碘乙酰胺在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用

将碘乙酰胺引入SDS-PAGE样品处理,可以保证蛋白质样品完全变性并保持还原状态。碘乙酰胺作为蛋白酶抑制剂、巯基封闭试剂用于生物质谱分析、蛋白质分子结构分析和双向凝胶电泳样品制备等。在还原SDS-PAGE中,用6 mol/L的盐酸胍使蛋白质分子完全变性.用高浓度β-巯基乙醇还原分子中的二硫键.在加入碘乙酰胺至终浓度为0.1mol/L,于37℃反应2 h,加还原SDS-PAGE样品缓冲液100℃,3 min,然后进行SDS-PAGE分析。盐酸胍和碘乙酰胺可保证含二硫键的蛋白质分子完全变性并维持还原状态,在应用SDS-PAGE分析蛋白质样品的分子量和纯度中有一定意义,并且该方法简便易行。

人参水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱研究

目的:建立人参药材的水溶性蛋白 SDS—PAGE 指纹图谱,为人参药材的质量评价提供依据。方法:采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片,通过凝胶电泳图像分析软件生成谱图后,经计算机辅助相似度评价系统进行评价,并得到对照指纹图谱。结果:人参水溶性蛋白有9个特征带峰,12批次人参药材的相似度在0.90～1.0之间,稳定性、重复性和精密度良好。结论:该法具有实验设备简单、专属性强、灵敏度高、更直观的特点,可作为人参水溶性蛋白的 SDS—PAGE 凝胶指纹图谱,用于人参药材的质量评价。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染脱色方法的比较研究

本文对几种SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)快速染脱色方法进行了比较研究,从蛋白质回收,染色时间及其灵敏度的角度对它们的优缺点进行了比较,并且阐述了它们各自的染色机理。与常规考马斯亮蓝染色法相比,这几种方法染脱色的清晰度稍差,但是灵敏度相当,在实践上均是可行的。尤其是CaCl2、KCl法的灵敏度更高,染色时间短,

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量

目的建立改进的低分子SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量 (Mr)。方法考察不同因素对电泳结果的影响 ,对Mr 标准进行直线回归分析 ,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr。结果测得各条带的Mr 分别为 :2 35 0 0、15 4 0 0、1340 0、1130 0、930 0、80 0 0。结论此法供试品处理方便 ,用量少 ,在含 6mol/L尿素的分离胶 (交联度为 16 .5 % ,丙烯酰胺总浓度为 6 % )中能同时显示中、低Mr 的条带 ,是一种测定中、低Mr 的较好方法。

检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇蛋白的新方法——海波银染法

介绍一种检测SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇幼虫蛋白的新方法———海波银染法。该方法对传统银染方法中的试剂与步骤加以改进 ,省略了乙醇固定与洗涤步骤 ,只需 2 0min即可完成全部染色过程 ,且仅在国产分析纯试剂及普通操作条件下 。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。

银杏营养贮藏蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

营养贮藏蛋白质在木本植物的生长发育过程中起着重要的作用。应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对银杏不同部位的营养贮藏蛋白质进行了研究,经分析初步确定了两种营养贮藏蛋白质组分的分子量,探讨了其季节性变化规律,结果表明银杏皮层中的营养贮藏蛋白质含量均高于木质部中的含量。

妇血宁与氨肽素不连续体系SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳特征研究

目的研究妇血宁与氨肽素及其片剂不连续体系SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)特征差别。方法用妇血宁与氨肽素及其片剂进行不连续体系SDS PAGE ,并对其结果进行对比。结果妇血宁及其片剂在整个泳道均有分布 ,在分子量大于 90 0 0 0和小于 2 0 0 0 0的区域染色较深 ,在泳道的最前端有至少 1条明显的条带 ;氨肽素及其片剂成分主要分布在分子量小于 2 0 0 0 0的区域 ,在整个泳道无明显的条带 ;妇血宁和氨肽素与其相应的片剂电泳图谱没有明显的不同。结论在此SDS PAGE条件下 ,妇血宁与氨肽素各有不同的电泳特征 。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)显示小分子多肽的方法 .方法 观察不同方法处理的样品 ,上样量对电泳结果的影响及对分子量标准 (Mr 2 5 12～ 16 949)进行直线回归分析 .结果 样品的不同处理条件未见有差异 ;在该实验系统条件下上样样品为每孔 5～ 10μg较佳 ;分子量标准直线回归系数 r=- 0 .96 2 .结论 样品处理方便 ;上样量少 ;在 16 0 g· L- 1 T,6 0 g· kg- 1 C较低的丙烯酰胺含 6 mol· L- 1脲的分离胶中能够显示 Mr为 2 5 12的多肽 。

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法提纯蛋白质

对于含有多种成分且各蛋白质成分的分子量相差较小的菌体蛋白质的提纯 ,用一般的沉淀法、层析法均达不到理想效果。作者选用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法进行提纯 ,并尝试电泳后不经过染色 ,直接从凝胶中分离所需要的蛋白质成分。该实验对制胶、电脉、染色、脱色等各个环节进行了适当的改进 ,取得了较好的提纯效果。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳4种染色方法的比较研究

[目的]比较SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中蛋白质的染色方法,建立美洲大蠊抗肿瘤活性部位SDS-PAGE后更为合适的染色方法。[方法]以牛血清白蛋白(BSA)为标准品,采用考马斯亮蓝染色法、氯化钾染色法、钙染色法和银染色法进行比较,在此基础上,将样品美洲大蠊抗肿瘤活性部位进行SDS-PAGE电泳和染色。[结果]结果表明银染法能够准确、快速、简便的对美洲大蠊抗肿瘤活性部位的SDS-PAGE进行染色。[结论]为美洲大蠊药用价值的研究奠定了基础。

人表皮生长因子发酵液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

一般蛋白质样品的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)通常只用一种浓度的分离胶(单层分离胶)。我们发现,将这种方法用于未经处理的重组人表皮生长因子(rhEGF)发酵液的电泳时,效果不好。我们推测可能是由于发酵液成分复杂,蛋白分子大小不均。基于这种考虑,我们就分离胶浓度对电泳效果的影响进了一些探索。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进

针对常规的SDS-PAGE染色脱色耗时长,还需使用甲醇的缺点,对传统的SDS-PAGE染色脱色进行了改进,用无毒的乙醇替代有毒的甲醇.改进后的SDS-PAGE染色脱色具有耗时短,且不需要使用甲醇的优点.

对SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验课的改进

介绍生物科学与技术系生化教学实验室在生化实验教学系列课程建设中,对＂SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验＂课的具体改进,包括对该实验课硬件设备及软件的改进,以及改进后的教学效果评价。

SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳与液质联用技术分离和鉴定小鼠巨噬细胞膜蛋白

用膜蛋白分离试剂盒提取巨噬细胞膜蛋白,然后用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳进行分离。将每个泳道平均切成8份,合并两个泳道同样位置的胶条,分别进行胶内酶解。酶解得到的多肽经脱盐后进入毛细管反相柱进行反相分离,分离后的肽段直接进入电喷离子源质谱仪进行一级和二级质谱分析。质谱数据用SEQUEST软件对小鼠IPI蛋白数据库进行检索,得到一个含有1000多种蛋白的名单,其中包括458种经GOA注释的膜蛋白。对膜蛋白部分进一步分析发现,其中包括CD11b、TNF-a、F4/80、CD14、CD18、CD86、CD44、CD16、Toll样受体等已知表达在巨噬细胞表面的蛋白分子,还包括另外13种CD分子和18种Ras相关GTPase,除了这些已知蛋白之外,还鉴定出若干新蛋白分子,为进一步深入研究巨噬细胞生物学功能提供了目标分子。

复方参果液对大鼠半乳糖性白内障晶状体生化影响(Ⅰ)——水溶性晶状体蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的 :探讨复方参果液防治白内障的作用机理。方法 :大鼠用半乳糖诱发白内障同时灌胃给药 30天结束后剖取晶状体 ,制备水溶性蛋白溶液 ,进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,用薄层扫描仪进行电泳图谱分析。结果 :造型组相对应Rf的蛋白含量( % )均有不同程度改变 ;复方参果液大、小剂量组各Rf的蛋白含量 ( % )较造型组有不同程度的改善 ,其中Rf1 0、Rf0 85、Rf0 82和Rf0 77的蛋白含量 ( % )接近正常对照组。结论 :复方参果液对半乳糖性白内障晶状体水溶性蛋白组分改变有一定的纠正作用。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离拟南芥叶片实验教学的改进

目的:改进拟南芥叶片的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离拟南芥叶片。主要比较和分析了两种样品溶解液和两种染色方法对实验的影响。改进的样品溶解液可防止样品的损失,节约样品和试剂;改进的染色方法操作时间短,灵敏度高,分离条带多且清晰。结论:改进的实验方法可以得到更为灵敏、清晰的实验结果,同时节约了实验经费和实验时间,减少了实验准备人员的工作量,更好地适应和促进了实验教学工作。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测新疆特种乳中掺加的牛乳

新疆特种乳资源丰富,具有重要的商业价值。近年来乳制品掺假问题时有发生,准确鉴别特种乳中乳源动物成分,防止牛乳掺假具有重要的意义。本研究采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)对驼乳、马乳、驴乳、山羊乳与牛乳等特种乳的乳清蛋白及酪蛋白进行乳间差异性分析,建立基于牛乳特征蛋白质多态性的检测方法,并研究不同热处理工艺对检测方法稳定性、灵敏度的影响。结果表明,牛β-乳球蛋白可作为特种乳中掺加牛乳的检测靶标,热处理会使样品中蛋白质发生变性,导致掺加牛乳检出限的升高。基于牛β-乳球蛋白的条带强度与牛乳掺加百分比建立回归方程,相关系数为0.9779~0.9998,定量范围在5%~100%之间。本研究为新疆特种乳中掺加牛乳的检测,提供了一种准确、灵敏和经济的方法。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验教学尝试

对SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了开放性实验教学尝试。学生不受传统实验的限制，在教师的指导下根据实验题目查资料、设计实验步骤、选择实验器材进行实验，得到了清晰的电泳图谱，并时电泳图谱进行分析。

复方参果液对大鼠半乳糖性白内障晶状体生化的影响(Ⅱ)——尿素溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的 :探讨复方参果液防治白内障的作用机理。方法 :大鼠用半乳糖诱发白内障 ,同时灌胃给药。剖取晶状体 ,制备尿素溶性蛋白溶液 ,进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,用薄层扫描仪进行电泳图谱分析 ,蛋白质分子量用相对迁移率 (Rf)表示。结果 :与正常组比较造型组尿素溶性蛋白相对应的Rf含量 ( % )均有不同程度改变。复方参果液大、小剂量组各Rf含量 ( % )较造型对照组有不同程度的改变 ,Rf 1.0、Rf 0 .93、Rf 0 .88和Rf 0 .75蛋白含量 ( % )接近正常对照组。结论 :复方参果液对半乳糖性白内障晶状体尿素溶性蛋白组分改变有一定的纠正作用。