生理和病理状况对小鼠肝脏SDF2L1基因表达的影响

目的确定小鼠肝脏SDF2L1基因在不同生理和病理条件下的表达情况,并构建SDF2L表达质粒,为进一步研究SDF2L1基因的功能奠定基础。方法 Real-time PCR确定SDF2L1基因在糖尿病条件下(db/db和ob/ob小鼠分别为糖尿病和肥胖模型小鼠)或不同营养状态的表达情况;设计并合成SDF2L1基因的PCR引物,以野生型C57BL/6J小鼠肝脏c DNA为模板,扩增SDF2L1编码区,PCR产物测序正确后连接到pc DNA4/myc-His表达载体,鉴定插入片段序列正确后,将构建的质粒转染293A细胞,Western blot检测SDF2L1的表达。结果糖尿病条件下或饥饿状态下小鼠肝脏中SDF2L1基因表达明显下调(P<0.01);纯化质粒的相对分子质量为5.8 kb,酶切鉴定结果符合目的条带(666 bp)大小,插入的寡核苷酸序列与野生型SDF2L1基因序列完全相符,表达的融合蛋白大小为26ku。结论 SDF2L1基因可能参与机体糖脂代谢;成功构建SDF2L表达质粒。

定量蛋白质组学分析SDF2L1过表达后鼻咽癌细胞中的差异蛋白

目的:分析基质细胞衍生因子2样1(SDF2L1)过表达对人鼻咽癌(NPC)细胞5-8F中蛋白表达谱的影响。方法:提取SDF2L1基因过表达细胞株(5-8Fg)及空载细胞株(5-8F1)的总蛋白,利用非标记定量(LFQ)蛋白组学技术和串联质谱分析技术筛选差异表达蛋白(DEPs),应用R软件对DEPs进行GO和KEGG富集分析,Cytoscape软件筛选关键的DEPs,Oncomine数据库对关键DEPs进行验证,RT-qPCR和western blotting法对筛选出来的关键DEPs进行验证。结果:在5-8Fg细胞中共筛选出730个DEPs,其中296个DEPs上调,434个DEPs下调。富集分析结果显示,DEPs主要定位在核糖体中,参与核糖体合成和内质网蛋白加工等过程,发挥黏附蛋白和催化活性等功能。通过Cytoscape和Oncomine数据库验证出核糖体蛋白L14(RPL14)、RPS15A等9个关键DEPs。SDF2L1过表达后RPL14基因(P<0.05)表达下调。结论:SDF2L1过表达后显著改变了NPC细胞中的蛋白表达特征,RPL14可能是NPC的促癌因子。