丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型抗氧化作用及SCF/C-kit蛋白表达的影响

[目的]观察丹白涂膜剂对肌肉注射黄体酮及紫外(UV)照射导致黄褐斑大鼠模型的皮肤抗氧化作用及对SCF/C-kit蛋白表达的影响。[方法]将大鼠随机分成对照组、模型组、氢醌组、丹白涂膜剂组共4组。用肌肉注射黄体酮及辅助UV照射法建立黄褐斑大鼠模型。测定各组皮肤组织中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、酪氨酸酶(TYR)、总抗氧化能力(T-AOC),以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及大鼠皮肤病理学检查。用CCK-8试剂盒观察0、5、10、20、40、80 mg/mL浓度丹白提取物对Ha Cat细胞、黑素细胞的抑制情况,选取最佳抑制浓度,将HaCat细胞分为1640培养基组、30 m J/cm^2 UVB照射组、20 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm^2 UVB照射+20 mg/mL丹白提取物组,黑素细胞分为MeIM-2培养基组、30 mJ/cm^2 UVB照射组、40 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm^2 UVB照射+40 mg/mL丹白提取物组;Western blot法检测各组Ha Cat细胞SCF蛋白表达水平,各组黑素细胞的C-kit受体蛋白表达水平。[结果]丹白涂膜剂能够显著增加黄褐斑模型大鼠皮肤中GSH-Px、SOD活性、T-AOC能力,降低MDA,抑制TYR增加;丹白提取物对HaCat细胞、黑素细胞的抑制情况呈剂量依赖性最大抑制效应分别为20 mg/mL(P<0.01)和40 mg/mL(P<0.01);丹白提取物能够下调UVB对HaCat细胞SCF蛋白和黑素细胞C-kit受体的促表达作用。[结论]丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型皮肤具有抗氧化作用,能够抑制与黄褐斑相关的蛋白SCF/C-kit蛋白表达。

原发性和复发性鼻咽癌c-kit蛋白和SCF的表达

目的探讨c-kit蛋白和干细胞因子(SCF)在原发性和复发性鼻咽癌中的表达以及它们与肿瘤复发的关系。方法从中山大学肿瘤防治中心病理科获得65例原发性和25例复发性鼻咽癌的活检标本。采用免疫组化法检测c-kit蛋白和SCF的表达,同时对90例鼻咽癌标本全部进行EBER原位杂交。结果原发性和复发性鼻咽癌c-kit蛋白的阳性表达率分别为53.85%(35/65)和16.00%(4/25),差异有统计学意义(P=0.002)。原发性鼻咽癌的强阳性百分率为33.85%(22/65),也显著高于复发性鼻咽癌者的4.00%(1/25)(P=0.003)。青少年(年龄≤25岁)原发性鼻咽癌的c-kit蛋白阳性表达百分率为100%(6/6),明显高于成年人(>25岁)的49.15%(29/59)(P=0.027)。原发性和复发性鼻咽癌c-kit蛋白和SCF的共同表达率分别是46.15%(30/65)和16.00%(4/25),两者间差异具有统计学意义(P=0.008)。结论原发性鼻咽癌的c-kit蛋白阳性表达率和强阳性表达率均高于复发性鼻咽癌。青少年原发性鼻咽癌的c-kit蛋白表达率高于成年人。原发性鼻咽癌的c-kit蛋白和SCF的共同表达率也明显高于复发性鼻咽癌。因此,c-kit/SCF信号传导途径的调控异常可能参与了鼻咽癌癌变和复发的过程。

益髓生血颗粒对珠蛋白生成障碍性贫血患者SCF及c-kit基因表达的影响

目的:探讨益髓生血颗粒治疗珠蛋白生成障碍性贫血的作用机制。方法:观察20例患儿治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞计数(Ret)、胎儿血红蛋白(HbF)的改变;选取10例有效病例,通过实时荧光定量PCR技术探讨该药对珠蛋白生成障碍性贫血患者骨髓有核细胞SCF和c-kit基因表达的影响。结果:治疗后患者各项血液学参数均有改善;骨髓有核细胞c-kit基因表达明显升高,与治疗前比较差异有显著性(P<0.05);SCF基因表达无明显改变。结论:益髓生血颗粒可以明显改善患者的临床症状,通过SCF/c-kit信号传导途径,调节红系祖细胞及其它造血细胞的增殖和分化过程,来达到治疗目的。

类c-kit原癌蛋白在多伊棺头蟋胚后精子发生中的表达和定位

为了了解类c-kit原癌蛋白在多伊棺头蟋Loxoblemmus doenitzi Stein胚后精子发生中的表达、定位及可能的调控作用,采用常规免疫组织化学方法进行了相关研究。结果表明:处于减数分裂中期Ⅰ至末期Ⅱ的初级精母细胞的细胞膜上有类c-kit原癌蛋白阳性颗粒;精巢或受精囊内成熟精子头部也具有类c-kit原癌蛋白阳性颗粒。结果反映了类c-kit蛋白对于维持动物精子发生过程中减数分裂、精子成熟及受精能力具有特殊功能。

网翅蝗科3种蝗虫精子发生时c-kit蛋白特异性表达和比较

【目的】以吉林省四平地区网翅蝗科(直翅目:蝗总科)3种优势蝗虫为试验材料,探讨在蝗虫精子发生过程中c-kit蛋白表达和调控机制。【方法】应用免疫组织化学和统计分析等方法,对精子发生过程中4个代表性阶段c-kit蛋白特异性表达动态进行了研究,3种蝗虫分别为:绿牧草蝗[Omocestusviridulus(Linnaeus)],素色异爪蝗[Euchorthippusunicolor(Ikonn.)]和条纹异爪蝗(EuchorthippusvittatusZheng)。【结果】(1)精原细胞时期阳性表达强度较弱,阳性颗粒细小;(2)初级精母细胞时期阳性表达强度显著增强,阳性颗粒粗大;(3)次级精母细胞时期阳性表达强度继续增强,阳性颗粒细小;(4)成熟精子时期阳性表达强度较强,阳性颗粒细小,并分布于精子头部和尾丝等处;(5)在精巢小管末端发现大量阳性蛋白颗粒成团存在;(6)c-kit蛋白表达存在种间差异。【结论】c-kit蛋白在生精细胞中阶段性的特异表达,说明它具有如下功能:直接参与和调控精子增殖与分化进程,同时参与成熟精子生理活性维系和受精等功能,甚至还参与调控不同种蝗虫精子发生的进程和种间生殖隔离的维系。

鼻咽癌细胞株中C-KIT表达和突变以及对Imatinib的反应性

背景与目的:我们先前报道了鼻咽癌组织中存在C-KIT表达和突变,但体外水平Imatinib是否对鼻咽癌细胞有增殖抑制作用及其机制尚不清楚。本研究评价了鼻咽癌细胞株中C-KIT表达和突变以及对Imatinib的反应性,探讨三者之间的相关性。方法:应用Western blot检测鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1、5-8F及鼻咽上皮细胞株NP-69的C-KIT表达情况,应用直接测序法检测CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1、5-8F、NP-69的C-KIT基因突变情况,应用CCK-8试剂盒进行Imatinib对CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F的增殖抑制实验,应用Pearson相关分析和t检验分析鼻咽癌细胞株中C-KIT表达、突变和对Imatinib的反应性三者之间是否有相关性。结果:鼻咽癌CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F细胞株相对于鼻咽上皮细胞株NP-69存在C-KIT蛋白高表达。CNE-1、CNE-2、Hone-1、NP-69发现杂合IVS17+78T>C,C-666发现纯合IVS17+78T>C,SUNE-1及5-8F无突变。Imatinib对CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F细胞株有剂量依赖的增殖抑制作用。鼻咽癌细胞株中C-KIT表达、突变和对Imatinib的反应性三者之间的相关性无统计学意义。结论:鼻咽癌细胞株中存在C-KIT过表达和C-KIT内含子基因突变,Imatinib对鼻咽癌细胞株有剂量依赖的增殖抑制作用,但是C-KIT蛋白过表达、C-KIT突变和Imatinib的增殖抑制作用之间未发现明显的相关性。

花粉特异F-box基因及其表达产物可能参与的SCF途径

泛素蛋白体目标性降解蛋白途径是许多细胞学过程的重要调节体系,底物蛋白泛素化涉及3个酶激反应,其中,作为E3连接酶的SCF复合体对底物的识别是通过亚体F-box蛋白C末端的特异性结构实现的。利用染色体步移等方法,最近在一些配子体型自交不亲和植物S-RNase基因近旁相继发现了一类花粉特异性表达的F-box基因,从而预示泛素介导的SCF蛋白降解途径可能参与配子体自交不亲和反应。

花胫绿纹蝗和疣蝗配子发生时原癌基因c-kit特异性表达比较研究

应用免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对花胫绿纹蝗Aiolopus tamulus（Fabricius）和疣蝗Trilophidia annulata（Thunberg）配子发生过程中原癌基因c-kit特异表达进行了比较研究。结果表明：（1）精子发生过程中,精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和成熟精子中均有不同程度的c-kit蛋白表达,精巢末端还有较粗大的阳性颗粒分布;（2）卵子发生过程中,第1-6阶段卵母细胞中有不同程度的c-kit蛋白特异性表达,但随着卵黄发生的开始逐渐消失;（3）2种蝗虫配子发生过程中c-kit表达存在种间差异。

艾灸血清对体外黑素细胞生长及SCF、c-kit蛋白表达的影响

目的:研究艾灸血清对体外培养人黑素细胞增殖、黑素合成,以及SCF、c-kit蛋白的影响,为艾灸治疗白癜风提供科学依据。方法:20只背部黄褐色毛豚鼠,随机分为艾灸组、对照组,豚鼠背部脱毛约2cm×2cm。艾灸组选用经外奇穴"灸癜风"和"阿是穴"作为艾灸治疗穴。穴上3cm处悬灸,采用温和灸补法,每日1次,每穴每次10min左右,疗程1个月;对照组动物同法固定,但不进行艾灸。末次治疗1h后,各组动物心脏采血,收集血清;采用体外培养正常人黑素细胞,观察艾灸血清、对照组血清在5%、10%、15%3种不同浓度,及24、48、72h,对黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性,以及SCF、c-kit蛋白表达的影响。结果:艾灸血清可促进黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性增加、黑素含量增加,并可促进SCF/c-kit信号通路中c-kit、SCF蛋白的表达。结论:艾灸血清中存在活性物质,可以促进黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性增加、黑素含量增加,并可促进SCF/c-kit信号通路中c-kit、SCF蛋白的表达。

胃肠道间质瘤中原癌基因c-kit突变及其蛋白表达

目的 探讨c kit基因蛋白表达及基因突变在胃肠道间质瘤 (GIST)发病中的作用及其与临床病理、预后的关系。方法 采用免疫组化和聚合酶链反应单链构象多态性技术 (PCR SSCP)方法 ,检测 82例GIST中c kit蛋白的表达及c kit基因exon 11突变的情况。结果 全组c kit蛋白的阳性率为 97.6 % (80 / 82 ) ,c kit基因突变率为 4 1.5 % (34/ 82 )。良性GISTc kit蛋白表达率为 95 .0 %(19/ 2 0 ) ,c kit基因突变为阴性 ;恶性GISTc kit蛋白表达率为 98.4 % (6 1/ 6 2 ) ,c kit基因突变率为5 4 .8% (34/ 6 2 )。与基因突变阴性病例相比 ,突变阳性组的GIST容易出现邻近组织的侵袭、转移或者复发。结论 c kit蛋白是GIST的重要诊断指标 ;c kit基因突变在GIST发生发展中可能发挥重要作用 。

肺神经内分泌癌c-kit蛋白表达的临床病理意义

目的探讨ckit癌基因蛋白在肺神经内分泌癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化SP法检测90例肺神经内分泌癌患者癌组织中ckit蛋白表达并分析其与各临床病理指标及预后的关系。结果ckit蛋白表达定位于癌细胞胞膜及胞质;ckit表达阳性率分别为类癌21.4%(3/14),不典型类癌90.0%(18/20),大细胞神经内分泌癌38.7%(12/31),小细胞癌76.0%(19/25),差异有统计学意义(P=0.000)。ckit表达癌在Ⅰ期为26.3%(5/19),Ⅱ期62.5%(15/24),Ⅲ期67.4%(29/43),Ⅳ期75.0%(3/4),差异有统计学意义(P=0.014)。ckit在患者性别中的分布为男性64.8%(46/71),女性31.6%(6/19),差异有统计学意义(P=0.017)。ckit表达癌在肿瘤直径大小的分布为<5cm者43.1%(22/51),≥5cm者76.9%(30/39),差异有统计学意义(P=0.002)。ckit表达在淋巴结转移患者为66.1%(47/71),无转移者26.3%(5/19),差异有统计学意义(P=0.003)。ckit阴性表达癌患者的中位生存时间为97个月,ckit阳性癌的患者中位生存时间为16个月,二者比较差异有统计学意义(LogRank=22.85,P=0.000)。ckit蛋白表达与患者肿瘤部位(P=1.000)、年龄(P=0.394)无关。结论ckit蛋白在肺神经内分泌癌的发生、演进过程中起着重要作用,并可作为分子指标监测患者预后。

干细胞因子SCF在肥大细胞增生病患者皮肤组织中蛋白水平的表达

肥大细胞增生病（mastocytosis，MT）是肥大细胞（mastocyte，MC）异常增生和聚集所致的疾病，一般MC聚集于皮肤，也可聚集于血液及全身多系统中，少数病例发生恶性MT，预后不良。体外细胞学的实验以及动物实验表明，干细胞因子（stem cell factor, SCF）与c-kit的结合，可激发一系列MC所引起的生理及病理反应，包括过敏、炎症和血液系统、胃肠道系统的肿瘤；SCF与MT密切相关，但有关MT的研究，大多集中于MC表面的SCF受体c-kit上面，国外用临床MT患者皮肤组织进行的研究较少。

单味中药提取物对体外培养的黑素细胞酪氨酸酶基因和c-kit基因表达的激活作用

目的研究补骨脂、白芷、夏枯草、川芎和墨旱莲单味中药提取物对黑素细胞的酪氨酸酶基因和原癌基因c-kit蛋白表达的影响,以及对总蛋白合成的影响。方法采用蛋白印迹法检测了酪氨酸酶蛋白和干细胞因子受体kit蛋白含量的变化;595nm比色标准曲线测定黑素细胞可溶性总蛋白含量。结果白芷、补骨脂、夏枯草、川芎和墨旱莲对黑素细胞可溶性总蛋白合成和c-kit基因蛋白表达有促进作用,其中白芷和补骨脂对c-kit基因蛋白表达的促进作用为69.44%和58.43%;夏枯草、墨旱莲和川芎对酪氨酸酶基因的蛋白表达有一定的促进作用。结论在白癜风治疗中传统中药具有较好的疗效,可能与酪氨酸激酶受体蛋白含量的提高相关,即通过SCF/kit蛋白途径起作用,因此可以通过该途径进一步筛选更多治疗白癜风的单味中药。

六味安消胶囊对慢传输型便秘大鼠肠道推进功能影响的实验研究

目的探究六味安消胶囊对慢传输型便秘(STC)大鼠肠道功能、排便量、肠神经递质及水通道蛋白(AQP)的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、六味安消胶囊组(30 mg/kg,40 mg/kg,50 mg/kg)及莫沙必利组;模型组、六味安消胶囊组及莫沙必利组采用复方地芬诺酯混悬液10 mg/(kg·d)灌胃,连续给药14 d,建立STC模型;模型建立后,六味安消胶囊组及莫沙必利组分别给予六味安消胶囊(30 mg·kg^(-1),40mg·kg^(-1),50 mg·kg^(-1))及莫沙必利混悬液1.5 mg/(kg·d)灌胃,对照组及模型组给予等体积0.9%Na Cl溶液灌胃,连续给药14 d。检测各组大鼠造模前、造模期及治疗期粪便数量及含水量;计算各组大鼠碳末推进率;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠结肠组织水通道蛋白1,3,4,8(AQP1,3,4,8)、干细胞因子及其受体(SCF/c-kit)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠碳末推进率、排便量及粪便含水量降低,模型组大鼠结肠AQP1、3、4、8表达升高,SCF、c-kit蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,六位安消胶囊组及莫沙必利组大鼠碳末推进率、排便量及粪便含水量升高,结肠AQP1,3,4,8表达降低,SCF/c-kit蛋白表达升高(P<0.05)。结论六味安消胶囊可改善STC大鼠肠道功能、排便数量及粪便含水量,其机制可能与改善AQPs蛋白及SCF/c-kit信号通路有关。

重组人干细胞因子-血小板生成素融合蛋白的表达及活性初步研究

目的研究重组人干细胞因子血小板生成素(SCFTPO)融合蛋白表达的最佳条件及其生物学活性。方法设计引物,利用RTPCR从胎肝细胞中扩增到SCF和TPO氨基端功能区片段,采用基因融合新策略将其融合成SCFTPO融合基因,克隆到pGEMT载体中,构建pET32a/SCFTPO融合基因原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)plysS中经异丙基βD硫代半乳糖(IPTG)诱导其高表达SCFTPO,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot检测。目的蛋白经包涵体变性,金属螯合层析纯化,透析复性,用细胞因子依赖细胞系MO7e进行细胞增殖实验。结果获得SCFTPO融合基因的高表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。Westernblot法鉴定表达正确,MTT法证明该融合蛋白具有细胞增殖活性,浓度为100ng/ml时刺激活性更强。结论表达并复性后的重组人SCFTPO融合蛋白具有刺激MO7e细胞生长活性。

脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白和干细胞因子基因表达

目的 研究大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白 (nestin)和干细胞因子 (SCF)基因表达的变化。方法 成年健康雌性SD大鼠 3 6只 ,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型 ,随机分为缺血 1.5h再灌注 2h、6h、12h、2 4h、2d、3d、7d、14d组和假手术组 ,每组 4只。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织nestin和SCFmRNA的表达。结果 假手术组皮质、纹状体和室旁区nestinmRNA表达很弱。缺血再灌注后nestinmRNA表达 ,皮质除 2h以外、纹状体除 2h、6h以外、室旁区除 2h、6h、14d以外各时间点均明显高于假手术组。假手术组皮质、纹状体和室旁区SCF表达很弱。缺血再灌注后SCFmRNA表达 ,皮质除 2h、6h、12h以外、纹状体除 2h、6h以外、室旁区除 2h、14d以外各时间点均明显高于假手术组。结论 脑缺血再灌注后SCFmRNA表达可能具有促进神经干细胞增殖作用。

疏肝和胃方对肝郁脾虚证功能性消化不良大鼠Cajal间质细胞的影响

目的探讨疏肝和胃方对肝郁脾虚证功能性消化不良(FD)大鼠Cajal间质细胞(ICCs)凋亡、干细胞生长因子受体(c-kit)表达的影响。方法40只SD大鼠采用随机数字表均分为对照组、模型组、莫沙组、疏肝组。除对照组外其余3组采用复合因素夹尾法制造肝郁脾虚证FD大鼠模型,为期14 d。造模后,上述4组分别予蒸馏水、蒸馏水、莫沙必利混悬液、疏肝和胃药液灌胃治疗14 d。比较各组体重、胃肠动力、ICCs凋亡率、c-kit表达。结果造模后对照组体重明显高于其余3组(均P<0.01),治疗后,模型组体重明显低于其余3组(均P<0.05)。与对照组比较,模型组胃排空率、小肠推进率明显下降(均P<0.01),莫沙组、疏肝组与对照组胃肠动力的差异无统计学意义(均P>0.05)。相较于对照组,模型组ICCs凋亡增多,ckit表达明显下降(均P<0.01);相较于模型组,莫沙组、疏肝组的ICCs凋亡明显减少(均P<0.05),莫沙组、疏肝组ICCs凋亡率与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论疏肝和胃方能够在一定程度上上调脾虚肝郁证FD大鼠c-kit表达,减少ICCs凋亡,缓解肝郁脾虚证FD大鼠胃肠动力障碍。

复方三维右旋泛酸钙糖浆对功能性消化不良大鼠的改善作用及机制研究

目的研究复方三维右旋泛酸钙糖浆(简称:复方糖浆)对功能性消化不良(FD)大鼠的改善作用机制。方法48只雄性SD大鼠随机分为6组:正常组,功能性消化不良模型组,复方糖浆高、中、低剂量组(2.7、5.4、10.8 g·kg^-1)及多潘立酮组(4 mg·kg^-1)。除正常组外,其余各组均采用夹尾刺激+不规则喂养+冰生理盐水灌胃复合因素造模。各组灌胃给药14 d后,称量大鼠体重并测定胃排空率和小肠推进率,ELISA法测定血清中胃泌素(GAS)、血管活性肽(VIP)水平;Western Blot法分别检测胃窦组织干细胞生长因子(SCF)、Cx43、c-kit及结肠组织AQP4、AQP8的蛋白表达水平。结果复方糖浆明显增加功能性消化不良大鼠体重、胃排空率及小肠推进率,提高血清胃泌素水平,降低血管活性肽水平,复方糖浆显著上调胃窦组织中干细胞生长因子、Cx43、c-kit蛋白表达及结肠组织中AQP4、AQP8蛋白表达。结论复方糖浆可通过上调胃窦组织中干细胞生长因子、Cx43、c-kit蛋白表达而调节胃肠运动功能,并通过上调结肠组织中AQP4、AQP8蛋白表达而改善腹泻症状,进而发挥其改善功能性消化不良作用。