shRNA沉默RAGE基因对骨性关节炎SD大鼠软骨细胞外基质代谢的影响

目的研究RAGE基因在骨性关节炎形成中的作用,探讨其对骨性关节炎SD大鼠软骨细胞外基质代谢的影响。方法通过构建RAGE基因的shRNA表达载体,沉默RAGE基因在骨性关节炎SD大鼠软骨细胞的表达,采用Western blot分别检测空白对照组、空载组、shRNA沉默组中RAGE、p-p38 MAPK、MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5的蛋白水平。结果与空白对照组和空载组(Rc)相比,R1、R2、R3、R4的RAGE、p-p38MAPK、 MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5蛋白表达水平显著下降(P<0.05);RAGE、p-p38MAPK和MMP-13的蛋白水平在空白对照组和空载组(Rc)间差异无统计学意义;RAGE、ADAMTS-4和ADAMTS-5的蛋白水平在空白对照组和空载组(Rc)间差异有统计学意义(P<0.05)结论shRNA沉默RAGE基因表达对骨性关节炎SD大鼠软骨细胞外基质代谢有明显的抑制作用。

二烯丙基二硫对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞的影响,除空白对照组外,其余各组加入IL-1β(10 ng/m L)诱导24 h后换DADS处理,通过CCK8实验、平板克隆实验检测增殖能力,Western blot实验检测MMP13、TIMP1和CollagenⅡ蛋白表达水平。结果发现:12.5和25μmol/L DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞有增殖作用(P<0.05),50和100μmol/L DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞有抑制作用(P<0.05);12.5和25μmol/L DADS显著增加IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞克隆集落形成能力(P<0.05),50μmol/L DADS显著抑制IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞克隆集落形成能力(P<0.05);DADS能显著抑制MMP13的表达,增加TIMP1和CollagenⅡ的表达。以上结果提示DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞具有双向调节作用,25μmol/L DADS保护关节软骨细胞的分子机制可能与DADS显著抑制MMP13的表达,增加TIMP1和CollagenⅡ的表达相关。