黑麦Secalin蛋白的SDS-PAGE检测法

对84份中国冬小麦栽培品种分别使用醇提法和水提法提取其胚乳贮藏蛋白,并用SDS-PAGE检测黑麦Secalin蛋白的有无,以此来估算我国含有1B/1R易位的冬小麦品种的频率,结果表明:醇提SDS-PAGE黑麦Se-calin蛋白检出率为46.4％,水提SDS-PAGE黑麦Secalin蛋白检出率为56.0％,后者比前者灵敏;醇提SDS-PAGE和水提SDS-PAGE都是检测黑麦Secalin蛋白的有效方法,若同时使用效果会更好,因为它们可以互相补充,由此检测可知,我国含有1B/1R易位的冬小麦品种的频率高于59.5％。

内蒙古地区传统发酵酸马奶不同发酵时期乳清蛋白SDS-PAGE分析

[目的]探究内蒙古地区传统酸马奶发酵过程中乳清蛋白的变化情况。[方法]以从内蒙古锡林郭勒盟镶黄旗采集的马奶为原料制备传统发酵酸马奶,发酵温度为(22±2)℃,人工捣拌频率5次/d,每次300下;每隔12 h采集1次发酵0~96 h的酸马奶样品;离心提取酸马奶乳清蛋白样品,利用条件优化后的SDS-PAGE电泳技术分析酸马奶乳清蛋白在发酵过程中变化情况。[结果]优化后的SDS-PAGE电泳分析条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,分离胶电泳电压180 V、电泳时间300 min,上样浓度0.5μg/μL,上样体积16μL,改良考马斯亮蓝法染色、脱色各12 h。在发酵0~12 h内,酸马奶乳清蛋白含量增加,在12 h时达到最高值(5.12μg/μL),之后随发酵时间延长呈下降趋势,发酵96 h时降低至3.92μg/μL。SDS-PAGE电泳图谱分析显示,在分子量10~70 kDa区间内共获得乳清蛋白有效条带13个。在发酵过程中,β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白3种蛋白质含量呈现不同程度的波动,发酵72 h时三者含量之和最高,占乳清蛋白总含量的85.73%,并且在发酵过程中始终保持较高水平,是传统发酵酸马奶发酵96 h内乳清蛋白的主要组分,其中,β-乳球蛋白含量最高,平均占乳清蛋白总含量的38.92%。分子量在20~40 kDa的酪蛋白含量在发酵24 h之后开始下降,至60 h时条带消失。分子量为10.33 kDa的蛋白质在发酵12 h内被消耗,60 h时再次出现且含量随发酵时间延长逐渐增加,在84 h时达到峰值,占乳清蛋白总含量的9.84%。分子量为49.80 kDa的蛋白质在发酵72 h之后开始出现,含量在96 h时达到乳清蛋白总含量的4.11%。与其他乳清蛋白组分相比,β-乳球蛋白和免疫球蛋白含量在发酵过程中变化较小。[结论]内蒙古地区传统发酵酸马奶在发酵96 h内,分子量为10~70 kDa的乳清蛋白含量表现出有规律的消长,主要被消化分解的蛋白质是酪蛋白。不同发酵阶段酸马奶乳清蛋白组成及含量存在一定差异,但原有主要组分β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白始终保持较高水平。自发酵中期开始,酸马奶乳清蛋白中相对分子质量较小的肽(10.33 kDa)所占比例逐渐升高,由此可见,传统发酵酸马奶中不仅保留马奶中乳清蛋白原有的营养价值,而且通过发酵还增添了易吸收的小分子量蛋白质。

SDS-PAGE凝胶电泳对驴皮胶及常见伪品胶中的蛋白分析研究

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为。方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20~30μg。垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色。结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带。结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析。

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究 ,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测 ,提出了应用效果良好的电泳系统 ,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证 ,具有很好的参考价值。

利用SDS-PAGE法检测火腿肠中大豆蛋白的含量

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结合凝胶成像来分析测定火腿肠中大豆分离蛋白的含量.试验得出电泳分离肉制品中大豆分离蛋白的优化条件为：浓缩胶为5%、分离胶为12%、上样量为20μL、初始电压为80 V,进入分离胶层后电压100 V.大豆蛋白含量在06%范围内与其酸性A3亚基线性相关,回归方程为Y=2.760 9X-0.383 8,相关系数为0.994 1.

SDS－PAGE和HPLC－荧光检测分离鉴定恩施高硒区大豆中含硒蛋白

采用凝胶电泳技术分离恩施高硒地区大豆中的含硒蛋白组分，分辨出２７条蛋白条带。用高效液相色谱－荧光测定法对这些条带分别进行硒含量测定并进行空白扣除，发现其中有１３条带含硒。用标准分子量蛋白标定含硒蛋白组分分子量分别为：５８．１－６０．３；５２．５－５３．７；４６．８－５０．１；２９．５－３０．９；２８．８；２５．１－２５．７；２４．３；１９．７－２０．９；１８．４－１８．６；１６．８－１７．９；１６．１－１６．２；１５．２－１５．８和１４．３－１４．８ｋＤａ。

应用RT-PCR、斑点杂交法和SDS-PAGE检测水稻黑条矮缩病毒

用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 。

不同诱导方法诱导家蝇幼虫血淋巴中抗菌肽差异性的SDS-PAGE检测

目的检测不同诱导方法(针刺,紫外,热诱导)诱导家蝇三龄幼虫血淋巴中的抗菌肽的差异性。方法用不同诱导方法诱导家蝇三龄幼虫,提取血淋巴后,采用梯度乙腈洗脱,应用SDS-PAGE检测抗菌肽的差异性。结果针刺与未诱导组无明显差异,热诱导组中30%乙腈洗脱组分中在30～71 KD中出现3个差异条带,紫外诱导组50%乙腈洗脱组分在16～20 KD中出现2个差异条带,60%乙腈洗脱组分中在16～20 KD中出现2个差异条带。结论综合幼虫的成活率及操作的方便性,最佳的诱导方法为热诱导。

利用蛋白质SDS-PAGE电泳方法检测转基因大豆的初步研究

为建立利用蛋白质检测转基因大豆的较稳定的新方法,采用SDS-PAGE蛋白质电泳方法对转基因大豆和非转基因大豆进行检测,初步研究发现转基因大豆中大约45 ku蛋白带的表达量明显强于非转基因大豆中相对应的蛋白带,通过固定转基因大豆的上样量,逐渐增加非转基因大豆的上样量进一步验证了结果。以国内不同品种的非转基因大豆进行SDS-PAGE蛋白电泳检测,初步排除了结果偶然性的产生。

SDS-PAGE凝胶原位检测抗菌蛋白的活性——生物自显影技术

以大肠杆菌诱导的柞蚕蛹免疫血淋巴为例,介绍一种SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后的凝胶原位检测抗菌活性组 分的生物自显影技术,该技术适用于鉴定各种不同生物体来源的样品中起活性作用的抗菌蛋白或抗菌肽。

1种利用SDS-PAGE检测过氧化物酶同工酶的分析方法

[目的]建立1种能够检测过氧化物酶同工酶的电泳方法。[方法]利用SDS-PAGE分离蛋白质样品分辨率较高的优点,借助SDS-PAGE分离蛋白质样品,电泳完毕后,胶板用Triton X-100处理,使过氧化物酶同工酶复性,以醋酸联苯胺染色。[结果]利用新建立的方法发现,5种菖蒲属植物含有6条过氧化物酶同工酶带,而利用传统的PAGE分析方法则只显示5条过氧化物酶同工酶带。与PAGE同工酶检测方法比较,新建立的方法分离效果更好,酶带边界更清晰,是1种分辨率更高的检测方法。[结论]利用新建立的方法得到的过氧化物同工酶电泳图谱可以为菖蒲的科学分类和鉴定提供新的生化指标。

SDS-PAGE法检测产气荚膜梭菌毒素型研究

为了探索一种快速、准确检测产气荚膜梭菌毒素型的方法，以便有效预防控制该病的流行和发生，利用SDS-PAGE方法，对通过EusA鉴定的20株（A型16株、C型3株和D型1株）德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株，以及通过Multiplex-PCR鉴定的57株山东省疫区产气荚膜梭菌分离株外毒素蛋白的相对分子质量进行测定，以确定毒素的种类，进而确定菌株的毒素型。结果表明，产气荚膜梭菌标准株、德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株、山东省疫区产气荚膜梭菌分离株粗提外毒素的质量浓度分别为3．261，2．238～3．333，1．451～3．109mg／mL，精提外毒素的质量浓度分别为0．803，0．521～O．999，0．530～0．812mg／mL。SDS-PAGE法检测的20株德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株中A型17株、C型2株、D型1株，与EuSA检测结果的符合率为95．0％；SDS-PAGE检测的57株山东省疫区产气荚膜梭菌分离株全部是A型，与Multiplex-PCR检测结果的符合率为100％。说明应用SDS-PAGE方法对产气荚膜梭菌的检测结果与ELISA方法的检测结果有一定的差异性，与Multi-plex-PCR方法的检测结果一致。

用PCR和SDS-PAGE两种方法对转基因大豆的检测

采用PCR和SDS-PAGE电泳两种方法对转基因大豆(美国)和非转基因大豆(国内3个不同样品)进行了检测.结果显示:转基因大豆可以检测出195bp的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV35S)序列片段和320bp的抗草甘膦基因(EPSPS)片段;SDS-PAGE蛋白质电泳中有一约40kDa的蛋白带出现;而非转基因的3个国内大豆品种中均没有CaMV35S启动子序列片段和抗草甘膦基因片段,SDS-PAGE蛋白质电泳检测也没有发现转基因大豆中存在的40kDa的蛋白带.

SDS-PAGE和PCR检测1B/1R易位系研究初报

采用18个冬小麦品种作为供试材料,分别通过SDS-PAGE检测黑麦Secalin蛋白和PCR检测黑麦1RS染色体或其片段,结果表明:SDS-PAGE检测不出不带有secalin蛋白的1B/1R小片段易位系,而PCR则能检测出,从而提高1B/1R易位系的检出率;SDS-PAGE和PCR结合是检测1B/1R易位系的一种快速经济的有效方法。

改良的Tricine—SDS—PAGE电泳检测胸腺肽分子量

目的建立一种分析胸腺肽制剂中多肽分子量分布的简便可行的方法。方法采用改良的Tricine-SD-PAGE电泳方法分析胸腺肽制剂中多肽的分子量分布，并分析其中胸腺素α1的含量。结果采用该法可检出1μg的胸腺肽α1，分析国内市场上的胸腺肽制剂多肽分子量分布范围在3．5～8．5kD。结论该法适用于分析胸腺肽制剂中多肽组分的分子量分布和胸腺肽α1的存在，可用于胸腺肽制剂的质量控制。

生猪肉与加热猪肉SDS-PAGE电泳检测方法的研究

SDS-PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法。生猪肉与加热终温度不同的猪肉经蛋白质提取后进行SDS -PAGE电泳分析 ,从其分离谱带与加热终温的关系可对其进行检测。

用SDS—PAGE、Western blot和ELISA方法检测猪囊虫囊液中有效抗原的研究

用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法检测猪囊虫囊液中的有效抗原,结果猪囊虫囊液中有8条抗原区带被猪囊虫病患者血清中抗体识别,分子量分别为255、185、105、69、64、60、48、和41kDa。其中第至3第7条免疫活性较强,含量较高,为有希望用于研制猪囊虫病疫苗的抗原分子。

SDS-PAGE法检测动物肌肉蛋白质加热终点温度的研究

为了探索检测动物组织蛋白质热变性程度的方法,分别对猪、牛、羊、鸡、鱼五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理(新鲜未加热、50、60、70、80、90、100℃),对处理后的样品提取蛋白质进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果显示,同种动物组织经不同温度热处理,所得电泳图谱具有较大差异,电泳条带的数量随温度的升高逐渐减少,猪、牛、羊三种动物肌肉组织加热到80℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度;鸡和鱼的肌肉组织加热到70℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度。不同种动物组织经相同温度热处理所得电泳图谱显示:猪、牛、羊三种动物组织蛋白质的电泳图谱相似,与鸡和鱼组织蛋白质的电泳图谱差异显著。

基于SDS-PAGE与荧光标记检测技术的黄淮麦区小麦品种(系)HMW-GS组成分析

利用SDS-PAGE和荧光标记检测技术同时对91份黄淮麦区小麦品种(系)的高分子质量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)组成进行分析,以期为黄淮麦区小麦品质改良提供理论依据。SDS-PAGE检测结果表明,在Glu-1位点共出现14种亚基类型和28种亚基组合。Glu-A 1位点有3种亚基类型,分别是1(59.34%)、Null(37.36%)、2^*(3.30%);Glu-B1位点有5种亚基类型,分别是7+8(52.75%)、7+9(25.27%)、7(12.09%)、13+16(7.69%)、14+15(2.20%);Glu-D1位点有6种亚基类型,2+12(46.15%)、3+12(13.19%)、4+12(8.79%)、5+10(29.67%)、10(1.10%)和12(1.10%)。主要亚基组合类型为1/7+8/5+10(14.29%)、1/7+8/2+12(12.09%)、Null/7+8/2+12(12.09%)。荧光标记检测结果表明,供试材料中含有Ax 2^*、Dx2、Dx5、Dy10、Dy12的材料分别为3、42、27、28、63份,与SDS-PAGE检测结果相吻合。供试材料品质评分介于5.5~11.0分,平均评分为7.78分,亚基组合Null/13+16/5+10和1/13+16/2+12评分较高,均在10.0分及以上。聚类分析结果表明,供试材料可分为4类,其中第Ⅲ类集中了大部分强筋小麦材料。

SDS-PAGE法检测人甲状腺及其肿瘤组织中bFGFs条件的选择

探讨ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法检测人甲状及其肿瘤组织中ｂＦＧＦｓ（ｂａｓｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ）的条件，。方法：采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳法检测人甲状腺及其肿瘤组织中的ｂＦＧＦｓ。结果；分离胶浓度为１２．５％，胶原为０．５ｃｍ，电流强度为３０ｍＡ，样品量为５－６ｕｌ，标准ｂＦＧＦｓ上样量为２０ｕｌ较适全人甲状腺及其肿瘤组织中各种分子量的ｂＦＧＦｓ的分离及鉴定。