Lnc-NEAT1吸附miR-1224激活NF-κB通路促进SCI大鼠骨质流失

目的探讨长链非编码RNA富含核的丰富转录物1(Lnc-NEAT1)对脊髓损伤(SCI)大鼠骨质流失的调控机制。方法64只Wistar大鼠随机分为SCI组[脊髓横断(T10)全切术建立SCI,n=56]和假手术组(sham组)(仅切开皮肤即缝合,n=8)。随机选择48只SCI组的大鼠于术后10 d随机分为6组进行药物注射,包括SCI+Lnc-NEAT1过表达载体组(SCI+pcDNA-NEAT1组)、SCI+pcDNA阴性对照组(SCI+pcDNA-NC组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224拟似物组(SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic组)、SCI+pcDNA-NEAT1+mimic阴性对照组(SCI+pcDNA-NEAT1+mimic-NC组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+NF-κB抑制剂QNZ组(SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+QNZ组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+DMSO组。治疗10 d后通过micro-CT检测骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)。qPCR法检测Lnc-NEAT1、miR-1224、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、干扰素(IFN)-γ、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的表达。Western blot测NF-κB、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)的表达。荧光素酶基因报告实验检测Lnc-NEAT1和miR-1224的直接调控关系。结果与sham组比,SCI组的miR-1224表达水平降低(P<0.05),Lnc-NEAT1、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达量上调(均P<0.05)。与SCI+pcDNA-NC组相比,SCI+pcDNA-NEAT1组的miR-1224表达水平和BV/TV、Tb.N、Tb.Th的值都降低(均P<0.05),而Tb.Sp的值和Lnc-NEAT1、TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、sIL-2R、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达量上调(均P<0.05)。SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic组抑制了SCI+pcDNA-NEAT1组的上述效果(均P<0.05),但不影响Lnc-NEAT1的水平。SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+QNZ组进一步增加了SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic组的治疗效果,使BV/TV、Tb.N、Tb.Th的值都被上调(均P<0.05),而Tb.Sp的值和TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、sIL-2R、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达量都被抑制(均P<0.05)。另外证实,Lnc-NEAT1通过“分子海绵”机制直接抑制miR-1224的表达。结论Lnc-NEAT1通过抑制miR-1224激活NF-κB信号抑制SCI大鼠的骨丢失并减轻免疫炎症反应。