嗜铬细胞瘤SDHD和MEN1基因突变与杂合性缺失研究

目的探讨抑癌基因SDHD和MEN1的突变与杂合性缺失,在嗜铬细胞瘤(PCC)发病机制中的作用。方法采用DNA直接测序法对SDHD和MEN1基因的全部外显子及其侧翼进行分析,寻找基因突变。选用荧光标记11q13区-23区的8个多态性微卫星位点对37例PCC进行杂合性缺失频率检测。分析上述检测结果与临床资料的关系。结果在37例PCC肿瘤组织中未发现SDHD和MEN1基因突变。发现3种SDHD基因内含子改变(15519972c/g,15521745c/t,15520001c/a),2种MEN1基因内含子改变(9879384a/g,9878352C/T)。SDHD所在区域11q23的杂合性缺失频率为30.8%。MEN1所在区域11q13的杂合性缺失频率为26.9%。结论PCC中未发现SDHD和MEN1基因突变;发现一定比例的11q13区-23区域的杂合性缺失,提示在该区域可能存在其他的抑癌基因参与PCC的发病机制。

山羊SDHD基因cDNA编码序列的克隆与分析

利用NCBI中GenBank里查询到已登录的人、猪、牛和绵羊的SDHD mRNA序列,通过多重同源比较,从而获得高度保守区域序列,设计了同源引物,并首次对山羊SDHD编码序列进行了分子克隆。经过PCR扩增和测序,获得山羊SDHD基因共4段cDNA序列,分别为:451 bp4、20 bp5、29 bp和698 bp。所获得的四段序列测序结果经La-sergene7.0软件SeqMan拼接后,获得一条1238 bp长的cDNA序列。在GenBank数据库中进行BLAST/nr比对,发现其与绵羊、牛、猪和人相应序列相似性分别达98%、97%、85%和81%。用NCBI的ORF Finder软件对已经克隆的山羊SDHD基因cDNA进行开放阅读框分析,发现该序列包含一个480 bp的开放阅读框,编码159个氨基酸残基,计算机分析表明(Compute pI/Mw tool),该蛋白的分子量约为17 224.11 Da,等电点为8.92。通过DNAMAN软件分析发现,山羊SDHD蛋白保守性很高,其与绵羊、牛、猪和人SDHD蛋白在氨基酸序列上的相似性分别达到97%、96%、87%和85%。此山羊SDHD基因cDNA序列和SDHD蛋白质序列已于2010年1月31日登录在NCBI的GenBank上,登录号为GU338978和ADB92501。本项研究为进一步研究山羊的SDHD基因作为山羊肉品质性状候选基因,提供了相应的序列信息。

猪SDHD和DCN基因多态性及遗传印记

为揭示猪SDHD和DCN基因印记表达特征,该研究以长白、大白、蓝塘3个品种的166头纯种猪为试验材料,在猪的SDHD和DCN基因的外显子内寻找SNP,通过PCR-SSCP方法对SDHD和DCN基因多态性进行检测;分别选取SDHD基因外显子4和DCN基因外显子2的SNP为杂合子的仔猪3头,以其主要的组织器官mRNA的产物分别进行RT-PCR-RFLP电泳和RT-PCR-SSCP电泳.结果表明:SDHD基因外显子4中有1个单核苷酸多态性位点,即131位碱基由G突变为T,且该位点为MboI酶切位点;DCN基因外显子2中有1个单核苷酸多态性位点,即编码区30位碱基由T突变为A;SDHD基因外显子4和DCN基因外显子2在上述3头仔猪的胃、胸腺、胰、脾、肺、肌肉、肝、舌、肾、脑、膀胱、心脏等主要组织器官和胎盘同时表达父母双方来源的等位基因.可见,SDHD和DCN基因在猪呈父母双方表达的遗传特征.

一个颈动脉体瘤家系的SDHD基因变异研究

目的对1个颈动脉体瘤家系进行变异检测,明确其病因。方法对家系成员进行查体、彩超检查、CT扫描,对先证者进行外显子组测序,再用Sanger测序进行验证,对候选变异进行功能预测,并在家系成员中进行验证。结果先证者携带SDHD基因第3外显子剪接区c.170-1G>T杂合变异,15个家系成员携带致病变异,其中6人已死于心脑血管病,现存9人均已发生颈动脉体瘤、高血压。本家系符合常染色体显性遗传规律。结论SDHD基因c.170-1G>T杂合变异可能是导致本家系发病的原因,颈动脉体瘤患者除了常规临床检查还应进行基因诊断。

散发性副神经节瘤琥珀酸脱氢酶基因D亚单位体细胞突变的检测

目的:检测散发性副神经节瘤(paraganglioma,PGL)患者中SDHD基因体细胞突变情况,为PGL分子遗传学的深入研究提供基础数据。方法:选取15例经病理确诊、并具有完整临床资料的副神经节瘤患者(其中9例为颈动脉体瘤患者,6例为肾上腺外副神经节瘤),利用PCR技术对石蜡包埋肿瘤组织中的SDHD基因各外显子进行扩增,纯化后直接测序,将测序结果与美国生物技术信息中心公布的标准序列比对。结果:15例副神经节瘤患者中均未发现SDHD基因外显子体细胞突变。结论:散发性副神经节瘤发病与SDHD基因体细胞突变无明显关系。

副神经节瘤的遗传学研究：综述

家族性副神经节瘤约占头颈部副神经节瘤的10％，研究发现有3个基因即：琥珀酸脱氢酶D、B、C（SDHD、SDHB、SDHC）与头颈部副神经节瘤的遗传易感性有关。SDHD、SDHB亦可诱发嗜铬细胞瘤。SDHD具有综合遗传模式，如果基因突变遗传于母亲．则后代不会罹患肿瘤。SDHB突变与恶性嗜铬细胞瘤相关，如果患者具有家族性副神经节瘤或嗜铬细胞瘤，则应对之进行遗传学分析。

瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及琥珀酸脱氢酶D表达的影响

目的探讨瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及对琥珀酸脱氢酶D(SDHD)表达水平的影响,分析SDHD对肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用的影响。方法通过流式细胞术观察瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡的影响,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)观察瑞戈非尼对SDHD表达的影响。通过CCK-8实验及Edu实验检测SDHD对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术分析SDHD对瑞戈非尼药物作用的影响。通过Western blotting检测SDHD对AKT信号通路的影响,流式细胞术分析AKT信号通路抑制剂MK2206对SDHD促瑞戈非尼作用下细胞凋亡的影响。结果瑞戈非尼促进肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调(P<0.05);过表达SDHD抑制肝癌细胞增殖(P<0.05),敲减SDHD促进肝癌细胞增殖(P<0.05);MK2206协同SDHD提高肝癌细胞在瑞戈非尼药物作用下的凋亡率(P<0.01)。结论瑞戈非尼可诱发肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调;SDHD参与调控肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用,提示SDHD可能是肝癌治疗的新靶点。