趋化因子融合蛋白SDF-KDEL慢病毒载体pLenti6/V5-S-K的构建和表达

目的构建含趋化因子融合蛋白SDF-KDEL的慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,为研究I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的基因片段SDF-KDEL,纯化后的PCR产物定向连接入pLenti6/V5-D-TOPO(载体,构建慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,并在293FT细胞中建立慢病毒株,最后转染人宫颈癌HeLa细胞观察SDF-1蛋白的表达。结果成功构建了慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,并证实SDF-1蛋白可在HeLa细胞系内表达。结论慢病毒载体可介导CXC-细胞内趋化因子(CXC-in-trakine,SDF-K)基因高效、稳定转染HeLa细胞,可用于抗HIV-1感染的基因治疗。

SDF—1a／54／KDEL基因电穿孔Molt-4细胞株的转染条件优化

目的探索以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因的重组质粒pEGFP／SDF-1a／54／KDEL电穿孔悬浮培养的Molt-4细胞的高效转染条件。方法通过控制脉冲幅度、脉冲电压、细胞生长状态等三个主要条件，采用不同条件组合后用电穿孔法将转入悬浮培养的Molt-4，用荧光显微镜和流式细胞仪观察转染率。结果传代后第二天的Molt-4细胞在260V、950μF得到最大转染率51．2％。荧光显微镜下可观察到被转染目的基因的细胞发出绿色荧光。结论优选260V、950μF和良好的细胞生长状态等条件下的Molt-4，可获得目的基因SDF—1a／54／KDEL的最高转染效率。