SDS-PAGE-薄层扫描联用法测定3种不同来源的乳铁蛋白

目的:建立快速、简便测定鲜牛奶、转基因牛奶和人乳中乳铁蛋白的方法。方法:在对样品脱脂和去除酪蛋白时,水洗乳脂、酪蛋白以提高乳铁蛋白的回收率。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分离乳清蛋白,薄层扫描法定量。对电泳和薄层扫描的条件进行优化,电泳使用1.0mm×10齿的试样格、分离胶质量浓度12g/mL、分离电压100V、上样量5μL、染色3h、脱色2h;薄层扫描采取锯齿、双波长、透射的扫描方式,Y步长和摆幅宽分别为0.1mm和8mm。结果:可以分离不同来源乳中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白;乳铁蛋白加标回收率分别为104.53%、108.37%,同板精密度RSD值为3.1003%和1.8151%,在100～2000μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9988和0.9990。结论:此方法可以用于3种乳中乳铁蛋白的测定。

用含底物SDS-PAGE检测明胶酶活性

将明胶加入SDS-聚丙烯酰胺凝胶中，电泳后样品中所含明胶酶按分子量大小不同停留于凝胶中的特定位置。用TritonX-100 除去SDS 使酶复性后，明胶酶便可分解凝胶中的底物。底物被分解处考马斯亮蓝染色时不着色，因此在蓝色背景下可见酶所在位置呈白色条带，根据白色条带的深浅和宽窄可判断酶活性的高低。用此方法检查了大鼠不同组织中的明胶酶活性及传代培养对血管平滑肌细胞分泌明胶酶的影响。结果显示，大鼠不同组织及不同龄大鼠同种组织胶酶活性存在差异。另外，传代培养的平滑肌细胞与组织间分泌明胶酶的种类亦不同。

植物乳杆菌在不同盐质量浓度下生长至对数期中期全蛋白SDS-PAGE分析

以耐盐植物乳杆菌FS5-5为研究对象,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术构建了菌株在Na Cl质量浓度分别为0、3、6、9 g/100 m L的培养基中生长至对数期中期的全蛋白表达图谱。通过比较分析,选取了6个差异蛋白质条带,并采用液相色谱-质谱/质谱联用对差异蛋白质条带进行质谱分析。结果表明:1号样品条带鉴定得到6种蛋白;2号样品条带鉴定得到11种蛋白;3号样品条带鉴定得到9种蛋白;4号样品条带鉴定得到4种蛋白;5号样品条带鉴定得到15种蛋白;6号样品条带鉴定得到15种蛋白。去除相同的蛋白,共有45种蛋白得到鉴定。这些蛋白大致可以分为4类:与蛋白质合成有关的蛋白25种;与代谢相关的蛋白10种;与核苷酸合成有关的蛋白8种;未知功能蛋白2种。可能由于这些蛋白的表达发生变化,才导致菌体中蛋白质合成、能量代谢、DNA复制能够正常进行,最终使植物乳杆菌FS5-5能够更好地在盐环境下生存下去。

SDS-PAGE分析肝癌细胞和正常肝细胞膜蛋白

目的:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法获得肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株L-02蛋白质表达谱,期待找到与肝癌细胞相关的差异蛋白。方法:体外培养肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L-02,分离提取细胞膜蛋白,用SDS-PAGE分析细胞膜蛋白。结果:2种细胞膜蛋白的疏水相和亲水相蛋白区带位置基本相同,但肝癌细胞株HepG2膜蛋白在相对分子质量66×103处有较清晰的异常蛋白区带。结论:肝癌细胞HepG2除了具有与正常肝细胞相同的组成物质外,还有自己独特的蛋白质表达谱,这一实验可为癌症的研究提供一定的参考。

中国与日本不同地域品系日本血吸虫蛋白组分的SDS-PAGE和EITB分析

目的： 补充观察我国浙江、江西、台湾省和日本山梨的日本血吸虫成虫的蛋白组分， 以及上述４ 地和安徽、湖北、四川、云南省血吸虫与广西省钉螺和日本钉螺抗血清的反应性。方法： 采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 和酶联免疫电转移印迹 （ＥＩＴＢ） 分析。结果与结论： 浙江、江西、台湾省和日本的血吸虫隔离群雄虫及雌虫抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后， 以考马斯亮蓝染色结果分别可见７～１７ 条（江西省和日本的血吸虫雄虫条带显色很淡） 及１～６ 条显色带；银染结果分别可见１４～２３条及４～１９ 条（台湾省的血吸虫雌虫仅见１条极淡的）显色带。台湾省血吸虫雄虫与浙江省血吸虫雄虫谱型相似， 但在８１ ｋＤａ以上组分有所不同， 江西省血吸虫雄虫５４ｋＤａ 条带明显， 日本的血吸虫雄虫不仅条带少， 谱型也与浙江、江西及台湾省的血吸虫各异。ＥＩＴＢ结果： 所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺抗血清均产生反应， 证明存在交叉反应抗原组分。所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺间存在共同抗原组分。

染石英及石棉尘大鼠肺灌洗液SDS-PAGE测定

目的探讨尘肺发病机理。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术对染石英（２５ｍｇ／只）或石棉尘（５ｍｇ／只）大鼠支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）进行了测定，并在光镜下观察天狼星红染色肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原分布情况。结果染石英不同时间大鼠ＢＡＬＦ中存在５条分子量分别为９０，６６，６０，２５，１４ＫＤ的蛋白质条带。染石棉大鼠ＢＡＬＦ仅有一条带，分子量为６６ＫＤ。染石英两周时，大鼠肺组织细胞纤维性结节中即有少量Ⅰ型胶原沉积，２个月时Ⅰ型胶原明显增加、粗大。石棉组３个月时肺间质中有Ⅰ型胶原存在。两组均未见明显Ⅲ型胶原。

SDS-PAGE法检测动物肌肉蛋白质加热终点温度的研究

为了探索检测动物组织蛋白质热变性程度的方法,分别对猪、牛、羊、鸡、鱼五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理(新鲜未加热、50、60、70、80、90、100℃),对处理后的样品提取蛋白质进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果显示,同种动物组织经不同温度热处理,所得电泳图谱具有较大差异,电泳条带的数量随温度的升高逐渐减少,猪、牛、羊三种动物肌肉组织加热到80℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度;鸡和鱼的肌肉组织加热到70℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度。不同种动物组织经相同温度热处理所得电泳图谱显示:猪、牛、羊三种动物组织蛋白质的电泳图谱相似,与鸡和鱼组织蛋白质的电泳图谱差异显著。

五株钩体外膜蛋白和脂多糖的SDS-PAGE、2D-PAGE图谱的比较研究

作者采用SDS-PAGE、2D-PAGE结合银染色法及免疫印迹技术对五株不同致病力钩体外膜蛋白和脂多糖作比较研兜。SDS-PAGE分析发现三株致病钩体外胰蛋白电泳图谱非常相似,与两株非致病性钩体电泳图谱无相关关系。强毒力017株外膜21.5kd区带的蛋白含量明显高于两株弱毒力钩体。2D-PAGE图谱差异更大,主要表现为pI的分布不同。用抗017株的McAb(LB_1)对五株外膜进行免疫印迹分析。该McAb主要识别三株致病性钩体共有的41kd抗原。三株致病性钩体外膜脂多糖电泳图谱与两株非致病钧体外膜脂多糖电泳图谱迥然不同。

SDS-PAGE法测定蒜酶相对分子质量及含量

目的采用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)法测定蒜酶的相对分子质量及含量。方法建立测定蒜酶的凝胶电泳条件:分离胶12%,浓缩胶5%,初始电压80V,进入分离胶时电压调至100V,测定经提取纯化后的蒜酶和大蒜样品中蒜酶的分子质量及含量。结果通过SDS-PAGE法确定以磷酸盐缓冲液为溶剂,蒜酶供试品浓度27.2 mg/mL进行蒜酶含量和相对分子质量测定;蒜酶供试品中蒜酶平均相对分子质量50.84KDa,蒜酶供试品中蒜酶在总蛋白条带中平均相对含量为52.39%,大蒜中蒜酶在总蛋白条带中平均相对含量为6.28%。结论 SDS-PAGE法测定蒜酶含量及其相对分子质量,方法简便易行、结果准确可靠。

SDS-PAGE对不同产地及质量枸杞的鉴别研究

目的探讨SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳定性鉴别不同产地及不同质量枸杞的方法。方法用不连续系统SDS-PAGE法对不同产地及不同质量的枸杞进行鉴别。结果不同产地及不同质量的枸杞SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱有相似性及区别性。结论该方法准确,可靠,重复性好,可对不同产地及不同质量的枸杞鉴别提供重要参数。

中国大陆日本血吸虫品系的研究 X.成虫蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

对中国大陆的安徽、湖北、广西、四川和云南5地日本血吸虫成虫蛋白质组分进行了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和比较,结果表明各地虫体蛋白质电泳图谱基本相似,但作银染分析时,广西地区两性虫体的蛋白条带则呈现某些差别。

十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳比较加热前后巴豆霜蛋白成分的变化

目的:研究巴豆霜蛋白成分加热前后发生的变化,为选择巴豆霜加热炮制减毒方法提供数据支持。方法:采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳对不同炮制方法和不同加热时间制备的巴豆霜进行蛋白含量测定和电泳图谱分析。结果:测定了巴豆霜蛋白含量,发现巴豆霜不同炮制品SDS图谱中,分子量15～170kD内的特征性条带有6条,加热后有明显的条带消失现象。结论:SDS电泳操作简便、结果可靠、重现性好、专属性强,可用于鉴别不同炮制方法和不同加热时间的巴豆霜。

人精浆SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳谱型研究

本文采用SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(SDS-PAGGE)研究了102例中国正常男子精浆蛋白的电泳谱型,得到了具有精液特征性的,可与人阴道液、唾液、初乳及血清进行鉴别的人精浆蛋白电泳谱型,并可作为精斑的确证。另发现一种-83kd 变异型。频率为8. 82±2. 81%。提高了精斑的个人识别机率,在实际应用中取得了初步成效。

SDSP-AGE结合^(125)I示踪法与ELISA法测定血中rh-bFGF的比较

目的 :比较和评价SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)结合12 5I示踪法与ELISA法测定血浆中重组人碱性成纤维细胞生长因子 (recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfactor,rh bFGF)。方法 :1 0只大鼠iv12 5I rh bFGF1 60 0ng/kg ,用SDS PAGE结合放射性计数测定血浆rh bFGF含量。 9只大鼠ivrh bFGF 1 60 0ng/kg ,用ELISA法测定血浆rh bFGF含量。结果 :两种方法的灵敏度、回收率和重现性好。ELISA法测定血浆rh bFGF含量较SDS PAGE结合12 5I示踪法低。结论 :SDS PAGE结合12

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测尿激酶纯度

尿激酶(urokinase,UK)是由肾脏产生,存在于尿中的纤溶酶原激活剂,因无种属特异性、无抗原性和毒性小而成为临床溶血栓治疗的药物之一,从新鲜人尿中提取的尿激酶,主要有 54 000(HUK)和 33 000(LUK)两种,目前衡量尿激酶纯度仍以HUK含量为指标,主要用电泳方法检测。应用卫生部药品标准提供的方法进行检测,样品的分离不理想。我们应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),比较了不同的样品处理方法和不同的电泳系统对UK纯度检测的影响,建立了一种简便实用的UK纯度检测方法。

脱脂松仁粕中球蛋白的提取工艺及其SDS–PAGE分析

以脱脂松仁粕为原料,采用Osborne法提取松仁粕中的球蛋白,设NaCl质量分数(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)、料(质量,g)液(体积,m L)比(1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35)、提取时间(30、60、90、120、150、180 min)和提取温度(40、45、50、55、60、65℃)4个单因素试验,再用响应面法优化松仁粕中球蛋白的提取工艺,并对其分子量进行分析。结果表明:当NaCl质量分数为2.5%,料液比为1∶15,提取时间为150 min,提取温度为56℃时,松仁粕中球蛋白的提取率较高,为15.32%;SDS–PAGE分析结果表明,脱脂松仁粕球蛋白的分子量为41 320、27 520、21 690、16 310、15 180。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进

针对常规的SDS-PAGE染色脱色耗时长,还需使用甲醇的缺点,对传统的SDS-PAGE染色脱色进行了改进,用无毒的乙醇替代有毒的甲醇.改进后的SDS-PAGE染色脱色具有耗时短,且不需要使用甲醇的优点.

百日咳毒素、丝状血凝素和百日咳黏附素精制抗原纯度的SDS-PAGE检测方法的验证

目的采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方法检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)和百日咳黏附素(pertactin,PRN)精制抗原纯度,并进行验证。方法对样品进行SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色后,使用凝胶成像系统拍照并用Image Lab软件进行分析,获得样品各蛋白条带的光密度值。对建立的方法进行系统适用性、线性、准确度、重复性、中间精密度、灵敏度和耐用性验证。结果对应2套分子量标准蛋白,PT、FHA和PRN精制抗原分别在10.00~50.00μg/mL的低质量浓度范围和50.00~600.00μg/mL的高质量浓度范围内,蛋白浓度和对应条带光密度值之间具有良好的线性关系,相关系数(coefficient of correlation,r)≥0.99。3种精制抗原杂质水平准确度和重复性回收率均在80%~120%,且重复性验证相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤10%;抗原水平准确度和重复性回收率均在90%~110%,重复性验证RSD≤10%;灵敏度12.50μg/mL的回收率均在80%~120%,RSD≤10%;中间精密度验证RSD≤10%。结论建立的测定PT、FHA和PRN精制抗原纯度的SDS-PAGE法,其系统适用性、准确度、重复性、中间精密度和灵敏度均良好,可用于以上精制抗原的纯度检测。

一种考马斯亮蓝G-250快速染色法在SDS-PAGE中的应用

对SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种仅加入3m mol/L盐酸的考马斯亮蓝G-250染色液配合微波加热的快速染色方法的具体条件进行了研究。该方法能在1h内完成,比常规考马斯亮蓝R-250染色法短得多。同时未加入有机溶剂和其他酸,对人体几乎无害,对环境污染小。而其灵敏度与常规考马斯亮蓝R-250染色法相近,适于在实验教学和科研方面进行推广应用。

模拟酶解优化鸽血红蛋白抗氧化肽酶法制备

以鸽血红蛋白为原材料,采用在线数据库ExPASy Peptide Cutter中的蛋白酶模拟酶解,通过生物信息学工具筛选多肽潜在的生物活性、溶解性、毒性和致敏性,由此预测最适宜制备鸽血红蛋白源抗氧化肽的蛋白酶。设置不同的酶解时间、酶添加量和酶解温度作为单因素,探究不同酶解条件对酶解产物水解度和DPPH自由基清除率的影响。在单因素试验的基础上,通过响应面法优化试验,探究酶解法制备鸽血红蛋白抗氧化肽的最优工艺条件。结果表明,蛋白酶K为虚拟筛选出的最佳蛋白酶,最佳的制备鸽血红蛋白抗氧化肽的工艺为鸽血红蛋白浓度1 g/100 mL、pH8、酶解时间3 h、酶添加量415.54 U/g、酶解温度65℃。在此条件下,通过验证试验得出响应值DPPH自由基清除率为(33.21±0.68)%,与预测值相差较小,故而此条件为最优工艺。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验,发现最优工艺条件下鸽血红蛋白酶解后目的条带消失,进一步验证该方法为酶解鸽血红蛋白源抗氧化肽的最优工艺。