蚂蚁基因组DNA提取方法比较

对蚁科3种蚂蚁分别用SDS-蛋白酶K消化法和2种改进的盐提取法进行基因组总DNA的提取。结果表明,SDS-蛋白酶K消化法和饱和氯化钠提取法均能从标本获得基因组DNA;而乙酸钾提取法获得的DNA太少且纯度低,琼脂糖凝胶电泳DNA条带弥散现象严重。通过比较综合分析,蚂蚁DNA提取的最优方法是SDS-蛋白酶K消化法。

粘菌基因组DNA提取方法的研究

针对粘菌标本(孢子)数量少、形态微小等特点,分别采用CTAB法、SDS法、蛋白酶K法4和SDS-蛋白酶K4种方法,提取基因组DNA。所得DNA完整,可用于RAPD等研究。

4种硅藻检验方法的比较研究

目的比较硝酸乙醇法、酶消化法、“破机罐”法和Soluene-350法在检验硅藻中各自的优缺点,为法医实际办案提供理论依据。方法取家兔肝、肾和骨髓3种组织各2g,分别用上述4种方法消化,比较4种不同方法分别将组织这些完全消化所需要的时间、消化能力、对硅藻的检出率以及对硅藻的破坏程度。结果消化时间以Solu-ene-350法耗时最长,其次是酶消化法,硝酸乙醇法和破机罐法耗时最短。4种方法消化能力的强弱依次是“破机罐”法、硝酸乙醇法、酶消化法、Soluene-350法。对梅尼小环藻(淡水)和桥弯藻(淡水),酶消化法的检出率最高,硝酸乙醇法其次,“破机罐”法和Soluene-350法最低。对舟形藻(海水),酶消化法的检出率高,其余3种方法几乎没检测到。扫描电镜观察:酶消化法对硅藻结构几乎没有破坏。其余3种方法对硅藻均有不同程度的破坏。结论从降低成本、提高检测效率角度,应选择“破机罐”法和硝酸乙醇法;从安全性和环保角度,或可疑水样为海水及硅藻密度较小时,应选择酶消化法;Soluene-350法因耗时长、成本高且硅藻检出率低,不适于在基层法医中推广。

适于涡虫基因组DNA快速制备的改良的CTAB法

提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。

血清丙肝病毒RNA二种提取方法的比较

２４例抗－ＨＣＶ阳性的血清标本，同时以硫氰胍半字符热酚变性方法和蛋白酶ＫＩ肖化法裂解提取丙肝病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ），并应用反转录半字符多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ。结果表明，硫氰胍半字符热酚法明显优于蛋白酶Ｋ消化法。前者处理标本的阳性检出率为５８．３％，后者处理标本的阳性检出率为３３．３％（Ｐ＜０．０５）；前者操作步骤简便，在试剂的保存等方面优于后者。

拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科 8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本 ,分别用SDS 蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取 .经 5次重复实验 ,结果表明 ,用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA ,且DNA得率较高 ;而对于无水乙醇保存的标本 ,提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带 ,说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化 ,致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA .通过对比实验 ,分析原因 ,阐明了两种方法的优缺点 ,并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法 .

不结球白菜线粒体DNA的提取及分析

采用SDS—蛋白酶K法提取了不结球白菜黄化苗的线粒体DNA,经琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的DNA纯度高,足以进行后续的研究工作。以所提取的线粒体DNA为PCR进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱。

提取大鼠毛发核酸3种方法的比较

目的 :探讨提取大鼠毛发核酸的可靠方法。方法 :分别用PCR缓冲液法、SDS 蛋白酶K法和Chelex 10 0法从大鼠毛发中提取核酸 ,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析 ,并对 3种方法进行比较。结果 :从毛囊提取mtDNA的成功率 ,SDS 蛋白酶K法 (2 2 .5 0 % )分别与PCR缓冲液法 (6 4 .17% )和Chelex 10 0法(6 7.5 0 % )比较 ,差异均有统计学意义 (χ12 =4 2 .4 2 1,χ2 2 =2 8.80 0 ,均P <0 .0 1) ;PCR缓冲液法与Chelex 10 0法比较 ,差异无统计学意义 (χ2 =0 .2 96 ,P >0 .0 5 )。提取核DNA的成功率 ,SDS 蛋白酶K法 (6 0 .0 0 % )分别与PCR缓冲液法 (90 .0 0 % )和Chelex 10 0法 (90 .83% )比较 ,差异均有统计学意义 (χ12 =4 9.0 91,χ2 2 =30 .76 7,均P<0 .0 1) ;PCR缓冲液法与Chelex 10 0法比较 ,差异无统计学意义 (χ2 =0 .0 4 8,P >0 .0 5 )。PCR缓冲液法不能从毛干中提取核酸 ,SDS 蛋白酶K法不能从 1、2根鼠毛中提取mtDNA ,而Chelex 10 0法可从毛干和单根鼠毛中提取mtDNA和DNA。结论 :Chelex 10 0法对从毛发中提取核酸较为合适。

一种从蠕虫组织切片中提取DNA作PCR鉴定虫种的简便方法

目的建立一种实用于临床病理鉴别诊断组织切片内蠕虫虫种的分子病理学方法。方法制作已知的和从临床收集的多种蠕虫和宿主组织病理切片标本,用改良蛋白K消化法对各种蠕虫切片的白片、HE染色片和免疫组化片组织提取DNA;设计合成检测并殖吸虫、曼氏裂头蚴和猪囊虫各自特异性基因片段的引物,分别对各DNA提取物作PCR扩增,经凝胶电泳观察目的基因片段;比较分析三种蠕虫各自最小组织量检测的敏感性和特异性。结果对三种蠕虫所选用的引物均可扩增出清晰的特异性目的条带。用改良蛋白K消化法提取蠕虫DNA可PCR扩增出目的片段的敏感性均优于商品化试剂盒提取法,可提出DNA的最小组织面及厚度为:肺吸虫的为1.50 mm2,10μm;曼氏裂头蚴的为4.87 mm2,5μm;猪囊虫的为5.80 mm2,5μm。经10个临床标本检测均获得理想结果。结论本研究成功地探索出一种对病理切片中微量组织提取DNA作PCR鉴定虫种的简便方法,为病理诊断提供了进一步鉴别此3种蠕虫的分子病理学手段。

一种快速、经济提取外周凝血基因组DNA方法的建立

目的:建立一种经济、快速且高质量提取人体外周凝血DNA的方法。方法:摸索最佳的匀浆条件,对外周凝血块进行匀浆,采用KI法对匀浆液进行基因组DNA的提取,通过凝胶电泳、单重PCR和多重PCR检测凝血基因组DNA的提取产量和质量,并分别与常规的凝血基因组DNA提取方法,即蛋白酶K消化法,以及提取抗凝血基因组DNA的KI法进行比较分析。结果:最佳的匀浆条件为:39000 rmp,15秒。在此条件下提取的基因组DNA完整性好,纯度和产量与蛋白酶K消化法提取凝血DNA和KI法提取抗凝血DNA的结果相比,没有统计学差异。单重PCR和多重PCR也获得了理想的扩增结果。结论:与常规的外周凝血提取方法相比(蛋白酶K消化法),本方法节省了时间和成本,能快速、经济、有效地提取外周凝血基因组DNA,可用于后续的科研和临床诊断需要,解决了部分科研机构血液基因组DNA的样本来源问题。