人SCG10基因原核质粒构建及其重组蛋白表达

目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用GST-beads纯化诱导的融合蛋白,经Western blot印迹鉴定。结果 SCG10全长编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在BL21大肠杆菌中IPTG诱导融合蛋白的表达分子量为47 kDa,成功纯化出GST及GST-SCG10蛋白,Wstern blot检测到蛋白表达。结论构建了SCG10基因原核表达载体,鉴定了GST-SCG10融合蛋白表达。

癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性分析

目的探讨癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性。方法选取本院收治的38例耐药性癫痫患者作为观察组,同时选取18例神经外科减压或清创患者作为对照组,对其临床资料进行回顾性分析。结果观察组患者的SCG10及MAPK表达均明显高于对照组(P<0.05),且癫痫患者脑组织中SCG10及MAPK表达位于同一细胞上。结论耐药性癫痫患者脑组织中的SCG10及MAPK表达增加,且两者间的共同表达表明,耐药性癫痫的发生发展可能与SCG10及MAPK的相互作用有关。

SCG10基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-SCG10在HEK293细胞内定位。结果 SCG10全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小540bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为48kD。pEGFP-SCG10在细胞内定位以细胞浆为主,在细胞核少量表达。结论成功构建了SCG10全长基因真核表达载体,pEGFP-SCG10蛋白主要定位于HEK293细胞浆内。

SCG10通过促进淀粉样前体蛋白APP转运到细胞表面增加其α型加工

淀粉样前体蛋白(APP)的β切割所产生的Aβ阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)致病因子。APP的加工方式与特定的亚细胞区域相关,并受到多个与转运相关的因子的影响。我们实验结果显示SCG10直接与APP的胞内结构域KFFEQ基序相结合促进APP的α型加工过程。敲低SCG10导致α型加工产物s APPα和CTFα的减少,从而增加了Aβ1-40和Aβ1-42的量。增加SCG10的表达量,可以促进APP从高尔基体运往细胞表面,减少β切割,降低Aβ的量。在APPswe/PS1d E9转基因小鼠海马中增加SCG10的表达量能够减少该部位Aβ积累和淀粉样斑块形成。综上所述,这些结果表明SCG10在预防和治疗AD中有潜在的作用。

癫痫患者脑组织中SCG10的表达与耐药性的相关性分析

目的对癫痫患者脑组织中SCG10的表达进行分析,并探讨其与耐药的相关性。方法选取40例耐药性癫痫患者为观察组,40例神经外科减压或清创治疗的患者为对照组,对2组的SCG10表达进行观察,并分析其与耐药的相关性。结果观察组患者血清内SCG10水平明显大于对照组(P<0.05);MAPK水平亦明显高于对照组(P<0.05)。免疫荧光双标法显示SCGl0和MAPK表达在同一表达上。结论癫痫患者脑组织中SCG10的表达水平明显较高,通过对其观察能够明确患者病情,而SCG10及MAPK相互作用与疗效有一定相关性。

难治性癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其意义

目的了解难治性癫痫患者脑组织中SCG10和MAPK的表达,探讨其在难治性癫痫发生、发展中的作用。方法按随机化原则,在我们建立的难治性癫痫患者术后脑组织库中抽取36例患者的脑组织,用免疫组织化学分别检测SCG10和MAPK的表达,与16例对照组进行比较。并采用免疫荧光双标的方法,检测SCG10和MAPK在病例组中的表达情况。结果免疫组化检测到SCG10在实验组表达(0.4674±0.0258),高于对照(0.3405±0.0207),两组比较有显著性差异(P<0.05);MAPK在实验组表达(0.4217±0.0141),同样也高于对照组(0.3189±0.1422,P<0.05)。免疫荧光双标法,显示SCG10和MAPK表达在同一细胞上。讨论 SCG10与MAPK在难治性癫痫患者的脑组织中表达增加,以及它们的共同表达,提示两者的相互作用可能是难治性癫痫发生发展中的一个重要因素。

SCG10在癫痫苔藓纤维出芽中的作用

苔藓纤维出芽（mossy fiber sprouting．MFS）是癫痫后最重要的形态学改变之一．与痫性活动的反复自发性发作密切相关。MFS和突触重塑是难治性癫痫的主要病理基础，而MFS又是突触重塑的主要形式，在难治性颞叶癫痫患者标本和癫痫动物模型中普遍存在。MFS即海马齿状回颗粒细胞轴突侧支改变其原来的走行方向．

A型肉毒素重链干预对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白表达的影响

目的探讨人工重组A型肉毒素重链(Bo NT/A重链)对在体大鼠脊髓损伤局部生长相关蛋白表达的影响,为阐明Bo NT/A重链促神经突起再生机制提供依据。方法建立大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型并局部及鞘内给予Bo NT/A重链;对用药后不同时间局部骨髓组织进行双向电泳检测总体蛋白表达;选择生长相关蛋白-43(GAP-43)和颈上神经节蛋白10(SCG 10)进行蛋白印迹和免疫荧光检测以观察二者在Bo NT/A重链影响下的表达及分布。结果 (1)单侧腰髓离断损伤模型动物呈现明显单侧运动及感觉功能障碍;(2)脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可影响损伤局部蛋白表达谱变化:Bo NT/A重链可引起损伤局部蛋白点群在变化的基础上逆转或表达进一步增加,尤以MW位于35~45 k Da及18~25 k Da、等电点在5~7范围的蛋白点表现明显;(3)蛋白印迹和免疫荧光染色结果提示:Bo NT/A重链可促进p-GAP 43和SCG 10的表达(P<0.05),且p-GAP 43及SCG 10主要以损伤周围细胞阳性明显,胞浆及突起皆呈阳性。结论脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可促进脊髓损伤后选择性生长相关蛋白p-GAP 43和SCG 10的表达。