COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控

目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。

lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴调控胃癌SGC7901细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴对胃癌(GC)SGC7901细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT的调控作用。方法:收集2014年4月至2017年5月武汉商职医院普外科手术切除的GC组织(非坏死部分)和配对癌旁组织(距肿瘤组织>5 cm)标本38例,同时选取正常胃上皮细胞GES1及GC细胞系SGC7901、HGC27、BGC823、MKN45和MKN28。qPCR实验检测MALAT1、miR-141-3p在GC组织和细胞系中的表达水平,CCK-8和Transwell实验检测敲降MALAT1对SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB实验检测ZEB1、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。双荧光酶素报告基因验证MALAT1、miR-141-3p和ZEB1的靶向关系,CCK-8和Transwell实验检测MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴对SGC7901细胞生物学行为的影响。结果:MALAT1在GC组织和细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01)。敲降MALAT1显著抑制了SGC7901细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05或P<0.01);MALAT1与miR-141-3p、miR-141-3p与ZEB1均具有直接靶向关系;进一步研究表明,同时过表达miR-141-3p和MALAT1或ZEB1能够逆转miR-141-3p对SGC7901细胞生物学行为的抑制作用。结论:MALAT1通过靶向下调miR-141-3p对ZEB1的抑制作用,进而促进SGC7901细胞侵袭、迁移及EMT。

AZT对SGC7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和PCNA表达的影响

目的:研究端粒酶抑制剂3′-叠氮3′-脱氧胸腺核苷(AZT)对SGC 7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法:将处于对数生长期的SGC 7901胃癌细胞分为对照组及1.0 mmol.L-1AZT处理组,应用AZT 6 d后,采用MG-P-MY组合染色法检测SGC 7901胃癌细胞凋亡率,采用免疫组织化学EnVision法检测SGC 7901胃癌细胞Bax蛋白及PCNA的表达。结果:AZT组及对照组SGC 7901胃癌细胞凋亡率分别为(16.421±0.713)%和(3.366±0.271)%,AZT处理组SGC 7901胃癌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);对照组Bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率分别为(16.851±10.064)%和(63.332±22.767)%,AZT处理组Bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率为(47.389±18.042)%和(23.446±13.055)%,与对照组比较,AZT处理组Bax蛋白表达率明显增加(P<0.05),PCNA表达率明显降低(P<0.05)。结论:AZT能促进SGC 7901胃癌细胞Bax蛋白的表达,抑制PCNA表达,增加SGC 7901胃癌细胞凋亡。

抗CXCR4单克隆抗体对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨抗CXCR 4单克隆抗体12G5对SCG7901细胞的增殖和调亡的影响。方法应用台盼蓝排染法检测12G5(10μg/ml)对细胞存活的影响,绘制细胞生长曲线;通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果①12G5(10μg/ml)孵育细胞后24h,实验组的细胞存活率为(85.22±1.0)%,对照组为(98.06±1.9)%,二者差异具有统计学意义(P<0.05);②比较细胞凋亡率,实验组为(9.30±0.58)%,对照组为(3.32±0.16)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论12G5能在一定程度上抑制SCG7901细胞的增殖与调亡。