不同浓度丹皮酚影响膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的实验研究

目的:观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的影响及对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)的调控作用。方法:通过观察不同浓度丹皮酚作用于膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50),探讨不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖的影响。采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞迁移能力和侵袭能力的影响。通过酶联免疫吸附试验法测定不同浓度丹皮酚的含药培养基处理膀胱癌5637细胞24 h后对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)含量及COX-2活性的影响。结果:膀胱癌5637细胞的存活率随丹皮酚浓度的增加而逐渐下降。在72 h、200μg/mL条件下,丹皮酚对细胞增殖的抑制作用最为明显。处理24 h、48 h、72 h,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的膀胱癌5637细胞存活率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理24h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于25μg/mL组、50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。处理48 h、72 h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。丹皮酚作用膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h时的IC50分别为88.27、74.24、77.07μg/mL。细胞划痕实验表明,不同浓度的丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的迁移能力均受到抑制,且呈浓度依赖性,各用药组的划痕愈合率均低于对照组(P<0.05);50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的划痕愈合率均低于25μg/mL组,200μg/mL组的划痕愈合率低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,不同浓度丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的侵袭能力均受到抑制。随着浓度增加,细胞穿过微孔滤膜的数量递减。25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于对照组(P<0.05)。50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的穿膜细胞数均低于100μg/mL组(P<0.05)。膀胱癌5637细胞上清液中的COX-2、PGE2含量及COX-2的活性均随丹皮酚的浓度升高而降低,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。50μg/mL组的PGE2含量低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于25μg/mL组(P<0.05);100μg/mL组的PGE2含量低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。结论:丹皮酚可抑制膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的作用机制可能与降低COX-2、PGE2含量及COX-2活性有关。

不同压强持续性CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力的影响

目的探讨不同压强持续性CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力的影响。方法选用人结肠癌细胞株SW1116,将细胞放置在含有10%小牛血清的RPMI1640培养液中,置入37℃、5%CO_(2)培养箱中常规培养,建立体外气腹模型,将SW1116细胞置入其中。将SW1116细胞分为5组,分别放置在不同CO_(2)气体压强环境中,即常规培养组(对照组:5%CO_(2)、37℃)、A组(6 mmHgCO_(2)气腹)、B组(9 mmHgCO_(2)气腹)、C组(12 mmHgCO_(2)气腹)、D组(15 mmHgCO_(2)气腹)各20份,维持1 h后取出细胞。在气腹模型试验结束后,继续常规培养24、48、72 h后对细胞进行体外细胞侵袭试验。结果对照组在经过气腹处理后,从气腹结束到72 h后,细胞侵袭荧光强度增强,差异均有统计学意义(P<0.05);A组随着时间的推移,荧光强度略微增加,B、C、D组随着时间的推移,变化并不显著;在经过气腹处理后即刻以及24、48、72 h后,D组结肠癌细胞侵袭荧光强度减弱,明显低于对照组、A组、B组、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论不同压强持续CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力产生一定的影响,高压强CO_(2)气腹的建立对结肠癌细胞的侵袭能力产生了一定的抑制效果;CO_(2)气腹72 h内不同作用时间对结肠癌细胞的侵袭能力未见明显影响。

CD133^+CXCR4^+胃癌KATO-Ⅲ细胞的侵袭能力

目的：研究CD133^＋CXCR4^＋胃癌细胞侵袭能力．方法：Transwell检测NCD133^-CXCR4^-、CD133^-CXCR4^＋、CD133^＋CXCR4^-、CD133^＋CXCR4^＋四组细胞迁移和侵袭能力．半定量酶链聚合反应检测CD133^＋CXCR4^＋组与CD133^＋CXCR4^-组细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT1相关因子表达。分别用基质细胞衍生因子-1α（slromal cell derived factor-1α，SDF-1α）、AMD3100作用KATO-Ⅲ细胞后，Transwell检测CD133＋ CXCR4^＋组与CD133^＋CXCR4^-组细胞侵袭能力,半定量酶链聚合反应检测KATO-Ⅲ细胞中EMT相关因子表达．结果：CD133^＋CXCR4^＋组平均迁移细胞数（136．67±14．36）高于CD133^＋CXCR4^-组（55．33±7.37．P=0．01）．CD133^＋CXCR4^＋组E-cadherin mRNA相对灰度值（0．3068±0．03991低于CD133^＋CXCR4^-组（0．7665±0．0899，P=0．005）．CD133^＋CXCR4^＋组N—Cadherin mRNA表达（0．5852±0．0453）、Snail mRNA表达（0．9178±0．0788）均高于CD133^＋CXCR4^-组（0．2980±0．0626，P=0．006；0．6468±0．1506．P=0．03）．CD133^＋CxCR4^＋组中，与对照组相比，SDF-1α组侵袭细胞数明显上升（P=0．033）．SDF-1α组E-cadherin mRNA表达下降（P=0．018），而AMD3100组E-cadherin mRNA表达上升（P=0．008）．SDF-1α SRSnail mRNA表达上升（P=0．028），而AMD3100组Snail mRNA表达下降（P=0．006）．然而CD133^＋CXCR4^-组中．SDF-1α组侵袭细胞数无明显变化．SDF-1α与AMD3100组E—cadherin mRNA与Snail mRNA表达均无明显变化．结论：CD133^＋CXCR4^＋胃癌细胞可能通过EMT和SDF-1α／CXCR4获得高侵袭能力．

YB-1对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达和细胞侵袭及成球能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达及细胞迁移、成球能力的影响。方法:应用基因重组技术将YB-1基因及其siRNA构建于腺病毒载体pADeasy-1,重组腺病毒及腺病毒空载体转染乳腺癌细胞株MCF-7;通过蛋白质印迹法,RT-PCR和免疫荧光的方法检测YB-1和CD44的表达;MTT法检测转染后细胞生长速度,并绘制生长曲线;并通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力;细胞使用无血清培养基培养,并加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察YB-1对细胞成球能力的影响。结果:蛋白质印迹法和RT-PCR结果显示,转染YB-1重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44的表达明显高于转染腺病毒空载体组和未转染组;相反,转染YB-1 siRNA重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44表达明显低于对照腺病毒空载体组和未转染组;免疫荧光也证实CD44蛋白水平与YB-1表达正相关。细胞生长曲线表明,转染YB-1重组腺病毒载体组的细胞生长速度最快,而且其侵袭、迁移和成球能力最强。结论:YB-1可能通过调控CD44的表达影响人乳腺癌细胞MCF-7的侵袭及成球能力。

MicroRNA-10b对人肺腺癌细胞株A549增殖及侵袭能力的影响

目的探讨miRNA-10b对人肺腺癌细胞A549的增殖及侵袭能力的影响。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒转染入A549,实验设置空白对照组、阴性对照组和miRNA-10b质粒转染组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时定量PCR检测各组细胞miRNA-10b的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,miRNA-10b质粒转染组细胞转染后增殖速度加快,细胞侵袭能力增强(P<0.05)。结论 miRNA-10b可以促进A549细胞的增殖及侵袭能力。

Hedgehog信号通路通过E-cad调控SMMC-7721肝癌细胞运动侵袭能力的研究

目的探讨Hedgehog(Hh)信号在SMMC-7721肝癌细胞运动侵袭能力中的作用及机制。方法应用KAAD-环巴胺(KAAD-cyclopamine)特异性阻断Hh信号,通过细胞划痕愈合实验以及Transwell小室检测肝癌细胞的迁移速率与侵袭能力,蛋白质印迹法检测E-钙黏蛋白(E-cad)在肝癌细胞中的表达差异。结果 Hh信号通路失活后,肝癌细胞迁移率由(41.3±7.0)μm/h显著下降至(24.9±3.8)μm/h(P<0.01),运动及侵袭能力明显减弱,穿过Transwell小室和人工基底膜的肝癌细胞数量分别减少了(54.4±7.0)%和(48.3±11.9)%(P<0.05)。随着Hh信号下调,E-cad在肝癌细胞中的表达量较前升高了2.32倍(P<0.01)。结论 Hh信号通路与肝癌细胞侵袭力密切相关,KAADcyclopamine抑制Hh信号通路可导致SMMC-7721细胞E-cad的表达上调,抑制肝癌细胞侵袭力。

RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默c-Met基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生长活力及体外侵袭能力的影响。方法将设计好的c-Met基因干扰载体转染至U251细胞中,根据转染质粒不同分为空白对照组(不转染任何质粒)、空载体组(转染空载体)和干扰组(转染重组质粒)。采用四唑盐比色法(MTT)检测细胞的生长活力的变化;采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 MTT检测结果显示干扰组光密度值(0.156±0.164)显著低于空白对照组(0.21±0.146;P<0.05)和空质粒组(0.191±0.138;P<0.05),而空质粒组和空白对照组无显著差异(P>0.05)。细胞体外侵袭能力检测结果显示,干扰组穿膜细胞数[(13.60±3.34)个]显著低于空白对照组[(32.90±6.49)个;P<0.05]和空质粒组[(23.10±2.77)个;P<0.05],而空质粒组和空白对照组无统计学差异(P>0.05)。结论沉默c-Met基因表达能明显抑制U251细胞的生长活力及其侵袭能力。

miR-129对SN12-PM6肾癌细胞侵袭迁移黏附能力影响的实验研究

目的探讨质粒microRNA(miR)-129转染肾癌细胞SN12-PM6对SN12-PM6肾癌细胞侵袭、迁移、同质黏附及增殖能力的影响。方法以未转染miR-129的肾癌细胞SN12-PM6作为对照组,以转染miR-129的肾癌细胞SN12-PM6作为实验组;Transwell法检测细胞的侵袭及迁移能力,倒置显微镜下观察两组细胞同质黏附能力,Brd U法检测细胞的增殖能力。结果实验组细胞迁移数及穿膜细胞数均明显少于对照组(P<0.05);两组细胞增殖数量比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组实验后60 min及90 min的细胞黏附数均明显少于对照组(P<0.05)。结论 miR-129能抑制肾癌肿瘤细胞的侵袭、迁移及同质黏附能力,但对肾癌细胞增殖能力无明显的影响。

附子含药血清对人肝癌细胞侵袭和迁移的影响及机制

目的探讨中药材附子含药血清对人肝癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法按50 g/L浓度生附子水煎液和0.9%生理盐水分别灌胃SD大鼠,一周后获得附子含药血清和空白血清;使用附子含药血清(5%、10%、15%及20%)干预肝癌SK-Hep-1、SMMC-7721细胞,筛选最佳含药血清浓度;取对数期生长期SK-Hep-1、SMMC-7721细胞,采用CCK-8法检测附子含药血清对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测对肝癌细胞凋亡的影响,Transwell实验和划痕实验来评估不同浓度的含药血清对细胞侵袭和迁移能力的影响;实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹法检测细胞中钙黏蛋白1(CDH1)、钙黏蛋白2(CDH2)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量变化。结果附子含药血清能显著抑制肝癌细胞的增殖并增加其凋亡率,同时降低细胞的迁移和侵袭能力,这些效应随含药血清浓度的提高而增强;附子含药血清能够增加两种肝癌细胞中CDH1的蛋白质和mRNA表达,而降低CDH2和NF-κB蛋白质和mRNA的表达;附子含药血清还使两种肝癌细胞中TNF-α和TGF-β1含量降低,而IL-10含量增加,并且显示出剂量效应,且具有统计学意义(P<0.05)。结论附子含药血清抑制人肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡,其机制可能与调节CDH1、CDH2和NF-κB的表达有关。

转移抑制基因BRMS1对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的研究转移抑制基因BRMS1对高转移性人卵巢上皮癌细胞(HO-8910PM)侵袭能力的影响。方法脂质体介导将重组真核表达质粒pcDNA3.0-BRMS1转染HO-8910PM细胞;RT-PCR检测转染前后细胞中BRMS1mRNA的表达;Boyden小室法检测细胞侵袭能力。结果与未转染细胞(HO-8910PM)和pcDNA30空质粒转染细胞(HO-8910PM-vect)相比,BRMS1基因转染细胞(BRMS1.c2)侵袭穿透Matrigel基质膜的细胞数降低70.6%(P<0.001)。结论BRMS1基因能抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭能力,为进行卵巢癌基因治疗提供了实验依据。

KPNA2基因沉默对人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404增殖和侵袭能力的影响

目的观察核转运蛋白基因α2(Karyopherinα-2,KPNA2)基因沉默对人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404增殖以及侵袭能力的影响。方法将KPNA2 siRNA干扰质粒用LipofectaminTM 2000方法瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404,转染后48 h应用蛋白质印迹法检测转染细胞中KPNA2蛋白表达。采用MTT法检测基因沉默细胞增殖能力,采用Transwell法检测基因沉默细胞侵袭能力。结果 SMMC7721细胞株对照组mRNA为1.02±0.13,高于siRNA转染组的0.37±0.07(t=10.78,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组mRNA为1.05±0.17,高于siRNA转染组的0.36±0.06(t=9.38,P<0.01)。肝癌SMMC7721细胞株对照组蛋白定量值为0.96±0.10,高于转染组的0.42±0.05(t=11.83,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组蛋白定量值为0.93±0.09,高于转染组的0.48±0.06(t=10.19,P<0.01)。SMMC7721和Bel7404细胞株在24、48和72 h时对照组增殖能力高于转染组,且差异有统计学意义(P<0.05)。SMMC7721细胞株对照组侵袭能力值为126.20±21.61,高于siRNA转染组的51.13±10.2(t=7.68,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组侵袭能力值为125.124±8.04,高于siRNA转染组的55.20±18.54(t=8.48,P<0.01)。结论KPNA2基因沉默可以调节人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404的增殖能力和侵袭能力。

盐霉素通过TGFβ1/Smad信号通路抑制MMP-2、9降低CD44+/CD24-/low表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力

目的分析盐霉素对CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其影响机制。方法通过有血清和无血清培养技术培养人乳腺癌MCF-7细胞株,收集两种细胞,对其CD24、CD44标志物进行荧光染色,采用流式细胞仪检测CD44^+ /CD24^(-/low)亚群细胞的比例;盐霉素培养MCF-7细胞株和CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞,MTT法筛选出引起CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞细胞凋亡低于IC50的浓度;Transwell技术检测MCF-7和CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞的迁移和侵袭能力,以筛选出的浓度诱导CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞,以排除盐霉素对该细胞增殖抑制作用的影响,Transwell技术检测该细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blot技术检测TGFβ1、Smad2、Smad3、p-Smad2、pSmad3、MMP-2、MMP-9蛋白水平的变化。结果 CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞在无血清培养和有血清培养中的比例分别为(86.93±0.53)%和(19.98±0.62)%(P<0.01),CD44^+ /CD24^+ 表型细胞的比例分别是(12.68±0.59)%和(79.90±0.57)%(P<0.01);MTT法筛选出低于IC50的浓度是1、3、5、7μmol/L;Transwell技术检测CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力明显高于MCF-7细胞株,并随盐霉素浓度的上升呈下降趋势(P<0.05)。Western blot技术检测TGFβ1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、MMP-2、MMP-9蛋白水平下调(P<0.01)。结论盐霉素可能通过TGFβ1/Smad信号通路下调MMP-2、MMP-9蛋白水平,从而降低CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力。

马蔺子甲素对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的观察马蔺子甲素(IQ)对人胰腺导管腺癌(PDAC)细胞株PANC-1增殖、侵袭、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期的PANC-1细胞置于基础培养基中,将细胞分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,高剂量组、中剂量组、低剂量组分别加入25、20、15μmol/L的IQ,对照组加入等量0.9%NaCl溶液。采用MTT比色法检测细胞增殖能力(细胞OD值),划痕愈合实验检测细胞迁移能力(细胞迁移距离),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(穿膜细胞个数),qPCR法检测细胞Rho信号通路关键分子RhoA、Rac1、ROCK1、CDC42、ROCK2。结果与对照组比较,中剂量组和高剂量组培养24、48、72 h的OD值减小(P均<0.05);与同组0 h比较,低剂量组及中剂量组和高剂量组培养24、48、72 h的OD值增加(P均<0.05)。与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组、高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05)。与对照组比较,低剂量组及中剂量组和高剂量组RhoA、Rac1、ROCK1相对表达量减小(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组、高剂量组ROCK1相对表达量减小(P均<0.05)。结论IQ可抑制PANC-1细胞增殖、侵袭及转移,其作用机制可能为抑制Rho信号通路介导的上皮间质转化进程,当药物浓度为25μmol/L时可达到最大抑瘤效应。

EIF4A1在胃癌组织中表达及其抑制剂对人胃癌细胞株增殖、存活、侵袭、迁移能力影响观察

目的观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制。方法淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1。取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120μg/m L Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100μL,模型组加含0. 5%DMSO的细胞培养液100μL,对照组加细胞培养液100μL; CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白。结果与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P<0. 05)。各组OD值及活细胞数两两比较,P均> 0. 05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均<0. 05)。结论淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织; Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关。

血管细胞黏附分子-1增强人脑胶质瘤细胞系迁移和侵袭能力

目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)在脑胶质瘤细胞迁移侵袭能力中作用。方法用慢病毒p SGU6/GFP/Neo介导VCAM-1的shRNA、慢病毒EF1a-GFP/puro介导VCAM-1过表达载体、划痕迁移、Transwell侵袭、蛋白免疫印迹(Western blot)和细胞染色等实验技术和方法,观察了VCAM-1蛋白表达水平对人脑胶质瘤T98G和U251细胞系细胞迁移和侵袭能力的影响。其中,T98G细胞分为空白对照组、空载体对照组、乱序对照组和实验组(抑制VCAM-1蛋白表达水平组),U251细胞分为空白对照组、空载体对照组和实验组(过表达VCAM-1组),每组6个复孔。结果首先利用慢病毒介导VCAM-1的shRNA和过表达载体建立了稳定低表达VCAM-1的T98G细胞和稳定过表达VCAM-1的U251细胞。稳定低表达VCAM-1的T98G细胞划痕恢复能力(迁移能力)明显减弱(P<0.01);而稳定过表达VCAM-1的U251细胞迁移能力明显提高(P<0.05)。同样,稳定低表达VCAM-1的T98G细胞侵袭能力显著减弱(P<0.05);而稳定过表达VCAM-1的U251细胞侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论VCAM-1可显著增强人脑胶质瘤细胞系细胞的迁移和侵袭能力。

HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭和增殖能力的影响

目的:探讨外源性高迁移率蛋白(High Mobility Group Box 1,HMGB1)对绒毛外滋养细胞(HTR8/SVneo细胞)侵袭和迁移能力的影响。方法:①确定HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响HTR8/SVneo细胞随机分为正常对照组及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组,分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,采用Transwell体外侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞的侵袭性。②确定HMGB1对细胞增殖的影响:细胞随机分为正常对照及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组.分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,以CCK8方法检测细胞的增殖水平。结果:①HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响:收集不同时间点、不同刺激浓度的细胞,统计不同时间点、不同刺激浓度的细胞数量,不同时间之间差异有统计学意义(F=204.076,P<0.001);时间与刺激浓度之间存在交互效应(F=16.158,P<0.001);②HMGB1对细胞增殖的影响:不同时间因素之间有统计学意义(F=116.853,P<0.001);时间与处理因素之间不存在交互效应(F=1.933,P>0.05)。结论:外源性HMGB1可以增强绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo的侵袭能力和迁移能力。

DAPT和PI-103对人胶质瘤干细胞侵袭、迁移能力的影响

目的观察联合应用Notch1信号通路抑制剂(DAPT)和PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂(PI-103)对人胶质瘤干细胞(GSCs)侵袭、迁移能力的影响。方法采用免疫磁珠法从U87细胞中分选获得GSCs;取GSCs分为DAPT处理组(A组)、PI-103处理组(B组)、DAPT和PI-103共同处理组(C组)、药物溶媒对照组(D组),A组加入20μmol/L的DAPT培养,B组加入4μmol/L的PI-103培养,C组加入20μmol/L的DAPT+4μmol/L的PI-103共培养,D组不作任何处理。Western blotting法检测各组Notch1活化标志物(Hes1、pmTOR蛋白),Transwell侵袭和迁移实验观察各组细胞侵袭、迁移能力(穿膜细胞数)。结果与D组和A组相比,B、C组Hes1蛋白相对表达量降低(P均<0.01);与D组相比,A、B、C组pmTOR蛋白相对表达量降低(P均<0.05);与A、B组比较,C组pmTOR蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。与D组相比,A、B、C组侵袭、迁移穿膜细胞数降低(P均<0.05);与A、B组比较,C组侵袭、迁移穿膜细胞数降低(P均<0.05)。结论DAPT和PI-103联合使用可显著降低GSCs的侵袭、迁移能力。

微秒脉冲电场对宫颈癌细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

对于不可逆电穿孔(irreversible electroporation,IRE)技术等治疗肿瘤的物理疗法而言,术后残存肿瘤细胞的粘附、侵袭和迁移能力能否被抑制,是关系到能否降低肿瘤复发和转移风险、巩固和保证治疗效果的重要问题。为探讨采用不可逆电穿孔治疗肿瘤时,所施加的μs脉冲电场对残存肿瘤细胞粘附、侵袭和迁移能力的抑制作用,以人宫颈癌细胞系Hela为对象,采用固定脉宽100μs、频率1Hz、脉冲个数8个,电场强度分别为500、1000和1500V/cm的脉冲电场进行处理,通过基质胶的粘附实验、细胞体外侵袭和体外迁移实验,研究μs脉冲电场对肿瘤细胞上述3种能力的影响。研究表明,μs脉冲电场对Hela细胞的粘附能力、侵袭能力和迁移能力均有很好的抑制作用,且脉冲电场的场强越大,抑制效果越明显。研究证明了μs脉冲电场对抑制肿瘤复发和转移能力的作用,为进一步证实不可逆电穿孔治疗技术的优势及下一步的临床推广提供了新的实验依据。

组织因子对人类大肠癌培养细胞侵袭能力的影响

目的 :分析组织因子表达对人类大肠癌细胞 (HT 2 9细胞 )体外侵袭能力的影响。方法 :利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体 pcDNA3.1 /Zeo ,以脂质体法转染HT 2 9细胞 ,经验证转染成功的HT 2 9细胞采用Western印迹分析检测组织因子的蛋白表达水平并进行基质胶 (Matrigel)侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化。结果 :转染了正义TFcDNA的HT 2 9细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT 2 9细胞升高 ;转染了反义TFcDNA的HT 2 9细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT 2 9细胞相比降低。结论

大蒜素抑制体外人肝癌细胞的侵袭能力

目的:肝癌的侵袭与转移是导致其不良预后的重要因素,目前临床缺乏针对肝癌侵袭与转移的有效治疗措施. 本研究通过人肝癌细胞培养,研究大蒜素对体外人肝癌细胞侵袭能力的影响,并在基因水平上探讨其机制. 方法:将人肝BEL-7402细胞传代,取进入指数生长期的细胞随机分为阿霉素组Human(5 mg/L)、大蒜素低、中、高剂量组(25、50、100 mg/L),另设空白对照. 处理后每30 min观察一次细胞转移相关超微结构,8 h 后用流式细胞术检测肿瘤侵袭转移抑制基因nm23-H1 和P2ras表达水平.数据用SAS 8.2软件进行X2检验. 结果:与阿霉素组相比,大蒜素处理后超微结构除凋亡表现外,大多数贴壁细胞胞质回缩,细胞之间的连接减少,空隙加大,细胞之间界限变清晰,表面的丝状微绒毛也明显减少.流式细胞检测显示,nm23-H1表达的荧光强度空白对照组为19.19,5 mg/L.阿霉素组为119.76,25 mg/L大蒜素组为84.28,50mg/L大蒜素组为92.64,100 mg/L大蒜素组为138.08,nm23-H1 表达与大蒜素呈明显剂量效应关系,大蒜素高剂量组比阿霉素组显著增强(138.08 vs 119.76,P<0.05).而P21ras 表达的荧光强度在空白对照组、阿霉素组和低、中、高剂量组分别为2.65%、3.56%、1.55%、3.22%、3.44%,都表现为阴性低表达,各组间没有明显差别. 结论:大蒜素可以抑制体外肝癌细胞的侵袭能力,其机制可能与大蒜素特异性影响BEL-7402细胞袁面的微绒毛和上调肿瘤侵袭与转移抑制基因nm23-H1的表达有关.