大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离体系的建立

为建立和优化大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离技术,从凝胶的浓度、凝胶中乙二醇的使用、上样缓冲液中甘油的浓度、上样量、染色方法等多个方面对Tricine-SDS-PAGE分离效果进行比较研究。结果显示:凝胶质量分数T为18%、交联度C为5%并加入30%(体积分数)乙二醇能分离分子质量低至1.7 ku的大豆多肽,在含30%甘油的上样缓冲液中大豆酶解肽能得到较好的分离,上样量为20μg的分离效果较理想,考马斯亮蓝G-250染色方法能提高大豆低分子多肽电泳的分辨率,同时利用改进的TricineSDS-PAGE电泳技术对不同蛋白酶酶解液的分子质量分布进行了分析。研究结果表明,通过优化的TricineSDS-PAGE电泳技术能够获得较高分辨率的大豆蛋白酶解肽电泳图谱。

Tricine-SDS-PAGE鉴定不同品质饲料蛋白质的组成

[目的]探讨Tricine-SDS-PAGE技术应用于饲料蛋白质的分析与品质鉴定的可行性。[方法]采用Tricine—SDS—PAGE对菜籽饼粕、棉籽饼粕、菜籽浸出粕、热带假丝酵母固态发酵棉籽粕以及黑曲霉固态发酵棉籽粕分别进行凝胶成像分析，鉴定5种不同品质饲料的蛋白质组成。[结果]采用4．0％C、16．5％T的分离胶，可以取得较好的分离效果。菜籽蛋白和棉籽蛋白样本的凝胶成像结果表明，菜籽饼粕中的蛋白质主要集中在泳道中部，为14．4～60．0kD，而棉籽饼粕中的蛋白则在泳道顶端（约90kD）含量较高，2种饲料蛋白得到了有效区分。同一种样本相同处理方法间的凝胶成像结果表明，用黑曲霉对棉籽饼粕进行固态发酵效果优于热带假丝酵母。[结论]5种饲料之间蛋白成像差异显著、直观，Tricine-SDS—PAGE可以作为饲料蛋白品质鉴定的一种有效方法。

改进Tricine-SDS-PAGE法分析重组牛乳铁蛋白肽

为了有效分离3.1kDa乳铁蛋白肽,试验调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度及凝胶的交联度,并加入适量甘油,改进了传统的Tricine-SDS-PAGE方法。结果表明,该方法与常规的SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE相比较,改进的凝胶不仅可以有效分离3.1kDa的肽,而且对分子量为212kDa的大分子量蛋白也有很好的分离效果,明显优于常规的SDS-PAGE和现有的Tricine-SDS-PAGE方法。

Tricine-SDS-PAGE分离鼻咽癌血清多肽方法初探

目的建立鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）血清多肽稳定且灵敏的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法通过Tricine-SDS-PAGE电泳分离鼻咽癌血清多肽,比较乙腈处理与非处理血清,以及电泳时间长短等条件对分离效果的影响。结果鼻咽癌原始血清样本量200μL、经1.2倍体积乙腈沉淀,冷冻干燥后加入40μL的生理盐水溶解,取12~18μL上样,6.7%浓缩胶、夹层胶60 V,之后60 V的电压至电泳结束,电泳时间4 h 20 min,分离10 kDa以下的鼻咽癌血清多肽效果最佳。结论建立鼻咽癌血清多肽的Tricine-SDS-PAGE稳定电泳分离方法,电泳效果与样本的处理方法和电泳条件有关。

Tricine-SDSP-AGE电泳分析小分子多肽

研究旨在解决常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对一些小分子多肽进行电泳分析过程中极易扩散丢失,常无着色带显示等问题。实验采用不同类型胶来电泳分析低分子量多肽,比较Tricine SDS PAGE电泳分析小分子多肽时的聚丙烯酰胺浓度和交联度,为小分子多肽的分析与鉴定提供快速准确的条件。

Tricine-SDS-PAGE分析极低分子量蛋白的条件优化

目的优化适合分析极低分子量蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳方法。方法采用Tricine-SDS-PAGE电泳方法,考察凝胶浓度、交联度对分离效果的影响,筛选出最佳电泳条件。并利用所优化方法分析验证凉山虫草中的蛋白质组分。结果在分离胶交联度为0.165、浓度为5%及浓缩胶交联度为0.04、浓度为2.7%时,Tricine-SDS-PAGE对3～20 kDa蛋白质有较高的分辨率,凉山虫草中的极低分子量蛋白质组分在该条件下比在Tris-SDS-PAGE系统下可得到更好的分离。结论所优化的方法对20 kDa以下极低分子量蛋白的分辨率高,条带的线性关系良好。

转基因小麦Puroindoline蛋白SDS-PAGE方法的研究与应用

小麦嘌呤吲哚蛋白(Puroindoline)是优质遗传特性硬度的生化标记,对小麦磨粉品质起决定性作用。对目前分析此类蛋白的两类Triton-X-114和Tricine-SDS-PAGE系统进行了优化和比较,建立了详细的适合半子粒分离Pin蛋白的电泳方法。采用此法检测转pinA基因的硬粒小麦P34的后代以及转基因硬粒小麦之间杂交子代的外源基因pinA的表达情况,取得了良好的效果。该方法为Puroindoline蛋白的进一步研究奠定了基础,为小麦品质生化和分子标记辅助育种提供了方法。

应用SDS-PAGE显示小分子多肽技术的探讨

为探讨显示小分子多肽技术 ,应用SDS PAGE寻找更简单、快捷的分析小分子多肽的方法。采用 8%T ,3%C的丙烯酰胺浓缩胶和含 6mol/L脲 (或含 2 4 %的甘油 )的 16%T ,6%C的丙烯酰胺分离胶的双层不连续SDS PAGE和三羟基甘氨酸电泳缓冲液显示蛋白分子量标准 ( 2 512～16 94 9kD)和待测样品 ,并对蛋白分子量标准在这两种分离胶中进行了回归分析。结果表明在这两种条件下均能显示分子量小至 2 512kD的多肽 ;多肽样品在含脲和在含甘油的 2L T SDS PAGE中均有较好的显带 ;蛋白分子量标准的直线回归系数分别为r =- 0 966和r =- 0 964。它们是显示小分子多肽和估测其相对分子质量及对多肽分子进行进一步分析的更为简便易行的方法。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)显示小分子多肽的方法 .方法 观察不同方法处理的样品 ,上样量对电泳结果的影响及对分子量标准 (Mr 2 5 12～ 16 949)进行直线回归分析 .结果 样品的不同处理条件未见有差异 ;在该实验系统条件下上样样品为每孔 5～ 10μg较佳 ;分子量标准直线回归系数 r=- 0 .96 2 .结论 样品处理方便 ;上样量少 ;在 16 0 g· L- 1 T,6 0 g· kg- 1 C较低的丙烯酰胺含 6 mol· L- 1脲的分离胶中能够显示 Mr为 2 5 12的多肽 。

用一种改进的电泳方法测定抗冻蛋白的分子量

针对抗冻蛋白分子量较小的特点，该文采用了一种改进的Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量。采用三层胶系统并在电极缓冲液中以Ｔｒｉｃｉｎｅ代替Ｇｌｙｃｉｎｅ。

牛和羊胎盘肽的制备及其生物活性的研究

目的探索一种新型的免疫调节剂,充分利用动物胎盘。方法利用超滤法从牛和羊胎盘中提取胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE法测定其相对分子质量;利用紫外光扫描其最大吸收峰;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用。结果从牛和羊胎盘中成功提取出了胎盘肽,其相对分子质量分别为4 785和4 386;其最大吸收峰分别为210.5和225.4 nm;牛和羊胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中牛胎盘肽以1∶1×103、1∶1×1042组吸收度明显高于抑制组(P<0.05);羊胎盘肽以1∶1×102、1∶1×103和1∶1×1043组效果最为明显(P<0.01)。结论牛和羊胎盘中含有的胎盘肽可成功提取出来,其可明显提高淋巴细胞的转化率,是一种较为理想的免疫调节剂。

鸡骨架蛋白酶解物的电泳分析

用SDS-PAGE和Tricine-PAGE两种电泳方法对不同时间鸡骨架蛋白酶解物进行检测与分析。以鸡骨架肉糜为水解底物,加入1%的Flavourzyme和Protamex(m:m=2:1),在pH值7.0,50℃条件下,水解0、1h、2h、3h、4h。SDS-PAGE和Tricine-PAGE电泳分析结果表明,两种电泳方法分离效果相似,均能比较清楚地反映鸡骨架酶解程度。随着水解时间的延长,低于10KDa的水解肽段不断增加,高于10KDa的蛋白不断减少或逐渐消失,与常规蛋白水解度检测方法(OPA法)的测定结果相符合。利用电泳分析软件,进一步比较图谱中蛋白质的种类、浓度的变化,发现Tricine-PAGE比常规SDS-PAGE能更清楚地分辨水解多肽,可作为一种直观、准确的方法评价鸡骨架蛋白水解程度。

鳞翅目昆虫细胞抗菌肽的诱导、筛选及抗菌活性的研究

选取3种离体培养的鳞翅目昆虫细胞系,采用热灭活的大肠杆菌诱导的方法,诱导其产生抗菌肽,并进行抗菌活性检测、诱导动力学研究及Tricine SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析.结果筛选到1株诱导抗菌活性较高的昆虫细胞系———粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1细胞系,并发现该粉纹夜蛾5B1细胞在诱导后16 h产生了1个分子量大约为8 000的抗菌肽,抗菌活性检测表明其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coliK12D31)、德氏卑沙门氏菌(Salmonella derby)均有不同程度的抑制作用,其中特别是对革兰氏阴性菌———大肠杆菌K12D31和德氏卑沙门氏菌有较强的抑菌活性.

羊骨酶解物中降血压肽的分离、纯化工艺研究

对不同pH和温度等条件下的羊骨酶解物新中7号和中14号进行Sephadex G-25层析,并对层析后的收集液冷冻干燥,利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测其分子量。结果表明:(1)新中7号和中14号羊骨酶解物,酶解8h的ACE活性最高;(2)新中7号羊骨酶解物酶解8h分离出来的蛋白质谱带的分子量在20100u以上,酶解10h分离出来的蛋白质谱带的分子量在7823u以上;(3)中14号羊骨酶解物酶解6h分离出来的蛋白质谱带的分子量14400u以上,酶解8h分离出来的蛋白质谱带的分子量在20100u以上。

家蝇幼虫培养及其抗菌肽的初步研究

通过天然家蝇幼虫的人工培养及Tricine-SDS-PAGE电泳,分离纯化出2种抗菌肽(命名为MDL-1、MDL-2),并检测了该抗菌肽的抑菌活性。MDL-1的相对分子量10772Da,MDL-2的相对分子量6091Da。实验结果表明:剩肉菜(骨头和虾皮等)对天然家蝇的产卵引诱力最大;红糖和奶粉的最佳比例为3:1;家蝇幼虫食料最佳含水量为80%;家蝇幼虫单体平均增重最大的最佳培养基为麦麸和骨头的混合物。抑菌活性检测结果:MDL-1对枯草芽胞杆菌的抑菌效果最强,大肠杆菌次之,金黄色葡萄球菌最差;MDL-2对大肠杆菌的抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌次之,枯草芽胞杆菌稍差。

羊和猪胎盘肽的提取

利用超滤法从羊和猪的胎盘中提取胎盘肽,用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法对其进行初步定性鉴定。成功分离显示出了羊的胎盘肽,其分子质量小于5 ku,与人胎盘肽的分子质量范围完全符合。猪的6 ku的蛋白带很明显,但低于5 ku的蛋白带不是很明显。

电子显微镜观察抗菌肽抗菌机理

电子显微镜观察正常生长的大肠杆菌在受到抗菌肽作用后,在不同时间里,被作用的大肠杆菌形态有很大的差异.大肠杆菌被抗菌肽作用30 min后在形态上看不到明显的变化,而作用过夜后(约12 h)细菌内部电子密度增强,质壁出现分离,细胞壁出现空泡并且界限模糊.作用16 h以上电子密度进一步增强,细菌走向老化死亡趋势.说明抗菌肽使细菌细胞膜的通透性发生了改变.

人乳与牛乳天然小分子蛋白肽的差异对比及功能分析

研究利用超滤技术和Tricine-SDS-PAGE电泳将人乳与牛乳中天然存在的小分子蛋白肽进行分离。蛋白条带经质谱鉴定发现,人乳小分子蛋白肽含有28种,牛乳小分子蛋白肽含有24种,二者存在18种相同蛋白肽。Gene Ontology(GO)功能注释分析发现,在生物过程中,人乳小分子蛋白肽发挥的作用要高于牛乳小分子蛋白肽,尤其体现在免疫过程中的作用;在分子功能上,二者主要分子功能是结合作用,其中人乳小分子蛋白肽的结合作用强,而牛乳小分子蛋白肽参与的转运活性的分子功能大于人乳小分子蛋白肽;在细胞组成上,二者均参与了细胞与细胞膜的组成。通过Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)代谢通路分析可知,人乳小分子蛋白肽参与酪氨酸和抗原的加工和呈递2个代谢通路,而牛乳小分子蛋白肽仅参与系统性红斑狼疮代谢通路。对人乳和牛乳中的小分子蛋白肽组成进行研究,不仅为揭示人乳蛋白和牛乳蛋白的差异及其生理功能提供了理论依据,而且为婴幼儿食品、母乳化制品达到母乳水平提供有益探索。

鸡骨蛋白酶解过程中的产物性质研究及电泳分析

研究风味蛋白酶酶解鸡骨过程中的氨基氮、可溶性氮、肽基氮的变化规律以及产物的呈味特性的变化趋势。结果表明:氨基氮和可溶性氮在酶解过程中逐渐增加,肽基氮增加到最大值后下降;酶解产物鲜味随时间延长而增加,苦味值在酶解后期逐渐稳定。游离氨基酸含量在24h达到最大值,呈味氨基酸的大量释放对酶解液的风味有重要影响。酶解液的Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,在酶解过程中,多肽分子质量逐渐降低,酶解24h,酶解液分子质量约都集中在10.0kD以下。

菜青虫细胞体外诱导产生抗菌肽初报

利用灭活的大肠杆菌诱导昆虫离体细胞Pr-49和Tn-5B1细胞,对诱导产物进行抑菌试验,结果显示形成了明显的抑菌圈,Tricine-SDS-PAGE分析,Pr-49细胞诱导后多出了1条分子量约7 000新的蛋白带,而且至少有3条加强蛋白带.诱导Tn-5B1细胞发现多出2条蛋白带,其中1条分子量为已证实的7 691,通过直接取浓缩上清诱导物对比浓缩上清和细胞混合物的电泳分析,新的蛋白条带为分泌型物质.初步断定离体培养的Pr-49细胞和Tn-5B1细胞经灭活的大肠杆菌诱导分泌了具有抗菌活性的物质.