF/c-kit信号通路的修复作用,从理论上揭示益气健脾通便方治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法:采用"复方地芬诺酯灌胃法"复制慢传输型便秘大鼠动物模型,分别运用益气健脾通便方低、中、高剂量干预,并与西药聚乙二醇4000散对比。观察造模及治疗过程中各组大鼠粪便粒数的变化;采用免疫组化法检测大鼠结肠组织ICC的表达量及Western-Blot、RT-PCR法检测大鼠结肠组织c-kit、SCF蛋白的表达及c-kit、SCF mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,聚乙二醇组、益气健脾通便方低、中、高剂量组均能明显提高慢传输型便秘大鼠24 h粪便粒数(P<0.05);与模型组比较,聚乙二醇组、益气健脾通便方低、中、高剂量组大鼠结肠组织ICC、c-kit、SCF蛋白及c-kit、SCF mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);与聚乙二醇组比较,益气健脾通便方中剂量组大鼠结肠组织ICC及c-kit、SCF蛋白表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);益气健脾通便方中剂量组大鼠结肠组织c-kit、SCF mRNA表达水平较聚乙二醇组明显升高(P<0.05);益气健脾通便方高剂量组大鼠结肠组织c-kit、SCF mRNA表达水平较聚乙二醇组有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气健脾通便方治疗慢传输型便秘疗效显著,其作用机制可能与其提高结肠组织ICC的表达量及修复SCF/c-kit信号通路有关,从而改善便秘症状,以中、高剂量组疗效最为显著。

黄连解毒汤对脑梗死合并肠损伤大鼠SCF/C-kit信号通路的影响

目的观察黄连解毒汤对脑梗死合并肠损伤大鼠干细胞因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(C-kit)信号通路的影响。方法将80只健康Wistar10周龄雄性大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤组、莫沙必利组、假手术组,并设有正常组。采用线栓法进行大脑中动脉梗死建模。黄连解毒汤组给予黄连解毒汤(27 mg/mL)混悬液,莫沙必利组给予莫沙必利(0.09 mg/mL)悬浊液,其余组给予1 m L生理盐水,连续给药7 d。各组分别在4、7 d时,采用HE染色法观察大鼠肠组织病理形态学变化,并进行病理损伤评分;采用实时荧光定量检测大鼠肠组织中SCF、C-kit m RNA表达水平;采用Western blotting检测大鼠肠组织中SCF、C-kit蛋白表达水平。结果与正常组、假手术组比较,模型组、黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠肠黏膜病理评分均明显升高(均P<0.01),肠组织SCF和C-kit mRNA、蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);而正常组、假手术组间差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠肠黏膜病理评分均显著降低(均P<0.01),肠组织SCF和C-kit mRNA、蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且与莫沙必利组比较,黄连解毒汤组大鼠肠黏膜病理评分均明显降低(P<0.05),肠组织SCF和C-kit mRNA、蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论脑梗死急性期易合并肠黏膜损伤。黄连解毒汤对脑梗死合并肠损伤大鼠的肠黏膜具有一定的保护作用。其机制可能与黄连解毒汤可升高大鼠肠组织中SCF、C-kit m RNA及蛋白的表达水平有关。

腹部推拿联合5-HT4受体激动剂调节SCF/c-kit信号通路对STC大鼠的作用研究

目的观察腹部推拿联合5-HT4受体激动剂调节SCF/c-kit信号通路对慢传输型便秘(STC)大鼠的作用。方法2017年10月—2018年6月于新疆维吾尔自治区中医药研究院进行实验。65只雄性大鼠随机数字表法分为5组,对照组、模型组、推拿组、莫沙必利组、推拿联合莫沙必利组(联合组),每组13只。除对照组外,其余各组采用肠神经节消融术建立STC大鼠模型,推拿组进行腹部推拿,莫沙必利组大鼠予0.15 mg/ml莫沙必利10 ml/kg灌胃,联合组予推拿+相同浓度的莫沙必利灌胃,各组干预方式每日1次,连续14 d。实验结束后比较各组大鼠体质量、粪便含水率、血浆SP、NO、5-HT及VIP水平、肠推动率,实时定量PCR检测大鼠结肠组织中5-HT3R和5-HT4R mRNA的表达,Western-blot检测大鼠结肠组织中SCF、c-kit蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量增加值显著升高(F=11910.958,P=0.021),粪便含水率显著降低(F=81.938,P=0.018),血浆SP水平显著降低,NO、5-HT及VIP水平均显著升高(F/P=621.651/0.011、4298.343/0.008、2282.876/0.013、834.829/0.026),肠推动率显著降低(P<0.05),结肠组织中5-HT3R及5-HT4R mRNA水平、SCF、c-kit水平均显著下降(P<0.05)。与模型组比较,推拿组、莫沙必利组、联合组大鼠体质量增加值均显著降低(P<0.05),粪便含水率显著增加(P<0.05),血浆SP水平显著升高,NO、5-HT及VIP水平均显著降低(P<0.05),肠推动率均显著升高(P<0.05)。结肠组织中5-HT3R及5-HT4R mRNA水平、SCF、c-kit蛋白水平均显著升高(P<0.05),且联合组大鼠各项指标转归效果均显著优于推拿组及莫沙必利组(P<0.05)。结论腹部推拿联合5-HT4受体激动剂能够调节STC大鼠体内SCF/c-kit信号通路,缓解STC大鼠疾病状态,改善其疾病转归。

益胆汤防治胆囊胆固醇结石作用机制及SCF/c-Kit信号通路分析

目的:探讨益胆汤防治胆囊胆固醇结石作用机制,分析SCF/c-Kit信号通路。方法:将60只豚鼠随机均等分为A、B、C三组。其中A组行常规饲料饲养,B组给予含高胆固醇的饲料进行饲养,C组行高胆固醇的饲料+益胆汤饲养。喂养6周后处死豚鼠以检测胆固醇结石生成情况。同时行Western blot法、RT-PCR法对小鼠胆组织中的c-Kit及SCF的含量进行检测。结果:A组成石率低于C组,且两组均低于B组(P<0.05);B组胆固醇浓度及胆汁酸浓度高于C组,且两组均高于A组(P<0.05),A组致石指数与C组较为一致,均显著低于B组(P<0.05);B组与A组豚鼠组织中,其c-Kit与SCF及GAPDH基因有效扩增,B组c-Kit与SCF的mRNA的表达明显低于A组(P<0.05)。而C组在c-Kit与SCF蛋白表达上明显高于B组,且均低于A组(P<0.05)。结论:益胆汤能够有效提高豚鼠体内SCF/c-Kit的表达,防治胆囊胆固醇结石效果较好。

基于SCF/c-kit信号通路探讨调胃承气汤对脑出血急性期大鼠胃肠组织的影响

目的观察调胃承气汤对脑出血急性期大鼠胃肠组织SCF/c-kit信号通路的影响,探讨其调节胃肠动力障碍的作用机制。方法选取40只健康Wistar大鼠,按照随机数字法将其分为假手术组、模型组、西药组和中药组,每组10只。除假手术组只进针不注射外,其他组均采用自体血注入法建立脑出血大鼠模型。成功造模后,中药组和西药组分别给予113.4 mg/mL的调胃承气汤悬浊液和0.135 mg/mL的莫沙必利悬浊液10 mL/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组予以等容量生理盐水灌胃,均连续灌胃7 d。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测大鼠胃、小肠、大肠、盲肠组织中c-kit、SCF蛋白及mRNA表达情况。结果模型组大鼠胃肠各组织中的c-kit、SCF蛋白及mRNA相对表达量均明显低于假手术组(P均<0.05);中药组和西药组大鼠胃肠各组织中的c-kit、SCF蛋白及mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),中药组和西药组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05),但中药组各指标有高于西药组的趋势。结论调胃承气汤改善脑出血急性期胃肠动力障碍的作用机制与提高SCF/c-kit信号通路相关蛋白及mRNA的表达有关。

基于SCF/C-kit信号通路探讨益髓破血方改善脑出血小鼠肠动力“通腑”作用机制

目的观察益髓破血方对脑出血小鼠排便情况与结肠组织干细胞因子(stem cell factor,SCF)/酪氨酸激酶受体(kit proto-oncogene,C-kit)信号通路的影响,探讨益髓破血方调节脑出血小鼠肠动力通腑作用机制。方法将54只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机均分为假手术组、模型组与方剂治疗组,采用鼠尾自体血注入法制作实验性脑出血模型,假手术组只进针不注射。方剂治疗组给予1 g/mL益髓破血方悬浊液灌胃,假手术组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次。观察各组小鼠排便情况,记录第1天、第3天、第7天同时段6 h内的排便量以及末次灌胃后首次排便间隔时间,并于相同时间分段点处死小鼠取材,采用免疫组化和Western Blot法检测小鼠结肠组织中的SCF、C-kit蛋白。结果与假手术组比较,模型组小鼠第1天、第3天、第7天各6 h内排便量显著减少(P<0.05),末次灌胃首次排便时间明显滞后(P<0.05),结肠组织中SCF、C-kit蛋白表达显著减少(P<0.05),且随周期延长呈逐渐降低趋势;与模型组比较,方剂治疗组第1天、第3天、第7天各6 h内排便量相对增多(P<0.05),首次排便时间缩短(P<0.05),SCF、C-kit蛋白表达水平升高(P<0.05),且随时间推移逐渐向正常量恢复。结论益髓破血方干预治疗脑出血小鼠,可以增加肠动力,促进排便,发挥通腑作用使肠功能恢复,改善脑出血后便秘,其机制可能与SCF/C-kit信号通路有关。

二陈汤通过调控SCF/C-kit通路介导的痰湿型脑出血急性期胃肠功能障碍的研究

目的通过观察二陈汤对痰湿证脑出血急性期大鼠胃肠组织干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/干细胞因子受体(C-kit)信号通路的动态变化的影响,探讨痰湿型体质与脑出血急性期胃肠功能障碍的关系及二陈汤的作用机制。方法将60只SD大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组、莫沙必利组(0.27 mg/d)、二陈汤低剂量组和二陈汤高剂量组(217、434 mg/d),每组10只。除空白组、假手术组外其余各组均采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,各组按剂量给予灌胃,空白组、假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,每天2次,于给药7天处死大鼠,采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠胃肠黏膜细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测大鼠胃、小肠组织中的SCF、C-kit蛋白及mRNA的表达水平。结果光镜下见空白组、假手术组大鼠胃肠黏膜细胞结构完整、形态规则,偶见轻微充血现象;模型组见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润明显、组织糜烂;莫沙必利组及二陈汤低、高剂量组胃肠黏膜各层次欠清晰、排列不规则,部分组织可见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润,此3组中以二陈汤低剂量组胃肠黏膜表现最为严重。模型组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit mRNA表达水平较空白组、假手术组显著降低(P<0.05),莫沙必利组、二陈汤低剂量组、二陈汤高剂量组的表达增加(P<0.05),莫沙必利组和二陈汤高剂量组大鼠胃组织中的SCF mRNA表达显著增加(P<0.05),二陈汤高剂量组C-kit mRNA表达显著增加(P<0.05);小肠组织中的SCF、C-kit mRNA含量随二陈汤浓度提高而增加(P<0.05)。与模型组相比,莫沙必利组、二陈汤低、高剂量组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.05),三组中以莫沙必利及高剂量二陈汤效果更佳(P<0.05)。结论脑出血急性期痰湿型胃肠黏膜损伤及功能障碍的作用机制与SCF/C-kit信号通路相关蛋白及mRNA的表达降低有关,二陈汤可通过此机制进行有效干预,上调相关蛋白及mRNA的表达,有利于脑出血急性期胃肠功能障碍恢复。

基于SCF/C-kit通路探讨三焦针法对腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

目的 观察三焦针法对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠胃肠动力异常及结肠组织干细胞因子(stem cell factor, SCF)、酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor, C-kit) mRNA和蛋白表达的影响,探讨三焦针法治疗IBS-D的作用机制。方法 wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和三焦组,每组6只。除空白组外,其余各组采用“冰醋酸灌肠+束缚应激”建立IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴胺灌胃(15 mg/kg),三焦组针刺膻中、中脘、气海、血海(双侧)及足三里(双侧),诸穴行捻转补法30秒,1次/d,均治疗14天。观察大鼠一般状态;测定体质量、旷场实验(大鼠横向运动和纵向运动)、稀便率、腹壁撤退反射(abdominal retraction reflex, AWR)3分阈值时注水量;RT-PCR法、Western blot法检测结肠组织SCF、C-kit mRNA及蛋白表达。结果 与空白组相比,IBS-D模型大鼠一般状态较差,体质量显著降低(P<0.01),旷场实验检测横向运动距离与纵向运动次数显著降低(P<0.01),稀便率显著增高(P<0.01),AWR3分时注水量显著降低(P<0.01),结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、三焦组大鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.05),横向运动距离与纵向运动次数均显著升高(P<0.05,P<0.01),稀便率显著下调(P<0.01),AWR3分时注水量显著提升(P<0.01),三焦组大鼠结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白水平表达均显著降低(P<0.01),而西药组SCF、C-kit mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。结论 三焦针法可改善IBS-D大鼠症状,可能是与调节结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平有关。

基于SCF/c-kit信号通路探讨艾灸干预对腹泻型肠易激综合征大鼠免疫功能稳态的影响

目的:观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠干细胞因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(c-kit)信号通路及免疫功能的影响,探讨艾灸干预IBS-D的机制。方法:从6只健康SPF级孕鼠产下的52只幼鼠中随机选取12只作为正常组,剩余40只采用母子分离、醋酸灌肠、慢性束缚应激三因素联合复制IBS-D大鼠模型,将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、艾灸组、西药组,每组12只。艾灸组予悬灸“天枢”“上巨虚”,西药组予利福昔明悬浊液(150 mg/kg)灌胃,均每天1次,连续干预7 d。分别于醋酸灌肠前(35日龄)、造模后(45日龄)、干预后(53日龄)检测各组大鼠体质量、稀便率(LSR)、腹壁回缩反射(AWR)评分达3分时最小容量阈值;干预后(53日龄),HE染色观察大鼠结肠组织形态,测定脾脏及胸腺脏器系数,ELISA法检测血清炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-10、IL-8]、T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD45+)、CD4+/CD8+值及免疫球蛋白(Ig A、Ig G、Ig M)含量,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit m RNA及蛋白表达,免疫荧光法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit阳性表达。结果:干预后,与正常组比较,模型组体质量、AWR评分达3分时最小容量阈值降低(P<0.01),LSR、脾脏及胸腺系数与血清TNF-α、IL-8、CD4+、CD8+、CD45+、CD4+/CD8+值、Ig A、Ig G、Ig M含量升高(P<0.01),血清IL-10与结肠组织SCF、c-kit蛋白及m RNA表达降低(P<0.01),结肠组织SCF、c-kit阳性表达降低(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组和西药组体质量、AWR评分达3分时最小容量阈值升高(P<0.01,P<0.05),LSR、脾脏及胸腺系数与血清TNF-α、IL-8、CD4+、CD8+、CD45+、CD4+/CD8+值、Ig A、Ig G、Ig M含量降低(P<0.01,P<0.05),血清IL-10与结肠组织SCF、c-kit蛋白及m RNA表达升高(P<0.01),结肠组织SCF及c-kit阳性表达升高(P<0.01)。与西药组比较,艾灸组血清CD4+含量降低(P<0.05),CD4+/CD8+值升高(P<0.01),其余指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。SCF、c-kit m RNA表达与AWR评分达3分时最小容量阈值、IL-10呈正相关(P<0.01),与其余指标均呈负相关(P<0.01,P<0.05)。结论:艾灸干预可降低IBS-D模型大鼠内脏高敏感性,改善其腹痛、腹泻等症状,其作用机制可能与上调SCF/c-kit信号通路的表达、改善IBS-D免疫功能状态有关。

基于干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路探讨和胃理气方治疗功能性消化不良胃肠运动功能障碍的作用机制

【目的】观察和胃理气方对功能性消化不良肝郁模型大鼠胃肠动力及干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路的影响,从分子水平探讨其作用机制。【方法】选取敞箱实验和糖水偏好实验评分相似的40只SPF级健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。除正常组外,其他组别采用夹尾刺激+不规则喂养复合因素法建立功能性消化不良肝郁动物模型。成功造模后,中药组和西药组分别用和胃理气方和吗丁啉进行干预治疗。通过敞箱、糖水偏好实验评价大鼠抑郁状态;采用胃排空、小肠推进实验评价胃肠运动情况;分别用免疫组织化学、蛋白免疫印迹法检测大鼠胃窦、小肠组织中c-kit、SCF的蛋白表达水平;采用实时定量聚合酶联反应(RT-PCR)法检测大鼠胃窦、小肠黏膜组织中c-kit、SCF的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠糖水消耗率下降,敞箱实验水平及垂直运动得分下降,胃排空及小肠推进减慢,胃窦、小肠组织中c-kit、SCF阳性表达细胞光密度值降低,c-kit、SCF的蛋白、mRNA表达水平均下降(均P<0.05)。与模型组比较,中药组和西药组糖水消耗率提高,敞箱实验水平及垂直运动得分增加,胃排空及小肠推进加快,胃窦、小肠组织中c-kit、SCF阳性细胞光密度值升高,c-kit、SCF的蛋白、mRNA表达水平均升高(均P<0.05),且中药组和西药组比较,上述指标均无统计学差异(P>0.05)。【结论】肝郁可致胃肠动力障碍,和胃理气方可以改善功能性消化不良肝郁大鼠抑郁状态,促进胃肠动力,其分子作用机制与上调SCF/c-kit信号通路相关蛋白表达有关。

活血通降方对反流性食管炎模型大鼠食管动力、血清炎症因子及食管下括约肌SCF/c-kit信号通路的影响

目的探讨活血通降方治疗反流性食管炎的可能作用机制。方法将60只大鼠随机分为空白组、模型组及活血通降方低、高剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均采用改良部分贲门肌切开术+外置幽门部分结扎术制备反流性食管炎模型大鼠。造模成功后当天开始给药,活血通降方低、高剂量组给药量分别为3.68、7.35 g/(kg·d),空白组和模型组给予生理盐水5 ml灌胃,均连续14天。检测食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率、胃重量及胃排空率。HE染色观察大鼠食管组织病理形态学变化,并进行食管黏膜病理评分;测定血清中炎症因子白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;免疫荧光法测定Cajal间质细胞(ICCs)数量;免疫印记法检测食管下括约肌中酪氨酸激酶受体(c-kit)、干细胞因子(SCF)、亮氨酸拉链和不育-α基序激酶(ZAK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达。结果与空白组比较,模型组食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率、胃排空率、ICCs阳性细胞数、c-kit和SCF表达均降低,胃重量、食管黏膜损伤病理评分、IL-8和TNF-α浓度、ZAK和p-ERK表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,活血通降方高剂量组食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率升高(P<0.01),活血通降方低、高剂量组胃排空率、ICCs阳性细胞数、c-kit和SCF表达均升高,胃重量、食管黏膜病理评分、IL-8和TNF-α浓度、ZAK和p-ERK表达均降低(P<0.05或P<0.01)。活血通降方高剂量组食管下括约肌平均肌张力变化率、平均振幅变化率、ICCs阳性细胞数均高于活血通降方低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论活血通降方可能通过降低食管下括约肌中ZAK表达,抑制p-ERK表达,一方面激活SCF/c-kit信号通路,促进食管及胃动力;另一方面降低血清中IL-8和TNF-α浓度改善食管下括约肌黏膜炎症,从而治疗反流性食管炎,且以高剂量效果更好。

运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征大鼠SCF/c-kit信号通路的影响

目的通过观察运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠SCF/c-kit信号通路的影响。方法 80只Wistar大鼠用随机数字表法选取12只大鼠为正常组,其余大鼠采用冰水灌胃法建立IBS-C模型。建模成功后,将大鼠按照随机数字表法分为IBS-C模型组,莫沙必利组和中药低、中、高剂量组,每组12只。正常组和IBS-C模型组给予等容积的蒸馏水,莫沙必利组给予1.35mg/(kg·d)混悬液灌胃,中药低、中、高剂量组分别12.2,24.4,48.8g/(kg·d)药剂灌胃。采用墨汁推进实验测定肠道推进率,采用免疫组化法和RT-qPCR检测结肠组织SCF、c-kit蛋白和mRNA表达水平。结果与正常组比较,IBS-C模型组粪便颗粒数减少,粪便含水量以及肠道推进率明显降低,结肠组织SCF、c-kit蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。与IBS-C模型组比较,给药组大鼠粪便颗粒数及含水量,肠道推进率明显升高,结肠组织中SCF、c-kit蛋白和mRNA表达水平升高,其中除中药低剂量组SCF蛋白表达水平无统计学意义外,其他均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论运脾柔肝方可能是通过调节SCF/c-kit信号通路来改善大鼠肠道推进率和排便的。