整合网络药理学和体外实验探究夏枯草-半枝莲药对治疗乳腺癌的作用及机制

目的采用网络药理学和体外细胞实验探究夏枯草-半枝莲药对抗乳腺癌的作用机制。方法运用中药系统药理学数据库与分析平台筛选出夏枯草-半枝莲药对的有效成分和靶点;利用GeneCards、OMIM数据库找到乳腺癌靶点,进而构建药物-活性成分-关键靶点网络和蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;运用R语言进行GO功能和KEGG通路富集分析以及生存分析;将筛选出的活性成分和核心靶点进行分子对接验证;采用CCK-8法检测细胞活力;EdU、流式实验检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot法检测p-AKT1、AKT1、β-catenin和c-MYC的蛋白表达水平。结果通过数据分析共筛选出有效成分36个,交集靶点105个,其核心成分是槲皮素、木犀草素、山奈酚、汉黄芩素、黄芩素;通过PPI和生存分析得出其关键靶点是AKT1、ESR1、CASP3、MYC;GO分析共包含4303条富集结果,KEGG分析共包含232条通路;分子对接显示核心成分与关键靶点均具有较强的结合能力。细胞实验证明,核心活性成分槲皮素可以抑制乳腺癌细胞的增殖并促进其凋亡(P<0.05),下调p-AKT1、β-catenin和c-MYC蛋白的表达水平(P<0.05)。结论夏枯草-半枝莲药对中活性成分槲皮素可能通过AKT1/β-catenin信号通路来发挥作用,为其治疗乳腺癌的作用机制研究提供了科学参考。

白花蛇舌草-半枝莲药对治疗胃癌的物质基础和作用机制研究进展

胃癌是消化系统的常见恶性肿瘤之一,好发于中老年人群。中医认为胃癌是由津亏热结、癌毒胶结于胃腹而形成的一种瘤瘕,在临床中常用清热解毒类药物进行治疗。白花蛇舌草-半枝莲药对具有清热解毒、活血化瘀、消痈散结、抗炎止痛的作用,可治疗胃癌。现代药理学研究证实,白花蛇舌草-半枝莲药对可通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、抑制血管生成、改善免疫微环境、下调端粒酶活性等途径起到抗胃癌的作用。本文对白花蛇舌草-半枝莲药对配伍后活性成分抗胃癌的机制进行综述,为白花蛇舌草-半枝莲药对的临床用药和抗胃癌新药研发提供理论依据和参考。

基于网络药理学和分子对接的半枝莲黄酮类成分治疗肝细胞癌的机制研究

目的网络药理学方法探究半枝莲黄酮类成分治疗肝细胞癌的作用机制及分子对接技术验证。方法通过TCMSP、SwissTargetPrediction、OMIM、BioGPS等数据库筛选黄酮类成分、肝特异性靶点;构建肝特异性靶点蛋白互作网络、筛选核心模块和基因;进行肝特异性靶点生物通路富集分析;将黄酮类成分和核心蛋白靶点在SwissDock平台进行分子对接。结果黄酮类成分36个,肝特异性靶点135个,核心基因4个;关键生物通路均与肝细胞癌的增殖抑制相关。黄酮成分与核心靶点有较强的结合活性。结论半枝莲黄酮类成分抗肿瘤作用可能是通过多成分-多靶点阻滞肝癌细胞的有丝分裂G1/S细胞周期,抑制肝细胞癌增殖。

半枝莲二萜类化学成分及药理作用研究进展

半枝莲是一种传统抗癌中药,从中分离得到的二萜类化合物对人鼻咽癌、人口腔表皮样癌、人直肠癌等表现出较强的细胞毒活性,同时也具有较好的抗病毒、抗氧化等活性。本文对半枝莲中二萜类化合物,尤其是“同物异名”、“同名异物”进行了梳理,从化学成分、药理活性方面进行了综述,希望能对半枝莲中二萜类化合物的更一步深入研究提供理论基础。

基于网络药理学研究半枝莲抗三阴性乳腺癌的作用机制

目的利用网络药理学探讨半枝莲治疗三阴性乳腺癌的作用机制。方法本研究采用网络药理学方法,主要包括靶点预测、网络构建和功能富集。从中药系统药理学数据库与分析平台中获取“半枝莲”所有化合物靶点,并与其活化物进行匹配,发现木犀草素和汉黄芩素为主要相关化合物。构建蛋白-蛋白相互作用网络获得相关靶点信息,构建半枝莲与三阴性乳腺癌相关靶点网络,分析半枝莲抗三阴性乳腺癌的关键信号通路。结果共获得15个活性化合物的104个靶点。网络分析得出10个半枝莲治疗三阴性乳腺癌的关键靶点。功能富集分析表明,半枝莲可能通过协同调节多种生物学相关信号通路,对三阴性乳腺癌产生治疗作用。结论半枝莲治疗三阴性乳腺癌的药理机制可能与其协同调节细胞凋亡、细胞周期、分化、增殖、迁移、侵袭和血管生成密切相关。

基于网络药理学的半枝莲治疗膀胱癌相关作用机制研究

目的通过网络药理学方法探讨半枝莲治疗膀胱癌的作用机制,为临床治疗提供理论依据。方法利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)数据库获得半枝莲化学成分及对应作用靶点基因,利用GeneCards数据库获得膀胱癌相关靶点基因,利用Cytoscape软件构建半枝莲“成分-靶点-疾病”三者相互关系网络,采用STRING数据库对半枝莲作用于膀胱癌的潜在作用靶点进行蛋白相互作用网络分析并筛选关键靶点。利用在线工具Metascape对共同靶点进行基因本体功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果半枝莲含29个活性成分、228个靶基因,膀胱癌含4645个靶基因,共同靶点190个,关键靶点可能为AKT1、TP53、JUN、TNF、EGFR、MAPK1等。KEGG富集分析主要涉及癌症途径、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路等。结论本研究借助网络药理学方法初步预测了半枝莲通过多靶点、多通路治疗膀胱癌,为临床治疗提供新靶点和新思路。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

基于网络药理学探讨半枝莲-龙葵治疗结直肠癌的作用机制

目的:基于网络药理学探讨半枝莲-龙葵药对治疗结直肠癌(CRC)的潜在作用机制。方法:利用TCMSP筛选出半枝莲-龙葵有效成分并预测靶点;运用GeneCards检索出CRC相关靶点;通过STRING建立药物与疾病交集靶点的PPI网络模型,运用Metascape对靶点进行GO和KEGG富集分析。结果:得到药物有效成分33种、靶点230个,CRC靶点1 341个,半枝莲-龙葵治疗CRC的主要成分为槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、β-谷甾醇、黄芩素,作用的核心靶点为PTGS2、AKT1、HSP90AB1、PTGS1、BCL2,主要参与的生物学通路为PI3K-Akt信号通路、NF-κB信号通路、HIF-1信号通路、FoxO信号通路等。结论:半枝莲-龙葵的成分槲皮素、木犀草素、汉黄芩素可能作用于PTGS2、AKT1、HSP90AB1、PTGS1、BCL2等靶点,通过PI3K-Akt信号通路、NF-κB信号通路、HIF-1信号通路等发挥治疗CRC的作用。

基于网络药理学和分子对接研究“白花蛇舌草-半枝莲”药对治疗胰腺癌的作用机制

目的:通过网络药理学、分子对接方法研究“白花蛇舌草-半枝莲”药对对胰腺癌的潜在药理作用靶点及作用机制,为基础研究及临床应用提供依据。方法:利用TCMSP数据库,查找到“白花蛇舌草-半枝莲”药对的药物活性成分,并对其进行靶点预测,预测数据库为SwissTargetPrediction。同时,应用OMIM、DisGeNet、DRUGBANK及GeneCards数据库获取胰腺癌疾病靶点,利用Uniprot数据库对靶点进行校正;并利用VENNY2.1网站绘制韦恩图,取得化合物-疾病交集。分别使用Cytoscape3.7.2、STRING数据库平台构建活性成分-靶点网络图和共有靶点蛋白互作网络(PPI),通过相互关系大小来确定核心靶标。利用DAVID对关键靶点进行GO和KEGG富集分析。对主要活性成分与靶点,使用AutoDock软件进行分子对接。结果:“白花蛇舌草-半枝莲”药对共收集到36个有效成分,网络分析得到57个靶点基因与胰腺癌密切相关,这些靶点主要涉及激酶活性的正向调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、细胞增殖的正调节,并主要富集在PI3K-Akt信号通路上。分子对接结果表明,“白花蛇舌草-半枝莲”药对主要活性成分与AKT1和TNF具有良好的结合能力。结论:“白花蛇舌草-半枝莲”药对治疗胰腺癌具有多成分、多靶点、多途径的特点,为基础研究和临床应用提供了科学依据。

半枝莲多糖不同给药方式对大鼠肝癌模型血管生成的影响

目的:观察半枝莲多糖(SBPS)不同给药方式对肝癌组织中血管生成的影响。方法:建立裸鼠肝癌模型,随机分为对照组及给药组(口服SBPS组、肝动脉灌注SBPS组),给药组分别灌胃或经肝动脉灌注SBPS提取物(100mg/kg),间隔1周给药1次,连续给药3次,末次给药24h后检测荷瘤大鼠抑瘤率,通过免疫组化分析肿瘤组织微血管密度(MVD)并经qPCR和Western blot方法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达水平。结果:较对照组,给以SBPS后大鼠抑瘤率显著提高(P<0.05),且经肝动脉灌注方式高于灌胃组(P<0.01);MVD实验结果显示,较灌胃组,经肝动脉灌注SBPS提取物对肝癌组织中微血管的生长抑制作用更显著(P<0.01);此外,较灌胃组,经肝动脉灌注SBPS提取物更显著地降低VEGF的mRNA和蛋白水平(P<0.01)。结论:SBPS能显著抑制大鼠肝癌肿瘤的生长及肝癌组织血管生成,其机制可能与下调VEGF的mRNA和蛋白表达水平相关,且肝动脉灌注给药效果优于口服。

基于网络药理学和分子对接研究“白花蛇舌草-半枝莲”药对治疗前列腺癌的作用机制

目的:通过网络药理学、分子对接方法研究“白花蛇舌草-半枝莲”药对对前列腺癌的潜在药理作用靶点及作用机制,为基础研究及临床应用提供依据。方法:利用TCMSP数据库,查找到“白花蛇舌草-半枝莲”药对的药物活性成分,并对其进行靶点预测,预测数据库为SwissTargetPrediction。同时,应用DisGeNet、GeneCards、OMIM及DRUGBANK数据库获取前列腺癌疾病靶点,利用Uniprot数据库对靶点进行校正;并利用VENNY 2.1网站绘制韦恩图,取得化合物-疾病交集。分别使用Cytoscape3.7.2、STRING数据库平台构建活性成分-靶点网络图和共有靶点蛋白互作网络(PPI),通过相互关系大小来确定核心靶标。利用DAVID对关键靶点进行GO和KEGG富集分析。对主要活性成分与靶点,使用AutoDock软件进行分子对接。结果:“白花蛇舌草-半枝莲”药对共收集到33个有效成分,网络分析得到38个靶点基因与前列腺癌密切相关,这些靶点主要涉及信号转导、凋亡过程的正向调控、蛋白酪氨酸激酶活性,并主要富集在PI3K-Akt信号通路上。分子对接结果表明,“白花蛇舌草-半枝莲”药对主要活性成分与ESR1、CCND1和SRC具有良好的结合能力。结论:“白花蛇舌草-半枝莲”药对治疗前列腺癌具有多成分、多靶点、多途径的特点,为基础研究和临床应用提供了科学依据。

基于网络药理学方法探讨黄芪-半枝莲抗结直肠癌的作用机制

目的基于网络药理学分析方法探讨黄芪-半枝莲抗结直肠癌的有效成分及分子机制。方法运用中药药理学分析平台数据库(TCMSP)检索黄芪与半枝莲的有效成分及作用靶点,通过GeneCards数据库等筛选结直肠癌相关靶点,运用Cytoscape(Version 3.9.1)软件构建药物-成分-潜在靶点网络关系图。通过String数据库平台构建蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图,并用Metascape数据库对潜在靶点进行功能和信号通路富集分析。结果通过数据库筛选出黄芪有效成分17种,半枝莲有效成分28种,黄芪-半枝莲与结直肠癌靶点交集共24个潜在蛋白靶点。基因本体论(gene ontology,GO)富集分析显示黄芪-半枝莲主要与DNA损伤、细胞凋亡、调节酶活性等生物学功能相关,京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析显示主要通路包括磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等。结论通过网络药理学分析方法体现了黄芪-半枝莲抗结直肠癌的有效成分及潜在作用机制,黄芪-半枝莲可能通过多种成分、多个靶点、多种途径干预结直肠癌,为黄芪-半枝莲治疗结直肠癌提供理论依据。

半枝莲抑制肿瘤血管生成的作用及其机制研究

背景与目的:以血管再生作为靶点的诸多化学合成药物在有效抑制血管生成的同时具有不可抵抗的副作用,近年来国内外都在致力于从天然药物中开发肿瘤血管生成阻断剂。作为传统抗癌有效药物半枝莲,其阻断血管生成的作用研究少见报道。本实验拟探讨其对肿瘤血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法:采用Matrigel栓、原代人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheialcell,HUVEC)建立体内外血管生成模型,观察半枝莲对血管生成的影响;通过Transwell小室趋化实验检测半枝莲对宫颈癌细胞HeLa培养上清诱导内皮细胞迁移能力的影响;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测半枝莲对HeLa细胞血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平的影响。结果:半枝莲能明显抑制Matrigel栓内微血管的形成;体外小管形成实验发现,20%、40%半枝莲含药血清组小管形成数为(5.6±1.1)、(1.0±0.7),与同浓度空白血清组(9.8±1.3和13.4±1.1)相比有显著性差异(P值分别为0.001、0.000)。经20%、40%半枝莲含药血清处理后内皮细胞迁移数分别为(19.75±2.63)、(14.00±2.58),明显少于同浓度空白血清组(24.25±2.06和26.50±4.65)(P值分别为0.038、0.006)。40%含药血清作用24、48h后HeLa细胞VEGF表达量分别为(138.67±9.50)、(93.84±41.11),与空白血清组(195.82±2.43和193.68±18.37)相比具有显著性差异(P值分别为0.006、0.036)。结论:半枝莲能有效抑制肿瘤血管生成,其机制可能与阻断内皮细胞迁移、下调VEGF蛋白表达有关。

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.

半枝莲多糖提取工艺及其免疫活性初步研究

目的:优选半枝莲多糖水提取工艺,并对半枝莲多糖进行免疫活性研究。方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以多糖得率为考察指标,选定温度、时间、提取次数和固液比四因素进行L9(34)正交试验。采用环磷酰胺复制方法构建免疫抑制小鼠动物模型,通过腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验以及血清溶血素抗体生成实验,考察半枝莲粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。结果:在实验设计水平范围内,水提取最佳工艺条件为温度100℃、提取次数3次、时间3 h、固液比1∶14。该工艺条件下半枝莲多糖得率为1.46%,多糖含量为53.25%。在实验浓度范围内,半枝莲多糖对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能未见明显增强效果;大剂量(300 mg/kg)半枝莲多糖能显著提高血清溶血素抗体水平,与是否脱蛋白无关。结论:该优化工艺可用于半枝莲多糖的提取,大剂量半枝莲多糖具有一定的免疫活性。

清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H_(22)细胞的作用及免疫学机制比较

【目的】比较清热解毒中药和补益类中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制。【方法】选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药,并与补益代表药黄芪进行比较;将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组)。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天,冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、 15、15 g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,连续12 d;热休克组小鼠以43℃热处理20 min,每4天1次,共3次;模型组不予任何处理。12 d后处死小鼠,分别抽取腹水制片,光镜下观察细胞形态,并采用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8+T细胞表达。【结果】冬凌草组、半枝莲组和热休克组见腹水肝癌H22细胞大量坏死和凋亡,黄芪组对肿瘤细胞形态无明显影响;冬凌草组和半枝莲组腹水中CD4+、CD8+表达均升高,而热休克组则主要是CD8+表达升高,黄芪组以CD4+表达升高为主。【结论】清热解毒中药可致小鼠腹水肝癌H22细胞坏死和凋亡,机制可能与其提高细胞免疫功能,从而增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力有关。黄芪未见有直接杀伤肿瘤细胞的作用,其抗肿瘤作用可能主要是通过提高CD4+的表达而实现的。

半枝莲多糖对C26荷瘤小鼠caspase-3,8,9活性的影响

目的观察半枝莲多糖(SPS)对C26荷瘤小鼠caspase-3,8,9活性的影响。方法通过腋下接种C26结肠癌细胞建立小鼠移植瘤模型,SPS作用10 d后,根据肿瘤重量计算抑瘤率评价SPS对肿瘤生长的影响,分光光度法检测肿瘤组织中caspase-3,8,9活性。结果与模型组比较,SPS可以抑制肿瘤的生长,提高肿瘤组织中caspase-3和caspase-9的活性,而caspase-8活性没有明显改变。结论 SPS可能通过活化caspase-9,进而激活caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

半枝莲多糖对肝癌细胞SMMC7721生长抑制及机制的研究

【目的】研究半枝莲多糖(Scutellaria barbata polysaccharides,SBP)对肝癌细胞SMMC7721生长的抑制及相关机制。【方法】将不同浓度SBP作用于SMMC7721肝癌细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测半枝莲多糖对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的抑制作用;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)与转录因子E2F1 mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测CDK2与E2F1蛋白表达。【结果】SBP对肝癌细胞SMMC7721具有明显的生长抑制作用,其中10、2.5μg/mL SBP组作用显著,均可使CDK2与E2F1 mRNA和蛋白表达下调。【结论】SBP对肝癌细胞SMMC7721具有增殖抑制作用,其机制可能与CDK2和E2F1表达下降有关。

半枝莲多糖的分离、纯化及其理化性质

唇形科植物半枝莲全草的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析得纯品半枝莲多糖(S-BP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。SBP的比旋度为[α]_D^(20)=+26.2°,不含氮,分子量13000,具有890cm^(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,SBP含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其克分子比为1.14:1.50:0.20:0.75:1.0:2.18。

半枝莲多糖提取工艺优化

以半枝莲为原料,多糖得率为技术指标,研究超声波协同复合酶法提取半枝莲多糖的工艺,分别对pH、酶量、料液比、超声时间、酶解温度进行单因素试验,然后进行正交试验优化。试验确定的最佳工艺条件为pH 4.5、复合酶用量0.025 g、料液比1∶60(m∶V)、超声时间15 min、酶解温度50℃,该条件下多糖得率为2.166%。用超声波协同复合酶法提取半枝莲多糖具有得率高、省时、有效成分破坏少及提取结果稳定等特点。