贯筋藤酶解核桃分离蛋白及其体内抗疲劳作用

为了研究核桃蛋白酶解物的抗疲劳作用,为其功能性产品的开发和利用提供科学依据。本文以超临界萃取的核桃粕为原料,提取核桃分离蛋白(WPI),使用贯筋藤蛋白酶酶解WPI,以水解度为指标,研究最佳酶解条件制备核桃肽,并研究不同分子量的核桃蛋白酶解物对小鼠运动性疲劳的缓解作用。将小鼠随机分为五组,每日经口灌胃受试样品,干预周期为一个月,最后进行负重及力竭游泳实验,测定血清尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、肝糖原(HG)、肌糖原(MG)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。SDS-PAGE凝胶电泳表明贯筋藤蛋白酶对WPI有明显的降解作用;单因素实验结合响应面试验表明,当料液比为9:100、pH9.6、酶添加质量9.4%、酶解时间180 min、酶解温度63℃时,水解度最高达30.1%;HE染色显示,使用贯筋藤蛋白酶提取的酶解物对小鼠无任何毒副作用;与其他组相比,分子量小于3000 Da的核桃蛋白酶解物干预小鼠的LA和BUN含量有所降低,HG和MG含量提高,延长负重游泳时间较为显著(P<0.05),核桃蛋白酶解物干预的各组小鼠血清中SOD酶、GSH-Px酶活性显著提高(P<0.05)。表明核桃蛋白酶解物可以缓解小鼠运动性疲劳,而小分子量的核桃蛋白酶解物效果更显著,这可能是通过调节体内抗氧化活性实现的。

山药中黏液蛋白的提取与相对分子质量的探究

以铁棍山药为试验材料,采用单因素试验与正交试验探究从山药全粉中提取黏液蛋白的最佳提取条件,并采用变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定黏液蛋白的相对分子质量。结果表明,山药黏液蛋白的最佳提取剂为异丙醇,最佳提取温度为42℃,最佳料液比为1∶4,得率为3.00%。电泳法分离山药黏液蛋白两条带,A带相对分子质量为13.11 kD,B带相对分子质量为36.00 kD。

成都地区SD大鼠参考值范围的探讨(一)——体重和主要脏器正常参考值

目的:建立本室实验动物正常生理数据的历史性对照,是评价毒理学重要的基础工作之一。方法:收集整理了本实验室近1年来30d喂养试验320只SD大鼠的相关数据,用PEMS软件统计了体重、进食量、食物利用率和脏器系数等的均值和95%的上下限值。结果:在本室饲养条件下,离乳鼠喂养30d后,雌雄鼠体重分别为185.0g±12.0g和232.1g±19.1g,雌雄鼠在30d内总增重分别为158.7g±19.8g,114.6±11.2g;雌雄鼠的食物利用率分别为36.6%±9.8和28.6%±6.2,体重及脏器等指标在雌雄鼠间均存在明显差异(P<0.05)。结论:该参考值在评价毒理学工作具有实际应用价值。

一种蚓激酶活性成分的分离纯化及溶栓活性研究

目的从蚓激酶冻干粉中分离纯化具有溶栓活性的蛋白质。方法用柱层析的方法对蚓激酶冻干粉进行分离;采用SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳进行纯度检查和分子量测定;通过大鼠颈总动脉血栓模型和琼脂糖-纤维蛋白平板法进行体内外溶栓活性的考察。结果蚓激酶冻干粉中分离得到了一种具有溶栓活性的蛋白质。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度检查为单一条带,其分子量为29580Da;通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得其单位活性为79715.51U/mg(以尿激酶为对照);在大鼠颈总动脉血栓模型中,在相同剂量(1mg·kg-)1下,与PBS对照组相比,溶栓蛋白质组的平均栓重显著性减轻(P<0.01);与尿激酶对照组比较,但无显著性差异,干重有极显著性差异(P<0.01),与蚓激酶冻干粉组比较,湿重有显著性差异(P<0.05)、干重有极显著性差异(P<0.01)。结论本实验从蚓激酶冻干粉中分离纯化得到了一种溶栓活性很强的蛋白质。

Tricine-SDSP-AGE电泳分析小分子多肽

研究旨在解决常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对一些小分子多肽进行电泳分析过程中极易扩散丢失,常无着色带显示等问题。实验采用不同类型胶来电泳分析低分子量多肽,比较Tricine SDS PAGE电泳分析小分子多肽时的聚丙烯酰胺浓度和交联度,为小分子多肽的分析与鉴定提供快速准确的条件。

SD大鼠30d喂养试验正常参考值的探讨

[目的]探讨SD大鼠30 d喂养试验体重、脏器重量和食物利用率各指标的参考值范围。[方法]收集本实验室用于30 d喂养试验的SD大鼠体重、脏器重量和食物利用率等指标进行分析。[结果]雄鼠的增重、进食量和食物利用率高于雌鼠;脏器绝对重量雄鼠高于雌鼠,肝、肾脏器系数性别间差异无统计学意义。[结论]雄性生长发育速度快于雌性,各指标95%参考值范围与文献报道基本一致。

菊芋可溶性蛋白的提取及其分子质量的测定

利用磷酸缓冲液提取菊芋可溶性蛋白,采用单因素实验和正交实验研究提取工艺条件,确定的提取条件为:料液比(w/v)1∶40、处理时间4h、处理温度40℃、pH值8.0。在此条件下,蛋白质平均提取率为14.7mg/g。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定所提菊芋蛋白质的分子质量,结果显示其分子质量介于20.9-69.2ku之间。

大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离体系的建立

为建立和优化大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离技术,从凝胶的浓度、凝胶中乙二醇的使用、上样缓冲液中甘油的浓度、上样量、染色方法等多个方面对Tricine-SDS-PAGE分离效果进行比较研究。结果显示:凝胶质量分数T为18%、交联度C为5%并加入30%(体积分数)乙二醇能分离分子质量低至1.7 ku的大豆多肽,在含30%甘油的上样缓冲液中大豆酶解肽能得到较好的分离,上样量为20μg的分离效果较理想,考马斯亮蓝G-250染色方法能提高大豆低分子多肽电泳的分辨率,同时利用改进的TricineSDS-PAGE电泳技术对不同蛋白酶酶解液的分子质量分布进行了分析。研究结果表明,通过优化的TricineSDS-PAGE电泳技术能够获得较高分辨率的大豆蛋白酶解肽电泳图谱。

厚朴种子蛋白质成分分子量测定

目的:测定厚朴种子蛋白质成分的分子量,并由电泳图谱鉴别其品种。方法:应用SDS-PAGE技术进行研究。结果:不同品种的厚朴其SDSPAGE图谱存在明显差异,并由此确定各样品特征蛋白质的分子量。结论:清晰的电泳图谱如分子量数据为厚朴的鉴别提供依据。

胡萝卜愈伤组织细胞中两个重力相关酯酶的特性

在从胡萝卜愈伤组织细胞中分离出两个与重力作用相关的酯酶（ｇｒＥＳＴ１ 和ｇｒＥＳＴ２）后（ 蔡伟明等１９９８） ，对这两个酯酶的性质作了进一步研究。发现它们具有非常独特的抗ＳＤＳ的特性。脱氧胆酸盐对它们的活力有部分的抑制作用。β苯丙酸、ＡｇＮＯ３ 和ＣｕＳＯ４ 对它们的活力没有抑制作用。抗坏血酸和半胱氨酸对它们的活力有抑制，特别是半胱氨酸有明显的影响。分别加去污剂脱氧胆酸盐、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００ 和ＳＤＳ的非变性电泳测得ｇｒＥＳＴ１ 和ｇｒＥＳＴ２ 的分子量分别在４９ ～６６ ｋＤ 和４３ ～５９ ｋＤ 范围附近。它们的等电点分别约为ｐＨ５ ．４ 和４ ．９ 。它们可以在４０ ％ 硫酸铵饱和度时沉淀。

中国小麦代表性地方品种高分子量谷蛋白亚基组成分析

为了明确中国小麦地方品种的遗传多样性,并为小麦品质改良提供基础材料,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,分析了源自中国22个省市地区的200份代表性地方品种的高分子量麦谷蛋白亚基组成。结果表明,Glu-1位点共检测到35种亚基组合,null/7+8/2+12组合的频率最高,为59%,其它亚基组合的频率均低于10%;Glu-A1、Glu-B1和Glu-D1位点上的等位变异分别为3、12和9种,三位点中的优势亚基依次为null、7+8和2+12,其频率分别达86.5%、73.0%和85.0%。另外在Glu-B1位点上还检测到6+8+19和6+9、7、22等稀有亚基。本研究所选200份代表性地方品种的HMW-GS组成类型虽然丰富,但与品质相关的优质亚基频率较低。亚基组合得分在8分以上的品种为19个;得分在9分以上的品种有4个,它们是草鞋边(ZM011396)、中81Ⅲ-6218(ZM013120)、高8(ZM009428)和京红7号(ZM008935)。

酶水解降低牛乳蛋白抗原性的研究

利用胰蛋白酶和风味蛋白酶对牛乳单酶一步或双酶两步酶解,研究两种酶解方法对牛乳中αs-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白抗原降低效果的影响。对酶解过程中3种蛋白抗原降低率进行测定及水解物的蛋白质分布进行分析,结果表明:双酶两步水解法与单酶一步水解法相比,可显著降低牛乳蛋白抗原性。水解液的SDS-PAGE分析显示双酶两步水解液中αs-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白残留量较单酶一步水解液中的这3种蛋白残留量少。水解液的高效液相色谱分析显示双酶两步水解液中有较多相对分子质量低于6 500的肽类,而单酶一步水解液中有较多相对分子质量大于12 300的蛋白。

新疆小麦品种(系)高分子量麦谷蛋白亚基遗传多样性分析

【目的】更好的了解和有效利用新疆选育的小麦种质材料。【方法】采用SDS-PAGE技术对88份小麦育成品种与自育品系的高分子量麦谷白亚基(HMW-GS)组成进行了分析。【结果】参试材料中共有15种HMW-GS类型,Glu-A1位点上有Null、1和2*,以Null亚基为主要类型(占57.96%);GIu-B1位点上有7+97、+8、6+8、14+15、17+18、7、8和20八种类型,以7+9和7+8为主要亚基类型(分别占45.46%和39.77%);Glu-D1位点上有5+10、2+12、3+12和2+11四种类型,其中2+12亚基的频率高达59.09%;88份小麦品种(系)的亚基组合类型共有25种,其中主要亚基组合为"Null,7+8,2+12",占17.05%。通过对比新疆育成小麦品种和自育品系的优质亚基出现频率发现,品系中优质亚基1、14+15和5+10出现频率较育成品种有所增长,2*、7+8、17+18优质亚基的出现频率下降。在参试材料中,32个含有5+10优质亚基,有21个含有1亚基,6个含2*亚基,1个含14+15亚基,1个含17+18亚基,并有两个材料检测出优质亚基组合类型("2*、17+18、5+10","1、7+8、5+10")。【结论】这些优异种质资源可供优质小麦育种利用。

小麦新品系高分子量麦谷蛋白亚基的组成研究

采用SDS-PAGE电泳方法鉴定和分析了199个春小麦高代品系的高分子量谷蛋白亚基（I-IMW-GS）组成与分布。结果表明，在Glu-A1、Glu-B1和Glu-D1三个位点上共检测到10种不同的高分子量谷蛋白亚基及21种亚基组合类型，优质亚基5＋10占的比例较高（60．30％）．但含2、7＋8、5＋10，1、7＋8、5＋10和1、17＋18、5＋10等优质亚基组合的比例较低（16．58％）。按照Payne等人的评分方法进行了评分，199个春小麦高代品系的高分子量麦谷蛋白亚基Glu-1评分在3-10，平均为7．38分。

羊毛角蛋白的提取工艺及其特性表征

采用化学还原法从羊毛中提取角蛋白,制备角蛋白膜,并采用红外、电泳等测试方法对提取的角蛋白进行表征,同时探讨在透析液中加入少量十二烷基磺酸钠对角蛋白提取过程的影响。结果表明:提取角蛋白的分子量集中在50～70kD;角蛋白在溶解过程中并没发生肽键的断裂,在透析时部分断裂的二硫键再次被氧化;透析液中加入十二烷基磺酸钠,可溶性角蛋白的产率由56%提高到78%,且十二烷基磺酸钠的加入对所提取角蛋白的分子量和内部结构没有明显影响。

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油—SDS—PAGE系统 ,但经实践后发现 ,此系统电泳时间太长 ,导致小分子扩散丢失较多 ,小分子成像不清。后经用尿素代替甘油 ,同时降低三层胶的浓度 ,制成 15.5%T(C =6 % )的分离胶、10 %T(C =3% )的间隙胶与 4 %T(C =3% )的浓缩胶 ,结果不但节省了电泳时间 ,且小分子多肽成像清楚。

不同月龄SPF级SD雄性大鼠主要脏器参数的测定

目的提供SPF级SD雄性大鼠的体重、脏器重量及脏器指数的正常值范围。方法选用1月龄的SPF级雄性SD大鼠75只,分别于2月、3月、4月、7月和8月时测定其体重及10个主要脏器重量,并计算脏器指数。结果在2月龄至8月龄,雄性SD大鼠的心、肝、肺、肾、脑、肾上腺及附睾等脏器的重量均逐渐增长,而胸腺重量却逐渐降低。然而随着体重等因素的变化,心、肝、脾、肺、肾、脑及肾上腺等指数均逐渐降低。结论SPF级SD雄性大鼠体重增长、主要脏器重量及其指数与其脏器结构变化以及机体正常生理功能状态密切相关。

碱溶性东北山核桃蛋白的提取及SDS-PAGE分析

以经超临界CO2去除油脂后的东北山核桃仁渣为原料,利用碱提法对山核桃渣进行蛋白质提取,考察NaOH溶液浓度、料液比、提取温度、提取时间4个因素对蛋白提取率的影响,并在单因素试验的基础上设计正交试验,确定碱溶性山核桃仁蛋白最佳提取条件和其等电点。同时对碱溶性山核桃蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。结果表明:当提取液NaOH浓度0.02mol/L、料液比1:30(g/mL)、提取温度50℃、提取时间1.5h时,碱溶性山核桃蛋白提取率最大可达88.05%,其等电点为4.5。SDS-PAGE分析结果表明,碱溶性山核桃蛋白分子质量主要分布在100、60、36kD和20kD四个区域。

花生蛋白质的亚基组成及分子量研究

花生蛋白质乳状液，及其经等电聚焦，或用硫酸铵分级分离后，分别进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，结果都显出１８条比较明显的区带．这１８条区带在凝胶柱上的分布情况可自然地分成Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４个区域．其中Ａ１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６，Ｄ８等８条区带，在不同等电点蛋白质，不同饱和度的硫酸铵所沉淀的蛋白质，以及乳状液中的蛋白质，都共同显出的主要区带．它们的分子量分别是０．４０，２．８，３．４，３．８，５．２，５．４，５．６，７．８万．这８条区带的蛋白质亚基或肽链可能是构成花生蛋白主要组成的亚基或肽链．由于Ａ１区带比较细小，而Ｄ３区带在不同等电点、不同饱和度硫酸铵所沉淀的蛋白质中差异比较明显，因此，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６等６条区带的蛋白亚基或肽链是构成花生球蛋白的主要亚基或肽链；而Ｄ３区带的蛋白亚基可能是伴花生球蛋白的一种组成．

慢性毒性联合致癌性试验中SD大鼠血液部分生理生化参考值的研究

目的研究两年慢性毒性联合致癌性试验中SD大鼠的体质量、死亡率、血常规值和血生化值的变化。方法SPF级雄性SD大鼠135只,雌性138只,4～17周龄间每周测量体质量1次,18～108周龄间每4周测定动物体质量1次并计算动物的死亡率;分别于8周龄、30周龄、56周龄、82周龄和108周采血,检测血常规和血生化指标。结果雌性大鼠在6～108周的体质量与雄性大鼠比较具有显著性差异(P<0.05);82～108周龄是大鼠死亡率增长的快速期。随着周龄的增加,雌鼠和雄鼠血液指标的变异系数增大。性别对大鼠的血常规和血生化指标具有明显的影响,但雌鼠与雄鼠比较具有显著性差异的血液指标,随着周龄的增加而减少。结论在进行安全性评价试验中,性别、周龄对SD大鼠体质量、血常规值、血生化指标均有较大的影响,因此,雌雄宜分开统计,并需使用相同周龄的动物背景数据作为参考值范围。