日本血吸虫SCP/TAPS基因家族的生物信息学分析和克隆表达

目的以黄蜂Vv Vesv5蛋白为检索源检索日本血吸虫EST数据库,对检索出的序列进行生物信息学分析,并挑选出有代表性的基因进行克隆表达,为日本血吸虫SCP/TAPS家族蛋白的功能研究打下一定的基础。方法利用生物信息学软件对检索出的日本血吸虫SCP/TAPS家族蛋白进行生物信息学分析,经PCR确定后,以AAW24579为代表进行进一步的研究,将其命名为SjVAL2。根据SjVAL2的序列设计引物,通过RT-PCR扩增出全长编码区域,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化,免疫印迹实验(Western-blotting)鉴定纯化的重组蛋白。结果日本血吸虫SCP/TAPS家族中至少有17个不同的蛋白成员存在,多序列比对分析发现它们初步可以分为3个不同的亚组。以日本血吸虫成虫cDNA为模板RT-PCR扩增出SjVAL2序列,PCR、双酶切及DNA测序均证实pET-28a(+)-SjVAL2重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌中获得高效表达,重组蛋白能识别日本血吸虫感染的小鼠血清,说明其具有免疫反应性。结论日本血吸虫SCP/TAPS家族中至少有17个不同的蛋白成员存在,其中SjVAL2基因可在原核表达系统中高效表达,为进一步研究该家族蛋白的功能打下基础。

家族性胆固醇结石患者肝组织HMGCR和SCP_2mRNA的表达

目的:研究家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者和非胆固醇结石患者肝组织HMGCoA还原酶(HMGCR)、固醇携带蛋白2(SCP2)基因mRNA的表达情况,进而明确二者在胆石形成中的作用.方法:选取2003-08/2004-08天津市南开医院外科住院病例90例,均取得患者及家属知情同意,其中家族遗传性胆囊胆固醇结石患者28例,非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者30例,非胆固醇结石患者32例,术中肝活检,行肝组织总RNA提取,逆转录反应合成cDNA,设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增HMGCR和SCP2基因的目的片段,检测肝组织mRNA的表达水平的不同.结果:家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组HMGCR,SCP2mRNA表达水平较非胆固醇结石组升高;其中HMG(:RmRNA表达在家族遗侉}生胆固醇结石组为1.9269±0.2134,非家族遗传性组为1.9791±0.2524,二者均高于非胆固醇结石组0.7730±0.1530,差异有显著性(P<0.05);SCP2mRNA表达在家族遗传性胆固醇结石组为0.8908±0.1649,非家族遗传性组为0.7503±0.1004,二者均高于非胆固醇结石组0.5205±0.1900,差异有显著性(P<0.05);家族遗传性胆固醇结石SCP2mRNA表达水平较非家族遗传性胆固醇结石组升高,差异有显著性(P<0.05),而HMGCRmRNA在家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组两组间无统计学差别.结论:胆囊胆固醇结石患者肝组织HMGCR,SCP2mRNA表达水平升高是胆囊胆固醇结石形成的重要原因.

家族性胆固醇结石病人SCP_2基因表达的研究

目的研究具有家族性胆囊胆固醇结石病人、非家族性胆囊胆固醇结石病人和非结石病人肝组织 SCP_2基因的表达情况。方法应用逆转录-聚合酶链反庸(RT-PCR)技术,研究了28例具有家族遗传性胆囊胆固醇结石病人、30例非家族性胆囊胆固醇结石病人和32例非胆固醇结石病人肝组织 SCP_2 mRNA 的表达水平;同时应用 Western blotting 法分别检测三组病人肝组织中 SCP_2蛋白含量变化;并采用生化技术行胆汁脂质分析,计算成石指数。结果家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组 SCP_2 mRNA 表达水平较非胆固醇结石升高,差异有显著性;家族遗传性胆固醇结石SCP_2 mRNA 表达水平较非家族性胆固醇结石升高,差异有显著性:SCP_2蛋白水平的变化与 SCP_2mRNA 变化一致,差异有显著性。结论胆囊胆固醇结石病人肝组织 SCP_2mRNA 表达水平升高,SCP_2基因表达上调可能是胆囊胆固醇结石形成的重要原因;SCP_2基因表达水平上调则可能在遗传中起一定作用。