SDS-蛋白酶法分离棉花cpDNA及psbA基因启动子、终止子克隆

采用SDS-蛋白酶法提取了棉花的叶绿体DNA。琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的叶绿体DNA质量高。用所提取的叶绿体DNA作为模板进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱。同时以所提取的叶绿体DNA作为模板,以psbA基因启动子、终止子序列设计引物,成功地扩增出预期为312bp和382bp的目标片段。将目标片段克隆测序,经Blantn分析,结果表明上述片段正是psbA基因启动子、终止子序列。该方法与传统的提取方法相比省时、高效、无污染,为进一步开展棉花叶绿体基因工程奠定了良好基础。

粘菌基因组DNA提取方法的研究

针对粘菌标本(孢子)数量少、形态微小等特点,分别采用CTAB法、SDS法、蛋白酶K法4和SDS-蛋白酶K4种方法,提取基因组DNA。所得DNA完整,可用于RAPD等研究。

蚂蚁基因组DNA提取方法比较

对蚁科3种蚂蚁分别用SDS-蛋白酶K消化法和2种改进的盐提取法进行基因组总DNA的提取。结果表明,SDS-蛋白酶K消化法和饱和氯化钠提取法均能从标本获得基因组DNA;而乙酸钾提取法获得的DNA太少且纯度低,琼脂糖凝胶电泳DNA条带弥散现象严重。通过比较综合分析,蚂蚁DNA提取的最优方法是SDS-蛋白酶K消化法。

适于涡虫基因组DNA快速制备的改良的CTAB法

提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。

白菜叶绿体DNA快速提取及分析

采用SDS-蛋白酶法提取了白菜的叶绿体DNA.琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的叶绿体DNA质量高,除cpDNA主环外,在胞质雄性不育新种质及原不育系中还存在约1375bp和831bp的两条质粒分子.用所提取的叶绿体DNA作为模板进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.该方法与传统的提取方法相比省时、高效、无污染.

不结球白菜线粒体DNA的提取及分析

采用SDS—蛋白酶K法提取了不结球白菜黄化苗的线粒体DNA,经琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的DNA纯度高,足以进行后续的研究工作。以所提取的线粒体DNA为PCR进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱。

拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科 8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本 ,分别用SDS 蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取 .经 5次重复实验 ,结果表明 ,用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA ,且DNA得率较高 ;而对于无水乙醇保存的标本 ,提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带 ,说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化 ,致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA .通过对比实验 ,分析原因 ,阐明了两种方法的优缺点 ,并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法 .

提取大鼠毛发核酸3种方法的比较

目的 :探讨提取大鼠毛发核酸的可靠方法。方法 :分别用PCR缓冲液法、SDS 蛋白酶K法和Chelex 10 0法从大鼠毛发中提取核酸 ,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析 ,并对 3种方法进行比较。结果 :从毛囊提取mtDNA的成功率 ,SDS 蛋白酶K法 (2 2 .5 0 % )分别与PCR缓冲液法 (6 4 .17% )和Chelex 10 0法(6 7.5 0 % )比较 ,差异均有统计学意义 (χ12 =4 2 .4 2 1,χ2 2 =2 8.80 0 ,均P <0 .0 1) ;PCR缓冲液法与Chelex 10 0法比较 ,差异无统计学意义 (χ2 =0 .2 96 ,P >0 .0 5 )。提取核DNA的成功率 ,SDS 蛋白酶K法 (6 0 .0 0 % )分别与PCR缓冲液法 (90 .0 0 % )和Chelex 10 0法 (90 .83% )比较 ,差异均有统计学意义 (χ12 =4 9.0 91,χ2 2 =30 .76 7,均P<0 .0 1) ;PCR缓冲液法与Chelex 10 0法比较 ,差异无统计学意义 (χ2 =0 .0 4 8,P >0 .0 5 )。PCR缓冲液法不能从毛干中提取核酸 ,SDS 蛋白酶K法不能从 1、2根鼠毛中提取mtDNA ,而Chelex 10 0法可从毛干和单根鼠毛中提取mtDNA和DNA。结论 :Chelex 10 0法对从毛发中提取核酸较为合适。