SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色新方法的研究

通过几种金属盐溶液对 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳染色的实验表明 ,0 .2 5 mol/L的Ca Cl2 和 Mg Cl2 溶液能够对蛋白质进行有效的染色 ,经这 2种溶液染色的蛋白质都能够从凝胶中洗脱回收。尤其是 Ca Cl2 法灵敏度更高 ,而且蛋白质条带形成之后也十分稳定。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离拟南芥叶片实验教学的改进

目的:改进拟南芥叶片的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离拟南芥叶片。主要比较和分析了两种样品溶解液和两种染色方法对实验的影响。改进的样品溶解液可防止样品的损失,节约样品和试剂;改进的染色方法操作时间短,灵敏度高,分离条带多且清晰。结论:改进的实验方法可以得到更为灵敏、清晰的实验结果,同时节约了实验经费和实验时间,减少了实验准备人员的工作量,更好地适应和促进了实验教学工作。

SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳与液质联用技术分离和鉴定小鼠巨噬细胞膜蛋白

用膜蛋白分离试剂盒提取巨噬细胞膜蛋白,然后用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳进行分离。将每个泳道平均切成8份,合并两个泳道同样位置的胶条,分别进行胶内酶解。酶解得到的多肽经脱盐后进入毛细管反相柱进行反相分离,分离后的肽段直接进入电喷离子源质谱仪进行一级和二级质谱分析。质谱数据用SEQUEST软件对小鼠IPI蛋白数据库进行检索,得到一个含有1000多种蛋白的名单,其中包括458种经GOA注释的膜蛋白。对膜蛋白部分进一步分析发现,其中包括CD11b、TNF-a、F4/80、CD14、CD18、CD86、CD44、CD16、Toll样受体等已知表达在巨噬细胞表面的蛋白分子,还包括另外13种CD分子和18种Ras相关GTPase,除了这些已知蛋白之外,还鉴定出若干新蛋白分子,为进一步深入研究巨噬细胞生物学功能提供了目标分子。

利用玉米种子盐溶蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对不同品种的玉米种子中盐溶蛋白进行分析,并在研究过程中对电泳条件进行了改进。结果表明:改进后使不同玉米品种盐溶蛋白电泳谱带差异更明显.各玉米种子盐溶蛋白的电泳图均有鲜明特征,彼此可以区分,视作它们各自的“指纹”。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物肌肉蛋白热变性的研究

分别对鸡、牛、猪、羊、鱼等五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理,对处理前后的样品进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示五种动物肌肉组织经不同温度处理,所得电泳图谱具有显著差异,反映蛋白质变性与温度存在密切相关性。因此,可采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物组织蛋白的热变性程度,从而应用于肉制品加工过程中热熟程度的判定。该方法特异性和敏感性较强,操作简单,结果判定直观可靠。

无电极缓冲液的水平薄层SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

无电极缓冲液的水平薄层ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳邵军，陈镔复，刘智广（中心实验室）关键词蛋白质，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，缓冲液，凝胶条中图法分类号Ｑ５１电泳已成为当代测定生物大分子特性和纯度的主要工具之一。它的高分辨率既能用于分析又能用于制备，设...

采用聚丙烯酰氨凝胶电泳技术鉴别龟甲及其混伪品

目的:从蛋白水平上对龟甲药材及其混伪品进行鉴别,分析龟甲及其混伪品的差异。方法:本研究采用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)技术对龟甲及其混伪品进行鉴别,并对龟甲的背甲与腹甲、不同批次正品龟甲药材进行对比分析。结果:对于同一品种的龟甲,其背甲与腹甲的蛋白质亚基相似,电泳得到的蛋白质条带几乎无明显差别;不同批次正品龟甲在一维电泳中显现出的蛋白亚基条带差异性很小,其电泳蛋白条带受产地、批次等因素影响较小;正品龟甲在14~19 kDa,有3条高丰度蛋白聚合在一起,这“二细一粗三聚合”的条带群,可以作为鉴别正品龟甲和其他龟甲混伪品的初步依据。结论:结果显示,SDS-PAGE电泳技术可以对龟甲及其混伪品药材进行初步的鉴别,利用蛋白条带的区别可对其进行区分。

非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳及银染法临床应用探讨

目的:建立一种省时简便和灵敏可靠的检测筛查基因点突变的方法,即PCR-SSCP(PCR-Singlestrandconformationpolymorphism)银染分析技术。方法:应用改进的PCR-SSCP银染分析技术,检测妊娠期胆内胆汁淤积症患者外周血基因组DNA中MDR3基因外显子14的点突变情况。结果:非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳在有冷水循环装置控制下,结果稳定可靠,受环境温度影响小;但银染时,需根据室温调整染色时间及显影液的配制,当室温高于25℃时,碳酸钠需预冷,有利于控制背景色,得到更为满意的结果。结论:利用非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳及银染法筛查目的基因的点突情况,具有省时简便和灵敏可靠的特点,且重复性好,避免了盲目测序及资金浪费。

浅析聚丙烯酰氨凝胶电泳实验中常见问题及解决方法

以四川省达州市主要农作物(水稻、玉米等)种子质量检测检验和园艺植物(果树、茶等)种质资源鉴定、性状分析时,基于聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的PCR扩增产物检测试验中存在的常见问题,探索可操作性的解决方法,以期为同行提供一些帮助和启示。

如何正确估计蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品加样量

在做蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）时，使用的仪器设备、做胶和制样的方法都差不多，但结果却五花八门，相去甚远。有的条带清新，背景干净，令人赏心悦目；有的却条带模糊、肥瘦不均，其貌不扬；有的甚至歪歪扭扭，画成了地图。看来并不困难的操作，结果为什么会有如此之大的区别？除了试剂质量、制胶过程和跑胶的具体细节外。失败的主要原因往往在于样品制备的缺陷和加样量不适当。只有在样品制备良好、加样量又适当的情况下，

一种优化的双向凝胶电泳方法

双向凝胶电泳技术是蛋白质组学研究的基础性技术平台 ,如何得到一张高质量的双向凝胶电泳图谱是进一步深化研究的关键 .该文利用人永生化食管上皮细胞系SHEE为材料 ,采用IPG DALT系统双向凝胶电泳技术 ,通过对样品的制备及预处理、第一向等电聚焦、平衡和两向间的转移等关键步骤进行改进和优化 ,获得了高分辨率。

尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的 :探讨尿素对Tricine-SDS -PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法 :利用常规SDS -PAGE和Tricine -SDS - PAGE分离小分子肽 ,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果 :调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成 ,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为 5 .0 5 % ,能够改善小分子肽的分离效果。加入 36 %的尿素比加入甘油可以更有效分离 1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论 :尿素改善SDS -PAGE分离小分子肽的效果 ,制作尿素胶时 ,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。

脱脂松仁粕中球蛋白的提取工艺及其SDS–PAGE分析

以脱脂松仁粕为原料,采用Osborne法提取松仁粕中的球蛋白,设NaCl质量分数(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)、料(质量,g)液(体积,m L)比(1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35)、提取时间(30、60、90、120、150、180 min)和提取温度(40、45、50、55、60、65℃)4个单因素试验,再用响应面法优化松仁粕中球蛋白的提取工艺,并对其分子量进行分析。结果表明:当NaCl质量分数为2.5%,料液比为1∶15,提取时间为150 min,提取温度为56℃时,松仁粕中球蛋白的提取率较高,为15.32%;SDS–PAGE分析结果表明,脱脂松仁粕球蛋白的分子量为41 320、27 520、21 690、16 310、15 180。

不同寄主菟丝子的凝胶电泳鉴别研究

目的:考查不同寄主菟丝子的种子蛋白差异。方法:采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)技术。结果:菟丝子与伪品之间差别显著;不同寄主的菟丝子之间亦存在一定差异。结论:SDS PAGE可作为不同寄主菟丝子及其与伪品的鉴定与质量评价的依据。

几种SDS—PAGE蛋白质染色方法的比较

本文在对已报道的三种不同的SDS—PAGE蛋白质染色方法加以改进的基础上,对各测定方法的灵敏度、重复性及有关影响染色的因素进行了比较和讨论。结果表明,改良的Pharmacia公司银染色法所得到的结果最好,适合作为实验室常规检测手段。

SDS—PAGE的蛋白质染色方法

在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,常用考马斯亮蓝或硝酸银给凝胶中的蛋白质条带染色,这两种方法是当前电泳染色中的主要方法,应用广泛.最近几年,又出现了新的染色方法—曙红Y染色法和尼罗红染色法.四种染色法各有特点.现把四种染色法介绍如下,以供同行们染色时参考与选择.1 考马斯亮蓝染色法考马斯亮蓝染色法是SDS-PAGE中蛋白质带染色的常规方法.该法重复性好,但灵敏度不高,检出下限约为0.1μg的蛋白质,样品中每种蛋白质的浓度应为20～30ng/μl.考马斯亮蓝染色法的染色强度依赖于蛋白质的特性.碱性蛋白质、低分子量蛋白质在醇、酸固定时容易从凝胶中洗脱下来.用此染色法不能使糖蛋白染色.

牛羊乳酪蛋白制备及电泳分析比较

采采用新鲜和复原的牛羊乳为原料,等电点沉淀,通过洗涤、干燥等步骤分别制得牛乳和羊乳酪蛋白,用凯氏定氮法对其进行定量检测,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析比较牛羊乳酪蛋白组分差异。结果表明:牛乳酪蛋白得率为86.75%,羊乳酪蛋白得率为90.55%,高含量的酪蛋白主要集中在电泳图谱的中分子量组,可分为αs1-CN、αs2-CN、β-CN和κ-CN,牛羊乳αs2-CN分子量羊乳大于牛乳,牛乳α-CN含量比较多,羊乳β-CN含量比较多,鲜乳与复原乳全蛋白主要组分在电泳图谱中除酪蛋白差别外,上端的高分子量组清蛋白区羊乳IgG重链的分子量比牛乳小。应用蛋白质电泳分析技术可以区分羊乳和牛乳的蛋白质组分,等电点沉淀法制备酪蛋白的方法简单,易于操作。

左旋门冬酰胺酶鉴别方法的研究

目的 比较主旋门冬酰胺酶的两种鉴别方法。方法 分别利用薄层色谱法和电泳法进行实验。结果 两者都能很好地鉴别出左旋门冬酰胺酶。结论 在一般鉴别实验中,薄层色谱法较电泳法更简便,快速。

N-乙酰半胱氨酸防治内毒素所致肝损伤的实验研究

目的 探讨N 乙酰半胱氨酸 (NAC)可否对内毒素性肝损伤进行抑制及相应的细胞、分子机制。方法 健康雄性昆明种小鼠 30只随机分为肝损伤组、NAC组和对照组 ,不同给药后检测肝匀浆肿瘤坏死因子(TNF) α、丙二醛 (MDA)和还原型谷胱甘肽 (GSH)含量变化 ,并行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,分析NAC对核因子(NF) κBp6 5、IκBα的影响。 结果 NAC不但使肝组织TNF α、MDA含量降低 ,GSH含量升高 ,且抑制了内毒素诱导胞质IκBα降解和NF κBp6 5的表达。 结论 NAC可能通过调整库普弗细胞氧化还原平衡 ,影响NF κBp6 5活化 (核易位 ) ,从而抑制了TNF α等炎性因子基因的表达 ,减轻肝损伤。

不同日龄大鼠肝脏中非组蛋白染色体蛋白(NHCP)两相电泳图谱比较

本文报导了不同日龄大鼠肝脏中非组蛋白染色体蛋白(UP)和(NP),在高分辨率的等电聚焦—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上蛋白斑点出现规律性变化。并讨论了这一变化与大鼠不同发育阶段的激素水平和基因调节的关系。