定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建

一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及

成人骨髓源性神经干细胞中nestin表达的实时定量RT-PCR检测

目的建立快速获取成人骨髓源性神经干细胞(Human adult bone marrow-derived neural stem cells,Md-NSCs)的方法,并对Md-NSCs中神经巢蛋白nestin的表达进行定量比较分析。方法抽取成人志愿者全骨髓,梯度离心分离成人骨髓基质细胞(human adult bone marrow stromal cells,hMSCs),贴壁培养法纯化及扩增hMSCs;以神经干细胞培养基体外诱导培养hMSCs成为成人骨髓源性神经干细胞(Human a-dult bone marrow-derived neural stem cells,Md-NSCs);以实时定量RT-PCR检测Md-NSCs中nestin基因的表达,以hMSCs作为对照组。结果hMSCs呈长梭形,贴壁生长,于体外诱导培养可快速有效地获取Md-NSCs,Md-NSCs不贴壁生长,由神经干细胞克隆组成神经球样结构;Md-NSCs中nestin基因的表达比hMSCs增高2.04×102倍。结论hMSCs经诱导分化成为Md-NSCs后细胞的生物特征发生显著改变,Md-NSCs高度表达神经巢蛋白nestin具有神经干细胞的特征,并非hMSCs的简单聚集成球。

SCL基因在干细胞疾病中的表达

SCL基因位于1号染色体短臂（1P34）（又称TAL－1或TCL－5），编码一种螺旋－环－螺旋类的转录因子，其功能与造血细胞生长调节、分化发育、白血病的发生有关。应用RT／PCR的方法，检测了ALL、ANLL和CML65例病人白血病细胞，31例骨髓增生异常综合征、41例再生障碍性贫血症和25例正常人外周血单个核细胞中SCL基同的表达情况，表达率分别为54．5％、60．9％、55．0％、35．5％、0％和0％。SCL基因在恶性干细胞疾病ALL、ANLL、CML和MDS中的高表达现象，提示该基因与白血病或恶性干细胞疾病的发生有一定的关系。

SCL基因在白血病和正常骨髓基质细胞中的表达

目的 初步了解干细胞白血病 (SCL)基因在白血病和正常骨髓基质细胞中的表达情况 .方法 通过长期体外培养扩增骨髓基质细胞 ,运用RT -PCR -ELISA检测SCL基因的表达 .结果 SCL表达于绝大多数CML、AML、CLL患者骨髓基质细胞中 ,部分正常骨髓基质细胞也表达SCL基因 .

实时荧光定量PCR法检测外周血中BCR/ABL基因表达在Ph+急性淋巴细胞白血病患者造血干细胞移植治疗中的应用

目的:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法定期检测费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者外周血中BCR/ABL融合基因表达的动态变化,为患者制订不同的治疗方案,以提高患者总生存(OS)率。方法:回顾性分析20例初治和难治复发Ph+ALL患者的临床资料,经过酪氨酸激酶抑制剂(TKI)+长春新碱+强的松(TKI+VP)或者酪氨酸激酶抑制剂+长春新碱+柔红霉素+强的松(TKI+VDP)等多种化疗方案诱导治疗,17例患者达到血液学完全缓解(HCR),3例未缓解(NR)。其中HCR患者中8例患者微小残留病(MRD)为阴性,3例患者选择自体造血干细胞移植(Auto-HSCT),在造血功能重建后均接受了TKI维持治疗至今;另5例MRD阴性患者、9例MRD阳性患者和3例NR患者均进行了异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)。所有患者分别在干细胞移植前和移植后1、2、3、6、9及12个月进行外周血BCR/ABL融合基因检测,评估患者的MRD。Allo-HSCT组患者造血重建后,均给予TKI口服干预治疗,其后基因检测持续阴性者,TKI口服干预治疗1年后停用。治疗期间如果监测MRD转阳则依据移植时间给予更换有效TKI药物或减停免疫抑制剂等治疗措施。结果:全组患者造血干细胞移植后均达到造血重建,粒细胞植活中位时间为14(11~24)d,血小板植活中位时间为17(13~52)d。随访至2020年12月,中位随访时间为52(3~111)个月。全组患者3年OS率为(61.1±11.7)%。Allo-HSCT组和Auto-HSCT组患者移植后3年OS率分别为(52.8±13.4)%和100.0%,组间比较差异无统计学意义(P=0.178)。移植前MRD阴性组和移植前HCR但MRD阳性组患者3年OS率分别为(87.5±11.7)%和(42.8±15.6)%,组间比较差异无统计学意义(P=0.065)。移植前NR的患者全部死亡。全组死于疾病复发5例,死于肺感染1例,死于Ⅳ度急性移植物抗宿主病(GVHD)1例。结论:对Ph+ALL患者依据BCR/ABL融合基因检测结果的动态变化选择Auto-HSCT或Allo-HSCT及术后分层干预治疗措施,可提高患者的OS率。

实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者造血干细胞移植后bcr-abl mRNA水平

目的评价实时定量 RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义。方法采用基于 TaqMan 探针的 Q-PCR 技术检测112例CML 患者 HSCT 后不同时间共316份骨髓标本 bcr-abl mRNA 的表达。bcr-abl mRNA 水平以内参基因abl 进行归一化。采用荧光原位杂交法(FISH)评估 HSCT 后是否达细胞遗传学完全缓解(CCyR)。结果 Q-PCR 实验可重复敏感度为5个拷贝。abl 及 bcr-abl 基因C_T 值的批内差及批间差均<2.0%。HSCT 后1个月开始持续处于 CCyR 状态的101例患者,中位跟踪时间为12(6～60)个月的289份标本表现为 HSCT 后各时间段均有一定数量患者可检测出 bcr-abl mRNA,总体上随着 HSCT 时间延长,中位水平逐渐降低。HSCT 后1个月中位 bcr-abl 水平为0.035%(0～0.406%),较本室资料初治 CML 慢性期患者中位水平降低3个对数级,3个月时为0.006%(0～0.683%),6个月开始降至0%(0～0.225%),移植6个月后标本最高 bcr-abl 水平为0.068%。8例患者 HSCT 后未达 CCyR 或遗传学复发时 bcr-abl 水平为0.12%～13.45%,其中5例患者遗传学复发前的1份标本(复发前1～2个月) bcr-abl 水平为0.09%～3.42%。9例持续 CCyR 患者 bcr-abl 水平曾经>0.090%,但随后均下降至0。2例急变期患者 HSCT 后1.6和3个月内持续 CCyR,但分别于1个月和1.5个月后进展为血液学复发,bcr-abl 水平亦从0及0.140% 分别急剧增至46.900% 和75.900%。结论 Q-PCR 技术精确、可靠,对CML 患者 HSCT 后有必要定期系列监测 bcr-abl 水平,以及时了解病情变化。对急变期患者需要更密切的监测。

全反式维甲酸对脐血粒-单系和红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的探讨脐血造血干祖细胞(hematopoietic stem-progenitor cell,HSPC)向粒-单系(colony form-ing unit-granulocyte-monocyte,CFU-GM)、红系(colony for mingunit-erythroid,CFU-E)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法①采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)和促红细胞生成素(EPO)分别诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM、CFU-E集落生成情况。②采用实时荧光定量PCR技术(fluorogenic quantitative reserve transcription polymerize chain reaction,FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。③结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果①人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达。②随时间延长,CFU-GMHOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱。而在CFU-E中,HOXB6-mRNA表达在第3天,第7天,第12天均持续表达。③与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论①在脐血CFU-GM、CFU-E祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一。②ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

白血病异基因造血干细胞移植后TCR Vβ亚家族基因谱的研究

目的 了解白血病病人异基因外周血干细胞移植后1年以上患者TCR VβT细胞免疫功能重建的情况。方法 采用 RT-PCR扩增5例CML和1例AML-M3a移植后（12-56个月）患者外周血的单个核细胞的 TCR Vβ 24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的表达。结果 经24个 Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现6例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5-22个亚家族基因。结论 移植后1年以上患者尽管CD3+T细胞已恢复,但外周血TCR Vβ亚家族基因谱的表达仍不完全,T细胞免疫功能仍未完全重建。

小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学

目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。

实时定量RT—PCR方法监测急性髓系白血病患者造血干细胞移植后AML1-ETO融合基因mRNA水平的临床意义

目的评价实时定量RT—PCR（Q—PCR）方法监测AML1-ETO（＋）急性髓系白血病（AML）患者异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后AML1-ETOmRNA水平的表达及其临床意义。方法采用基于TagMan探针的Q—PCR技术检测17例AML1-ETO（＋）AML患者allo—HSCT后不同时间骨髓标本AML1-ETOmRNA的表达。AML1-ETOmRNA水平以内参基因abl进行归一化。采用荧光原位杂交（FISH）法评估HSCT后是否达到细胞遗传学完全缓解（CCyR）。结果Q—PCR实验可重复敏感度为5个拷贝。在16例CCyR患者中，1例死于移植物抗宿主病（GVHD），1例死于感染，其余14例中位随访时间为268（70～811）d，HSCT后1个月（＋1月）AML1-ETO中位水平0（0～0．740），＋2月为0．026（0～2．900），＋3月为0．039（0～3．300）。移植时间超过12个月的5例患者中，中位随访685（385～811）d，4例仍呈AML1-ETO阳性，中位值0．078（0．003～0．120）。1例复发患者＋1月为0，＋2月为9．800，＋3月为5．600，＋110d血液学复发，AML1-ETOmRNA为390．000，＋382d死亡。结论1年内AML1-ETO持续低水平阳性不一定预示复发；对AMIJ1—ETO（＋）AML患者HSCT后定期动态监测AML1-ETO水平十分必要。

人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大肠杆菌中获得高效表达。

TGF-β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究

[目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和ag-grecan的合成,为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。[方法]TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选;RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、ColⅡ、Aggrecan的表达;Western-blot检测TGF-β1。[结果]RT-PCR结果显示:实验组(TGF-β1稳定转染组)的TGF-β1、FN、ColⅡ、Aggrecan的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01);Western blot检测实验组(TGF-β1稳定转染组)TGF-β1蛋白的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01)。[结论]成功分离培养脂肪干细胞;以脂质体介导法将TGF-β1目的基因成功转染ADSCs,转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多,表明转染TGF-β1基因可以促使ADSCs向软骨细胞方向分化,从而为软骨组织工程提供新的思路和方法。

FRIL蛋白体外维持脐血造血干/祖细胞的作用及细胞周期调控基因的表达

为探讨新的豆类凝集素(Flt3 receptor-interacting lectin,FRIL)体外维持脐血CD34^+细胞的作用以及维持过程中细胞周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达及意义,我们利用FRIL维持培养脐血CD34^+细胞,对其增殖曲线、细胞周期及集落形成能力进行常规分析,并用半定量RT-PCR法分别测定FRIL体外维持不同时间后脐血CD34^+细胞中周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达变化。结果显示,FRIL培养的CD34^+造血干/祖细胞的增殖趋势平缓,整个培养期间细胞增殖倍数不超过起始的3倍;14d之前,FRIL培养细胞的高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)形成集落数与FL组无差别,其后则维持高于FL的情况。细胞周期分析则显示,在28d的培养过程内,利用FRIL培养的细胞始终有80%以上维持在G0期;而周期调控基因HTm4及HTm4S在刚分离的脐血CD34^+细胞中的表达水平较高;但培养1d后,几乎检测不到HTm4基因的表达;培养3～14d,该基因的表达回升并持续维持在高水平。而HTm4S基因的表达在第7d达最高水平,其余时间基本呈稳定表达。转染HTm4和HTm4S,亚细胞定位结果显示HTm4主要定位于核周围,而HTm4S则定位于整个胞浆,由此可能导致它们功能的区别。以上结果提示,长期培养体现出FRIL在维持造血干/祖细胞多能性上的优势;

造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因表达的研究

目的探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因表达的情况及全反式维甲酸(ATRA)对HOXC4基因表达的影响。方法 (1)采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干细胞,观察人类脐血HSC经植物血凝素(PHA-M)诱导后,在培养过程第3、7、12天的淋巴细胞集落形成单位(CFU-TL)生成情况。(2)采用实时荧光定量PCR技术检测HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因的表达水平。(3)用RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXC4基因相对表达量,采用x±s表示HOXC4基因的变化情况。结果 (1)人脐血HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中,HOXC4基因呈规律的表达。(2)随培养时间推移,HOXC4基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显降低。(3)与正常组比较,ATRA可上调HOXC4基因的表达。结论 HOXC4基因在人脐血HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中呈现规律表达,提示HOXC4基因与人类造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程密切相关,是其调控基因之一。ATRA能显著上调HOXC4基因的表达。

骨髓增生异常综合征患者间充质干细胞SDF-1基因的表达

本研究探讨骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞(MSC)中的表达水平。采集MDS的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态并进行表型鉴定;以实时定量RT-PCR法检测间充质干细胞SDF-1基因和内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达水平,并与健康供者的表达水平相比较。结果发现,MDS患者骨髓间充质干细胞SDF-1基因的表达水平经GAPDH校正后为1.53±0.92,与对照组(5.51±0.99)相比差异非常显著(P<0.01)。结论:SDF-1基因在MDS患者骨髓间充质干细胞中的表达显著升高,SDF-1基因的异常表达可能影响MDS患者骨髓微环境的造血调控作用,是否可对MDS的发病机制及治疗提供新的思路值得进一步探讨。

腺病毒介导的NT-3基因在骨髓间质干细胞中的表达

目的 :研究腺病毒介导的NT 3基因在培养的大鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)中的表达。方法 :在 2 93细胞中培养扩增NT 3重组腺病毒 (adenovirusvectorforNT 3 ,Ad NT 3 ) ,测定病毒滴度 ,然后用Ad NT 3感染传代培养的MSCs ,RT PCR技术检测NT 3基因的表达。结果 :Ad NT 3扩增后获得了较高滴度的病毒 ,MSCs经Ad NT 3感染后有NT 3mRNA的转录。结论 :腺病毒介导的NT 3基因可转入培养的MSCs并高效表达 ,为NT 3基因治疗的研究奠定了基础。

全反式维甲酸对脐血粒-单系祖细胞HOXB6基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒-单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向粒单系增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-GM-HOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-GM祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

骨形态发生蛋白4在人胚胎卵黄囊造血过程中的表达

目的检测骨形态发生蛋白4（BMP-4）在卵黄囊造血期间的表达及其变化，探讨影响造血细胞早期形成、增殖和分化的调控机制。方法用药物流产受精3-8周胚胎57例，免疫组织化学SP法检测BMP-4、血管内皮生长因子受体2（KDR）、CD133、CD34在卵黄囊中的表达，RT-PCR分析转录因子Ihh、SCL、GATA-1、GATA-2和PU.1的表达。结果在16 d的卵黄囊血岛周边间质细胞BMP-4表达阳性，KDR低表达，CD34、CD133未见表达；21d时，BMP-4、CD34和CD133免疫反应产物均增加，染色增强；30d时，BMP-4、CD34、CD133和KDR表达最强，CD34阳性细胞沿血岛边缘形成血管样结构。45d时，BMP-4、CD34、CD133和KDR阳性细胞增多，中等程度染色；7周后，BMP-4、CD133、KDR、CD34阳性细胞明显减少，染色变弱。RT-PCR结果显示，不同时间的卵黄囊持续表达Ihh、SCL、GATA-1和GATA-2，而PU.1在16d时未见表达，此后有阳性表达。结论卵黄囊造血细胞的发育受BMP-4和转录因子的诱导和调节，卵黄囊造血不仅产生成血管血液干细胞，并能形成造血干细胞，说明卵黄囊不仅具有原始造血能力，而且可能具有长期造血能力。

As_2O_3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的:探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响.方法:①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况.②采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达.结果:①造血干祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达.②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达.结论:①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一.②As2O3能下调HOXB6基因的表达.

维甲酸诱导大鼠胚胎脑神经干细胞P450RAI基因的表达

目的 探索全反式维甲酸 (RA)对神经干细胞和分化细胞P4 5 0RAI表达的影响。 方法 从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,用EGF促进其增殖 ,再用不同浓度的RA单独处理 ,在不同时间用RT PCR测定神经干细胞及分化细胞的P4 5 0RAI表达水平。 结果 1μmol LRA处理神经干细胞 ,P4 5 0RAImRNA水平最高。 1μmol L时2h就可检测到神经干细胞P4 5 0RAImRNA的生成 ,4～ 12h达到高峰 ,随后迅速下降 ,2 4h几乎检测不到P4 5 0RAImRNA。间断给予RA ,P4 5 0RAI的表达随之下降。在EGF诱导生成的分化细胞中无P4 5 0RAI表达 ,而在RA处理的分化细胞中有少量表达。 结论 神经干细胞表达P4 5 0RAI对RA有浓度依赖性并需要RA的持续存在 ,随着神经干细胞分化为神经细胞 。